pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1shRNA及pcDNA3.1介导的TGF-β_1反义RNA抑制人腹膜间皮细胞TGFβ_1的表达及细胞外基质的分泌

目的 研究转化生长因子 β1(TGF - β1)短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)和TGF - β1反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)TGF - β1表达及细胞外基质分泌的影响。方法 利用带有U6启动子的pcDNA3.1(- )载体 (命名为pcDU6)构建TGF - β1短发夹RNA的产生质粒 ,用pcDNA3.1(- )载体构建反义TGF - β1基因真核表达载体 ,采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子 β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF - β1RNA的pcDNA3.1(- )的载体质粒入高糖 (4 .2 5 %D -葡萄糖 )和细菌脂多糖 (LPS)刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT -PCR)半定量分析HPMC中TGF - β1mRNA的表达以及纤维连接蛋白 (FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF- β1蛋白质水平。结果 HPMC在高糖 (4 .2 5 %D -葡萄糖 )和细菌脂多糖 (LPS)的刺激下可明显上调TGF -β1的表达 (P <0 .0 1) ,TGF - β1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4小时后 ,FN、ColⅠ、PAI- 1mR NA分别下调 17.0 %、2 6 .0 %、9.6 % (P <0 .0 5 )。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子