中南大学实验动物屏障环境运行初期总结

目的对中南大学实验动物屏障设施的初期运行管理进行总结。方法在实践的基础上,制订了一系列的管理措施,分别对屏障设施运行中人员、动物和物品的管理、规章制度的完善和设施的消毒净化进行了修改完善。结果通过严格执行各项管理措施,保证了实验动物的质量,建立科学、优质、高效的实验动物服务平台,更好的服务于本校的教学科研。结论只有通过严格的管理,才能保证实验动物屏障设施的正常运行。

东方田鼠自发性年龄相关性白内障的鉴定

目的:年龄相关性白内障是成人白内障中最常见的类型,也是主要的致盲眼科疾病。目前关于年龄相关性白内障动物模型的建立报道较少。本课题组在东方田鼠实验动物化培育过程中首次发现12~15月龄东方田鼠能自然发生白内障。本研究通过对东方田鼠自发性白内障进行鉴定分析,探讨其发展成为年龄相关性白内障动物模型的可能性。方法:分别选用12月龄健康东方田鼠为对照组和12月龄白内障东方田鼠为实验组。通过裂隙灯生物显微镜观察晶状体透明度;苏木精-伊红染色观察东方田鼠的晶状体病理变化;生物化学方法测定2组东方田鼠的血常规、血糖水平及血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSHPx)活性。最后通过实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测2组东方田鼠晶状体中白内障发病相关基因的转录水平。结果:与对照组比较,实验组东方田鼠的晶状体呈现不同程度的浑浊,晶状体结构被严重破坏,晶状体上皮细胞出现明显肿胀、大量空泡、变性/坏死、钙化、增生和纤维液化等病理变化,纤维结构紊乱,分布不规则,变性的晶状体纤维中有马氏小体聚集。与对照组比较,实验组东方田鼠的血糖水平差异无统计学意义(P>0.05),白细胞数量(P<0.05)、淋巴细胞数量(P<0.01)、淋巴细胞比率(P<0.05)均显著降低,而中性粒细胞百分比(P<0.05)和单核细胞比率(P<0.01)均显著增加,血清中SOD和GSH-Px活性均降低(均P<0.05);实验组东方田鼠晶状体中白内障发病相关基因CRYAA、CRYBA1、CRYBB3、Bsfp1、GJA3、CRYBA2、MIP、HspB1、DNase2B和GJA8的mRNA水平均显著降低(均P<0.05)。结论:白内障东方田鼠与健康东方田鼠相比,晶状体病理变化、过氧化物酶水平和白内障相关基因表达均有显著差异。东方田鼠自发性白内障具有年龄相关性,白内障东方田鼠有望发展成为年龄相关性白内障研究的理想动物模型。

野生东方田鼠实验动物化及种质资源保护的初步研究

东方田鼠是我国具有潜在应用价值的野生动物资源 ,我们从 1998年开始经历五年对它从生态学、动物学、病理学、遗传学、免疫学、分子生物学等方面进行的系列研究。不但进一步证实了它的抗日本血吸虫生物学特性 ,而且初步探讨了抗日本血吸虫的机理 ,成功地培育了封闭群东方田鼠 ,摸索了对它进行遗传监测的可能方法 ,对东方田鼠长江亚种和宁夏指名亚种基因组采用系统发育树分析方法 ,分析和比较了两个亚种的亲缘关系 ,显示它们的基因组DNA明显分为两大组别 ;此外 ,发现了新的病理生物学特征 ,开拓了应用领域。本文还从理论上论述了野生动物实验动物化和种质资源保护的研究策略 。

动物实验“3R”方法的发展概况

在生物学和医学的实验教学和科研工作中 ,动物常被用作实验对象。长期以来 ,实验动物科学者一直面临着动物实验伦理学和如何避免及减少动物受伤害的途径和措施问题。减少、替代和优化动物实验的“3 R”理论的提出 ,为解决这些问题提供了有效的途径和方法。文章综述了“3 R”理论的形成与发展 ,以及现代“3 R”理论研究的概况 。

诱发性东方田鼠糖尿病动物模型的初步研究

采用STZ常规方法,对封闭繁育的不同年龄组的东方田鼠进行了诱发性糖尿病动物模型的初步研究和观察。结果STZ同样可以在其身上制作糖尿病模型,按常规剂量(50mg/kg)能使动物制模,而极端剂量(250mg/kg)太大,并在用药2～3天内,动物死亡。经病理组织学观察:见胰岛毛细血管扩张、充血、胰岛细胞减少,胰岛β细胞空泡变性;肝组织部分区域呈急性炎症病变特征,以渗出炎症细胞(主要为粒细胞)为主。用免疫组化检查P53基因表达情况,在成年组有2只东方田鼠P53基因表达呈阳性结果。说明STZ能促进细胞的分化与凋亡,抑制细胞的增殖。

野生东方田鼠实验动物化及种质资源保护的初步研究

人们常说种瓜得瓜，种豆得豆，原因就出自物种的遗传信息，也就是说是由它的种质决定的。动物种质资源是动物在不同生态条件下经过上千年的自然演变形成的，蕴藏着各种潜在的可利用基因，是国家的宝贵财富，是人类繁衍生存和发展的物质基础。一些发达国家早已启动了一些生物资源的基因组计划，将试图从资源基因的发现与开发着手，用转基因、个体克隆等技术培育出高产、抗病、优质、美味的动、植新品种。

大豆异黄酮对老龄大鼠雌激素水平和子宫雌激素受体表达的影响

目的探讨大豆异黄酮(soy isoflavones,SIF)对老龄大鼠雌激素水平和雌激素受体表达的影响。方法将40只16月龄雌性SD大鼠随机分为高、中和低剂量大豆异黄酮3个实验组(H-SIF,M-SIF和L-SIF)和1个对照组,每天分别按1005、0和25 mg/(kg.bw)剂量的大豆异黄酮进行灌胃,对照组灌服生理盐水。42 d后称重,股动脉放血处死动物收集血清、摘取子宫称重并冷冻保存。采用放射免疫法测定血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、泌乳素(PRL)、促黄体生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)的含量;RT-PCR检测子宫雌激素受体α(ERα)基因的表达。结果与对照组相比,3个实验组血清中E2和PRL都升高,LH和FSH都降低,其中高剂量组差异有显著性(P<0.05);子宫重量无明显差异;子宫ERα表达呈下降趋势,但无统计学意义。结论大豆异黄酮能调节老龄大鼠血清中的雌激素水平,且有剂量依赖性;大豆异黄酮对老年大鼠子宫重量和子宫ERα的表达无影响。

封闭群东方田鼠的病理学特征观察

观察了东方田鼠封闭群在不同年龄阶段各种病理学变化的特征 ,为建立东方田鼠相关标准创造条件。采用常规病理学技术 ,结合电镜方法 ,对不同年龄的 4 6只封闭繁育的东方田鼠进行了研究和观察。结果封闭群东方田鼠的病理变化主要集中在肺脏与肝脏 ;个别东方田鼠有乳腺癌和隐睾 ,东方田鼠乳腺癌的电镜特征与昆明小鼠有所不同 ;封闭繁育的东方田鼠主要病变有 8种 ;不同年龄的东方田鼠病变的发生率亦不相同。因此 ,封闭群东方田鼠应加强病理监测 ,根据病理监测结果 ,有目的地分离病原生物体。

封闭繁殖的成年东方田鼠心电图分析

记录并分析 2 4例麻醉东方田鼠体表心电图。结果表明 ,( 1 )Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVF导联波形较稳定 ,主波向上 ,各波较明显 ;( 2 )aVR及部分aVL导联主波向下多见 ,QRS波群形态多样复杂 ;( 3)各导联T波不对称 ,无明显S T段 ,且不在等电位线上 ;( 4 )与大鼠相比各导联波幅值均较低 ,心率较快。

环境光照对东方田鼠自主活动等行为的影响

目的了解不同环境光照对东方田鼠行为的影响,为制订东方田鼠环境标准提供依据。方法利用动物行为观察装置,观察三组东方田鼠在不同环境光照条件下的自主活动、玩耍、摄食、饮水等行为表现并进行定量测定和分析。结果 24 h黑暗(24D)组的东方田鼠自主活动总数最多,而24 h光照(24L)组则最少,12L/12D组跟24D组接近:无论是24L,还是24D处理,动物的相对活动没有明显的节律性,但在12L/12D条件下,动物活动节律随着光照处理而变化,呈现其一定的节律性。玩耍行为12L/12D组最多,但24D组动物玩耍行为比24L组多;当24L处理时,动物很少处于中央格,而24D处理和12L/12D处理时,动物有不同程度穿梭中央格,其中12L/12D处理时,动物穿梭次数最多;摄食与饮水次数12L/12D组次数最多,24L组次数最少。结论室内有规律的环境光照处理,可改变东方田鼠固有的依季节变化的行为规律,产生实验室控制的光周期应答行为,并表明12L/12D环境光照比24L和24D环境光照对东方田鼠造成的生活压力要小。

东方田鼠卵巢癌模型病理学观察

在已建立的东方田鼠封闭群中,收集了12例患有自发性卵巢癌的病鼠,对其进行了病理观察和病理组织学分类,并通过透射电镜和扫描电镜,观察了它们的超微结构和细胞表面改变。结果发现东方田鼠自发性卵巢癌以腹水和恶病质为其主要临床表现,以类似于人类Ⅰ级和Ⅱ级浆液上皮性卵巢癌为其病理组织学特点。通过病理学比较,认为东方田鼠上皮性卵巢癌与人类上皮性卵巢癌极为相似,可作为一种极有价值的卵巢癌动物模型。

兔出血症病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的兔出血症病毒的VP60基因序列,设计了2对引物,建立了检测兔出血症病毒的套式PCR检测方法.先用外引物扩增一段389bp的DNA片断,继而用内引物以扩增产物为模板进行第2次扩增(即套式PCR),以提高结果的准确性,避免一次性PCR的假阳性结果.用该方法对12份RHD样本进行检测,检出率为100%.

BALB/c-HSF1基因剔除小鼠的引种、保种与繁殖特性的观察

对引入的BALB c HSF1基因剔除小鼠近一年的繁殖、生长发育情况进行了系统观察 ,并就三种繁殖方式的繁殖鼠交配率、受胎率、分娩率、胎间隔及哺乳期仔鼠成活率进行了比较。结果表明 ,与野生型(HSF1 + + )动物比较 ,HSF1的缺乏对动物的繁殖有一定影响 ;胎间隔与动物的胎次无明显的相关性 ,而生长曲线与BALB c的生长曲线类似 ,这种现象可能与HSF1基因剔除小鼠有BALB c的血缘有关。

低浓度臭氧对小鼠生殖生理的影响

目的 观察低浓度臭氧对小鼠生殖生理的影响。方法 试验组小鼠和对照组小鼠分别在 15w紫外灯照射产生的低浓度臭氧环境下和正常无臭氧环境下连续饲养 7周 ,阴道涂片镜检观察雌性小鼠的动情周期。 7周后 ,观察雄性小鼠的精子畸形率、早期精细胞微核率 ;利用放免试剂盒测定雄性及雌性小鼠血清中性激素的水平 ;并取睾丸、卵巢制作组织切片 ,观察是否有组织病理学改变。结果 试验组雌性小鼠体重与对照组雌性小鼠差异无统计学意义 ,试验组雄性小鼠体重比对照组雄性小鼠轻 ;试验组雌性小鼠的动情周期与对照组雌性小鼠差异无统计学意义 ;试验组小鼠的精子畸形率、早期精细胞微核率和血清性激素水平与对照组小鼠差异无统计学意义 ;试验组和对照组的睾丸、卵巢组织切片均未发现异常。结论 本实验中紫外灯照射产生的低浓度臭氧对昆明小鼠的生殖生理基本没有影响。

日本血吸虫合成表位肽疫苗对小鼠的保护性免疫

为观察日本血吸虫合成表位多肽疫苗诱导的保护性免疫,将用日本血吸虫抗原免疫血清筛选噬菌体随机12肽库得到的、具有较好免疫保护性的4个模拟抗原表位短肽进行人工合成,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测它们的抗原性.将合成多肽分别与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)连接后免疫昆明小鼠,第3次免疫后收集血清,检测其针对各个多肽和可溶性成虫抗原(AWA)的IgG抗体滴度,以及补体介导的小鼠体外杀日本血吸虫童虫作用.结果显示,4个合成多肽均能被相应的抗体识别,具有良好的抗原性;能诱导产生特异性IgG抗体.这些抗体在补体参与下能在体外有效毒杀血吸虫童虫.与正常小鼠血清比较,4个合成多肽免疫血清的杀童虫率分别为31.7%,41.3%,21.1%和17.3%,均具有显著性;与KLH免疫血清相比时,杀童虫率分别为23.7%,34.4%,11.8%(P=0.077,无显著性)和7.5%(P=0.102,无显著性).这些结果表明,这4个合成表位多肽具有良好的抗原性和免疫原性,与KLH连接后能诱导明显的抗体反应和显著的细胞毒作用.

用数据库搜索法寻找东方田鼠微卫星引物

目的借助微卫星具有的多态性和引物通用性的特点,寻找东方田鼠的微卫星引物。方法用数据库搜索法及生物信息学分析原理,并用PCR法证实这些微卫星引物的存在。结果初步筛选出D2mgh10、D1mgh12、D2mit16具有东方田鼠微卫星序列特点。结论表明异种微卫星引物可在东方田鼠转移使用。

热休克蛋白27、70和90在东方田鼠自发性卵巢癌中的表达

目的观察主要类型热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)27、70和90在东方田鼠卵巢癌组织中的表达。方法用SP免疫组化法检测8例东方田鼠卵巢癌组织中HSP27、HSP70和HSP90的表达并用正常卵巢组织作对照。结果HSP27、HSP70和HSP90在东方田鼠卵巢癌中表达的阳性率分别为100%、100%和62.5%,在正常卵巢组织中均为阴性。结论HSP27、HSP70在东方田鼠卵巢癌中呈高表达,HSP90呈低表达或不表达。