Celecoxib对羟基脲抗K562细胞增殖作用的增敏效应和机制

目的 :确定celecoxib对羟基脲的抗K5 6 2细胞增殖作用是否存在增敏效应并探讨其分子机制。方法 :用低剂量celecoxib(4 0 μmol/L)、羟基脲 (10mmol/L)以及二者合用分别干预K5 6 2细胞 ,用MTT试验、DNA裂解片段分析、Western印迹及RT PCR技术分析药物对K5 6 2细胞增殖、凋亡的影响和机制。结果 :4 0 μmol/Lcelecoxib与10mmol/L羟基脲共同干预K5 6 2细胞 ,较之单用低剂量的Celecoxib或羟基脲抑制K5 6 2细胞增殖活力和诱导细胞凋亡效应更明显。Celecoxib联合羟基脲可明显抑制K5 6 2细胞环氧化酶 2 (COX 2 )蛋白和mRNA表达。结论 :Cele coxib对羟基脲的抗K5 6 2细胞增殖作用具有增敏效应 ,其机制可能与药物下调K5 6 2细胞COX

大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者血浆IgG亚型及FⅧ结合表位鉴定

目的确定1例大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者的临床和实验室诊断；通过体内外干预实验观察获得性血友病A患者体内的FⅧ抑制物对正常人血浆及兔FⅧ凝血活性（FⅧ：C）的影响；确定患者FⅧ抑制物的IgG亚型和结构表位，以揭示该病发病的分子机制。方法用Ⅰ期法测定患者血浆FⅧ：C；以Bethesda单位（BU）表示FⅧ：C抑制物滴度；用蛋白A一琼脂糖柱纯化患者及正常人血浆IgG；用活化部分凝血活酶时间（APTT）分析其对FⅧ：C的抑制作用；观察FⅧ抑制物对兔血浆FⅧ：C活性的抑制作用；分别用抗IgG1、IgG2、IgG3、IgG4抗体作Western blot，结合灰度扫描确定患者血浆IgG亚型相对表达量；散射比浊法测定患者及正常人体内各IgG亚型浓度；用FⅧ／FⅧ抑制物固相结合试验及Western blot鉴定患者IgG抗体（FⅧ抑制物）作用于FⅧ的具体“表位”。结果①患者APTT明显延长，正常血浆不能纠正；FⅧ：C〈1．5％，FⅧ抑制物滴度为147．8BU；②纯化的患者IgG以剂量依赖方式抑制正常人混合血浆FⅧ：C；动物实验显示患者血浆能以时间依赖方式延长兔血浆APTT；@Western blot结果显示FⅧ抑制物成分主要为IgG4，其次为IgG1，FⅧ抑制物作用于FⅧ：C的结构相对分子质量为44×10^3。散射比浊法测定结果显示患者体内IgG4、IgG4含量明显高于正常人。结论研究结果证明大疱性类天疱疮并获得性血友病A患者体内FⅧ抑制物对FⅧ：C有抑制作用，FⅧ抑制物的IgG亚型主要为IgG4，其次为IgG1；患者FⅧ抑制物作用于FⅧ的表位为相对分子质量为44×10^3的肽段，揭示了该获得性血友病A发生、发展的分子机制。

多发性骨髓瘤Treg和Th17细胞水平变化及转录因子Foxp3、ROR-γt基因表达与临床意义

目的:通过分析多发性骨髓瘤(MM)患者外周血Treg细胞、Th17细胞比例及对应的特异转录因子Foxp3、ROR-γt mRNA的表达水平,探讨其与MM分期及预后的关系。方法:收集43例MM患者(MM组)和20例健康对照者(对照组)外周血标本,分离单个核细胞,应用流式细胞术检测Treg细胞和Th17细胞占CD4+T细胞比例,同时应用QRT-PCR方法检测Foxp3、ROR-γt mRNA的相对表达量,并与MM的临床分期及化疗的影响进行相关分析。结果:①MM组外周血Treg细胞/CD4+T细胞比例、Foxp3mRNA表达均较对照组显著升高(均P<0.05),且Ⅲ期患者增加程度较Ⅰ、Ⅱ期患者更为明显,但差异无统计学意义。化疗后复治MM患者Treg细胞比例较未化疗初治患者显著降低(P<0.05)。②MM组外周血Th17细胞/CD4+T细胞比例较对照组差异无统计学意义,而ROR-γt mRNA表达水平较对照组显著升高(P<0.05)。化疗后复治MM患者ROR-γt mRNA表达水平较未化疗初治患者显著性下降(P<0.05)。结论:MM患者外周血Treg细胞比例及Foxp3mRNA表达水平明显升高,并与疾病分期有关,且化疗后复治MM患者较初治患者低,提示Treg细胞可能参与MM患者肿瘤细胞免疫逃逸及恶性增殖。MM患者外周血单个核细胞ROR-γt mRNA表达明显升高,而化疗可以抑制ROR-γt mRNA表达。