医学寄生虫学教学改革初探

医学寄生虫学在整个医学教育中是一门重要的基础课。随着社会的发展和对医学人才需求的变化，为了提高教学质量，结合教研室的实际情况，在教学内容和教学手段上进行了初步的改革探索。

日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。

用组织化学方法鉴别日本血吸虫细胞来源的研究

目的 探讨用组织化学方法鉴别血吸虫体外培养细胞来源或种类的可能性。 方法 取日本血吸虫肝期童虫 ,经酶消化处理后取混合细胞涂片 ,用成虫制作组织切片。将细胞涂片和组织切片分别平行作高碘酸 希夫氏(PAS)、硫堇 (Thionin)、嗜银反应 (根据Grimeliu s)、苦味酸 酸性品红 (根据VanGieson ,VG)、甲苯胺蓝 (Tolui dineblue ,TB)和苏木素 伊红 (HE) 6种组织化学方法染色。光镜下比较观察 ,判定结果。 结果 PAS染色的大细胞呈亮红色与组织切片中卵黄腺着色接近 ,表明着色的大细胞来源于卵黄腺 ;含特有尼氏体的神经细胞胞浆被硫堇染色呈深蓝色 ;Grimeliu s染色的细胞和消化道上皮细胞均呈黑色 ;VG染色 ,部分细胞和虫体肌纤维组织均呈黄色 ;TB染色 ,细胞涂片仅见 1个紫红色细胞 ,组织切片未见相同颜色的组织和细胞。 结论 PAS、硫堇、Grimeliu s、VG、TB和HE 6种组织化学染色 ,对体外培养的血吸虫细胞的显色特征与虫体相应器官或组织细胞的化学染色定位相一致。本法可用于鉴别血吸虫体外培养细胞的来源或种类 ,且操作简便、快速。

日本血吸虫尾蚴66～68kD单特异性血清对尾蚴cDNA文库的免疫学筛选

目的:获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)尾蚴66～68 kD抗原的编码基因,为日本血吸虫疫苗和诊断研究提供材料。方法:以Sj尾蚴66～68 kD抗原免疫家兔获得的单特异性血清为探针,对Sj尾蚴cDNA文库进行免疫筛选,将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增、琼脂糖电泳初步鉴定,并挑选出4个强阳性克隆进行测序,通过互联网NCBI/BLAST进行核苷酸序列分析。结果:共获得21个持续阳性克隆,其中10个阳性克隆初步鉴定显示为单一扩增条带,且插入的cDNA片段大小分布于0.5～3.0 kb之间;4个强阳性克隆分别与日本血吸虫SJCHGC05187,SJCHGC05173,SJCHGC06989,SJCHGC01894显著同源。结论:获得了4种日本血吸虫相关的编码基因。

实验教学标本来源的现况及其措施

本文介绍了人体寄生虫学实验教学标本来源途径及现况,在当今寄生虫标本来源困难的情况下,如何采取行之有效的措施,从而对人体寄生虫学实验教学起到积极作用.

寄生虫的粘膜免疫研究进展

粘膜免疫是机体抗感染的第一道免疫屏障 ,寄生虫的粘膜免疫 ,对于寄生虫病发病机制的了解及免疫预防方法的优选有重要的意义。本文着重对弓形虫、隐孢子虫。

PBL教学法在医学寄生虫学教学中的几点体会

目前全国高等医学院校医学寄生虫学学时大大减少,有的院校列为考查课,有的列为选修课。在此情况下,医学寄生虫学实验所占学时更是少之又少,如何利用好有限课时,使学生最大限度地吸收、掌握教学内容,已成为摆在高校师生面前的一道难题。传统的教学方法以讲授为主,容易忽视学生学习的主动性和积极性。而应用了PBL(problem based learning)教学法,其基本要点是以学生为中心、基于问题、综合地、相互合作和交互式地学习,有助于培养和提高学生在自学、实验技术、团队合作、分析问题和解决问题等方面的能力,激发学生学习的积极性和主动性。

重组日本血吸虫铁蛋白粘膜免疫诱导小鼠保护力的研究

目的 探讨重组日本血吸虫铁蛋白 (r Sj Fer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫的保护性免疫。 方法 实验鼠分为 8组 ,每组 10只 ,包括 r Sj Fer、霍乱毒素 B亚单位 (CTB)和 r Sj Fer+CTB灌胃免疫组 ,以及 r Sj Fer、CTB和r Sj Fer+CTB滴鼻免疫组 ,PBS灌胃及滴鼻对照组。在第 3次免疫后 2 wk,经腹部感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 ,4 5d后解剖观察减虫率和减卵率。在免疫前和感染前尾静脉采血和取粪样 ,EL ISA检测血清 Ig A、Ig G及粪内 s Ig A水平。 结果 灌胃及滴鼻各组减虫率依次为 3.98%、3.77%、2 5 .5 7%及 7.6 9%、4 .5 0 %、33.35 % ,每克肝减卵率依次为3.76 %、2 .4 6 %、34.75 %及 4 .4 0 %、0 .0 6 %、6 0 .10 %。 结论 r Sj Fer粘膜免疫能诱导小鼠产生抗血吸虫的保护性免疫。

日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果 EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论 DNA疫苗 VR10 12 -

弓形虫新基因wx2表位疫苗免疫小鼠的保护研究

采用生物信息学方法对弓形虫新基因wx2进行表位分析预测,PCR扩增基因中编码2个表位的片段W2b和W2a,成功构建新基因的单表位疫苗质粒pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a和双表位疫苗pcDNA3-W2b2a,接种小鼠,观察表位疫苗的免疫保护作用.将表位疫苗分别通过肌肉注射免疫小鼠,对照组注射pcDNA3空质粒.ELISA法检测血清IgG抗体水平,取脾细胞用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群.各组小鼠末次免疫后第4周每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500个,观察小鼠的生存时间.结果显示,pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组(P<0.05),且pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠脾细胞CD4+T与CD8+T淋巴细胞比值明显低于两单表位疫苗组,pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠存活时间明显长于两单表位疫苗组(P<0.05).实验结果表明,弓形虫新基因wx2表位疫苗能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,并且弓形虫pcDNA3-W2b2a双表位疫苗的免疫保护性优于pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a两单表位疫苗.

东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

东方田鼠 (Microtusfortis ,Mf)对日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性 .为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些特异抗原分子的免疫应答 ,用Mf感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 .经初筛和复筛 ,共筛选出 12个阳性克隆 .这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示 ,插入的SjcDNA片段大小在 3 0 0bp至 1 8kb之间 ,其中 1 8kb片段 5个 ,1kb片段 1个 ,3 0 0bp片段6个 .经DNA测序分析 ,鉴定出 3个未曾报道过的Sj新基因 ,分别命名为Sj Mf1、Sj Mf2和Sj胞质氨基肽酶 ,并在GenBank登记注册 .结果说明 ,Mf感染血清可识别Sj的特异性抗原分子 ,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究 .

日本血吸虫童虫细胞体外培养条件的初步研究

目的探讨日本血吸虫童虫细胞体外培养条件。方法选取转铁蛋白、核苷酸、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、黄体酮以及非必需氨基酸与维生素组合等5种促进细胞增殖的因子作为考察因素,每种因素选取添加与不添加两个水平,采用正交设计,以RPMI-1640为基础培养液,配制16种条件培养基对日本血吸虫童虫细胞进行体外培养,通过动态观察和AKP组化染色法及直观法分析法获得不同培养条件影响细胞增殖和细胞活力的结果。结果第2,4,9,13,14孔中的组织出现明显的细胞增殖现象,其细胞AKP检测值也相应较高,各孔中培养细胞的AKP值经直观分析表明促进细胞增殖最佳因素组合为C1B1A1,即转铁蛋白、核苷酸、bFGF。结论转铁蛋白、核苷酸、bFGF对日本血吸虫童虫细胞增殖具有明显促进作用。

Cystatin-ELISA法诊断日本血吸虫病的研究

目的 建立一种敏感、高特异性的血吸虫病诊断方法。方法 应用 Cystatin捕获血吸虫吐出物中的半胱氨酸蛋白酶 ,再进行 EL ISA试验检测日本血吸虫 (Sj)病人血清中相应的特异抗体。结果 检测 12 0例慢性血吸虫病人血清 ,84例非疫区正常人血清和 36例华支睾吸虫病人血清 ,Cys-tatin- EL ISA检测 Sj病人阳性率为 98.4 % ,与正常人及华支睾吸虫病人无交叉反应。其敏感性(98.4 % )与 SEA- EL ISA法的敏感性 (93.4 % )比较无明显区别 (P>0 .0 5 ) ,但特异性显著高于后者(P<0 .0 5 )。 Cystatin- EL ISA敏感性和特异性亦均高于 AWA- EL ISA和 ES- EL ISA。结论 Cys-tatin- EL ISA敏感性高 ,特异性强 ,是一种有效的诊断血吸虫病的方法。

丙烯硫脲对日本血吸虫感染小鼠肝脏病变的影响

目的 观察丙烯硫脲对日本血吸虫感染小鼠肝脏病变的影响。方法 小鼠感染日本血吸虫尾蚴 2 2d后 ,隔日一次按 30 0mg/kg腹腔注射酚酶抑制剂丙烯硫脲 ,至感染后 4 2d剖杀动物 ,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化。结果 与感染对照组相比 ,实验组小鼠肝脏表现为散在分布的炎性细胞浸润灶 ,中心未见虫卵 ,仅见一些颗粒状物质。其平均直径和面积均较感染对照组的典型虫卵肉芽肿显著减小 (P <0 .0 1)。结论 感染小鼠腹腔注射丙烯硫脲后肝脏内未见虫卵肉芽肿的形成。

5-Aza-CdR对胶质瘤细胞生长及LRRC4基因异常甲基化的影响

LRRC4是一个新发现的胶质瘤抑瘤基因,它在多种胶质瘤细胞系和胶质瘤组织表达缺失或下调,前期研究结果表明胶质瘤细胞和组织中LRRC4的编码区未发生突变、缺失或重排.为了获得LRRC4作为胶质瘤抑瘤基因的进一步证据,采用去甲基化制剂5-Aza-CdR处理LRRC4表达缺失的SF126和SF767胶质瘤细胞,MSP和RT-PCR检测表明,LRRC4的启动子在表达缺失的SF126和SF767细胞存在完全的甲基化,而5-Aza-CdR能逆转LRRC4启动子的甲基化状态,恢复LRRC4的表达.MTT法测定显示,5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量的依赖性.同时流式细胞仪检测显示,5-Aza-CdR使SF126和SF767胶质瘤细胞周期阻滞于G0/G1期.因此,5-Aza-CdR能抑制胶质瘤细胞SF126和SF767增殖并干扰其细胞周期,LRRC4启动子异常甲基化是其在胶质瘤细胞中表达缺失的重要机制,5-Aza-CdR能逆转LRRC4基因的甲基化,恢复LRRC4的表达,为LRRC4作为胶质瘤去甲基化治疗的靶标提供了科学依据.

噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究

目的 从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。 方法 以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后第 4 5天剖杀小鼠 ,观察减虫和减卵效果。 结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效的富集 ,第三轮洗脱噬菌体的产量约为第一轮的 15 0倍。随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 1个克隆能与旋毛虫感染鼠血清IgG特异性反应。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率与减卵率分别为 4 2 8%与 6 6 3% (P <0 0 0 1)。 结论 利用噬菌体随机肽库技术可获得模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导明显的抗血吸虫的保护性免疫。

东方田鼠血清及其不同部分对日本血吸虫童虫的体外杀伤作用

目的 对东方田鼠血清及其不同部分对日本血吸虫童虫的体外杀伤的可能机制进行初步探讨。方法 将血清初步分离成含蛋白部分及分子量小于 2 0 k Da的小分子部分 ,并分别观察了东方田鼠全血清、去补体血清、蛋白及小分子血清成分对体外培养童虫的杀伤 ,此外 ,还观察了蜕皮素对东方田鼠血清杀伤作用的影响。结果 东方田鼠热灭活去补体血清对童虫的杀伤显著低于正常血清 ;感染及正常东方田鼠血清小分子在第 4 8h及 72 h表现出一定杀伤作用 (30 % ) ,而血清蛋白在2 4 h就有显著杀伤 ,但杀伤作用略低于全血清 ;蜕皮素对东方田鼠血清的杀伤无明显影响。结论 补体在东方田鼠血清杀伤机制中有重要作用。血清蛋白为体外杀伤的主要成分 。

ELISA检测华支睾吸虫病患者血清特异性IgG_4的诊断价值

目的 探讨用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 的诊断价值。 方法 用华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行ELISA分别检测华支睾吸虫病患者 (76例 )血清中的特异性IgG和IgG4 抗体及日本血吸虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病患者 (分别为 63、3 5、41例 )和健康者 (65人 )血清中的交叉抗体。 结果 检测 76例华支睾吸虫病患者血清中IgG4 的检出率为 93 .42 % ,检测 65例健康者血清中的IgG4 均为阴性 ,分别与检测IgG结果比较差异均无显著性意义 (P均 >0 .0 5 ) ;与其它寄生虫病的交叉反应率 ,IgG4 显著低于IgG ;诊断效率及阳性、阴性预告值分别为 96.45 %、10 0 %和 92 .85 %。 结论 用ELISA检测华支睾吸虫病患者血清中特异性IgG4 具有较高的诊断应用价值。

大鼠感染血清免疫筛选弓形虫速殖子cDNA文库

目的为弓形虫病疫苗的研制提供新的抗原分子.方法用弓形虫RH株速殖子感染大鼠,分离其血清作为探针筛选弓形虫cDNA文库,对阳性克隆的插入片段分别进行PCR扩增及DNA序列测定.结果从cDNA文库4×105个噬菌斑中筛选出13个阳性克隆,其插入片段大小分别为0.45～2.4kb.对L1、L2、L4和L5四个克隆进行测序,将所得序列查询基因库,结果,克隆L2与弓形虫P24主要抗原基因序列相同,L4与蔗糖丙酮酸磷酸激酶具有同源性,L1无任何相匹配的序列,为未曾报告过的新基因(GenBank登录号为AY180109),命名为T.g-R1.T.g-R1编码134个氨基酸的非跨膜蛋白.PROSCAN分析显示T.g-R1含有2个蛋白激酶C磷酸化位点,2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个肉豆酸酰化位点,1个微体细胞C端靶信号.L5为一小片段,无完整编码读框.结论阳性克隆的筛选和鉴定为抗弓形虫病疫苗的研制提供又一途径.