bromodomain结构域对溴区包含蛋白7亚细胞定位的影响

目的:探讨溴区包含蛋白7(BRD7)的亚细胞定位以及bromodomain结构域对BRD7亚细胞定位的影响。方法:首先采用GFP介导的亚细胞定位方法,在非洲绿猴肾COS7细胞中考察BRD7的亚细胞定位;然后分别构建bromodomain缺失型的BRD7重组体pCMV-Myc/BRD7△brd和pEGFP-C2/BRD7△brd,并通过GFP介导的亚细胞定位方法和间接免疫荧光方法,分别在COS7中考察bromodomain缺失型BRD7的亚细胞定位,从而探讨BRD7的bromodomain结构域对其亚细胞定位的影响。结果:成功构建了pCMV-Myc/BRD7△brd和pEGFP-C2/BRD7△brd。BRD7及bromodomain缺失型BRD7在COS7中均主要定位在细胞核,与染色质的分布存在一定程度的相似性。结论:bromodomain结构域的缺失并不影响BRD7的细胞核分布,但是在核内的分布模式发生了一定的改变。

接头相关蛋白复合物3δ亚单位与BRD7的相互作用及其功能

目的:观察鼻咽癌密切相关基因BRD7与接头相关蛋白复合物3(AP3)δ亚单位的相互作用及功能。方法:首先构建AP3δ基因真核表达载体pCMV-HA-AP3δ和pEGFP-C2-AP3δ,然后采用GFP介导的细胞荧光实验考察非洲绿猴肾COS7细胞中AP3δ的亚细胞定位;通过细胞荧光共定位和免疫共沉淀实验分析BRD7蛋白与AP3δ蛋白的相互作用;最后采用荧光素酶实验观察BRD7与AP3δ对COS7细胞E2F3和CyclinD1活性的影响,半定量逆转录PCR观察转染pcDNA3.1-BRD7的HNE1细胞AP3δmRNA的表达,以转染空白载体的HNE1细胞为对照。结果:成功构建了pCMV-HA-AP3δ和pEGFP-C2-AP3δ;AP3δ蛋白主要定位于胞质;AP3δ蛋白与BRD7蛋白存在相互作用。AP3δ基因可协同BRD7下调细胞E2F3和CyclinD1启动子活性。在BRD7稳定转染的HNE1细胞中,AP3δmRNA的表达较转染空白载体组明显上调。结论:AP3δ蛋白与BRD7蛋白存在相互作用,在功能上相互促进。