大鼠肾小球系膜细胞表型的增龄性变化

目的观察大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞表型及功能的变化特点。方法取3、12、24月龄健康雄性Wistar大鼠原代系膜细胞进行培养,MTT法检测细胞增殖能力,进行SA-β-gal染色,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测p21WAF1/CIP1/SDI1基因及蛋白质的表达变化,并用免疫荧光法检测系膜细胞中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达与定位。结果大鼠肾小球系膜细胞增殖能力随增龄逐渐减弱(P<0.05),SA-β-gal染色阳性率随增龄逐渐增加(P<0.05),p21WAF1/CIP1/SDI1mRNA及蛋白质表达随增龄逐渐增加(P<0.05)。免疫荧光结果示p21WAF1/CIP1/SDI1主要在细胞核内表达,荧光强度随增龄逐渐增强(P<0.05)。结论大鼠肾小球系膜细胞随增龄细胞形态、增殖能力与衰老相关蛋白表达发生明显改变,出现了复制性衰老表型。

大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白随增龄变化的研究

目的研究大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）随增龄表达的变化规律。方法选取3月龄、12月龄及24月龄健康大鼠，分别取大鼠肾组织及原代系膜细胞做衰老相关β-半乳糖苷酶活性（SA-β-gal）染色，采用反转录多聚酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法（Western blot assay）分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织和细胞中mTOR及磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达变化，采用免疫组化和荧光法分别检测mTOR在肾组织及细胞中的表达与定位。结果随增龄，大鼠肾脏组织SA-β-gal活性增强，且肾小球系膜细胞SA-β-gal染色阳性率逐渐增加，3、12及24月龄阳性率分别为（11．93．6）％，（39．0±4．0）％及（86．9±7．4）％，mTOR mRNA表达随增龄逐渐增强，不同月龄比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Western印迹亦显示mTOR及p-mTOR蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强（P〈0．05）。免疫组化结果显示，mTOR蛋白表达于大鼠肾小球系膜区，其在肾小管-间质也有表达；随增龄，与增龄所致的肾脏病变呈正相关性（与增龄引起小球及小管-间质病变的相关性分别为r=0．838；r=0．742，均为P〈0．01）；免疫荧光结果显示，mTOR在大鼠系膜细胞胞浆及胞核内皆有表达，随增龄表达的荧光强度逐渐升高（P〈0．05）。结论mTOR在大鼠肾组织及肾小球系膜细胞中的表达随龄增加，其可能参与了肾脏衰老的进程。

大鼠肾脏组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白增龄性的表达变化

肾脏是衰老较快的器官之一，随年龄的增长出现肾小球肥大、系膜增生、肾小球硬化和肾小管-间质纤维化等病理变化。但这一现象的分子机制并不完全清楚。研究发现，雷帕霉素可显著抑制糖尿病肾病早期及单侧肾切除后代偿性的肾小球肥大，并且它还能减轻蛋白尿相关的肾小管-间质的炎性反应及纤维化。

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响及其可能涉及的途径。方法高糖培养GMC,以不同剂量雷帕霉素干预,MTT及流式细胞仪等方法观察雷帕霉素对细胞增殖和周期的影响,RT-PCR、Western印迹观察细胞Cyclin D1、CyclinE和p27^(KIP1)的变化。结果高糖刺激下,GMC增殖明显;雷帕霉素能抑制这一作用,且呈剂量依赖性,并下调Cyclin D1、Cyclin E的基因及蛋白水平,上调p27^(KIP1)的蛋白表达;与对照组相比,高糖组G_0/G_1期细胞减少,S期细胞比例增加(P均<0.05);雷帕霉素干预后,G_0/G_1期细胞升高,S期细胞比例减少(P均<0.05)。结论雷帕霉素可抑制高糖状态下GMC的增殖,且呈剂量依赖性;其可能机制是通过下调Cyclin D1、Cyclin E及上调p27^(KIP1),参与了G_1/S期阻滞。