HLCDG1基因转染对肺癌细胞生长的影响

背景与目的:HLCDGI基因是我们实验室最近克隆的新基因,它位于5q33,介于D5S436～D5S470之间,在肺癌组织中明显表达下调或缺失。本研究旨在观察HLCDGI基因是否具有抑制肺癌细胞生长的能力。方法:构建HLCDGI基因的重组质粒pcDNA3.1(+)/HLCDGI,通过脂质体转染,将HLCDGI基因cDNA导入肺癌细胞系A549中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞克隆。RT-PCR检测HLCDGI基因表达,并采用细胞生长抑制实验、软琼脂集落形成实验及裸鼠致瘤性实验,分析HLCDGI基因转染细胞恶性表型。结果:RT-PCR结果表明转染HLCDGI 基因的细胞HLCDGI mRNA明显表达。转染HLCDGI基因组、转染空载体组和未转染组,3组细胞生长倍增时间分别为70.0 h、43.3 h和39.5 h,转染HLCDGI基因组与两对照组之间的差异有显著性(P<0.05)。计算软琼脂中细胞克隆形成率,结果分别为8.5％、29.0％和35.0％,转染HLCDGI基因的细胞克隆形成率明显降低。将转染HLCDGI基因的细胞、转染空载体的细胞和未转染的细胞分别注射入无胸腺的裸鼠体内,43天后处死动物,剥离出肿瘤组织并称重,各组瘤块平均重量分别为0.120g、0.612g和0.924g,转染HLCDGI基因的细胞成瘤能力与两对照组细胞比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:HLCDGI在肺癌A549细胞中表达。

肺癌相关基因HLCDG1的克隆和表达分析

背景与目的:比较基因组杂交和微卫星多态性位点全基因组扫描结果显示肺癌患者在染色体3p、5q、6q、9p、10q、11p、13q、17p、19p等区域存在高频率的杂合性缺失,提示可能有多个未知的易感基因或抑癌基因与肺癌的发生、发展相关。本研究选用在mRNA差异显示研究中获得的在肺癌组织中表达下调且代表新基因的表达序列标签(expressedsequencetag,EST)LXDD1为进一步研究对象,克隆其全长cDNA。方法:采用Northern杂交验证LXDD1在肺癌中的表达差异,并用MTN(MultipleTissueNorthernBlotsTM)膜检测其在正常组织中的表达及其所代表基因的转录本大小;克隆其全长cDNA,并利用生物信息学对该序列进行初步分析;用差异RT-PCR检测新基因在肺癌组织、配对癌旁非癌组织、肺癌细胞系和其它肿瘤细胞系中的表达。结果:成功地克隆了一个在肺癌中表达下调的新基因HLCDG1(humanlungcarcinomadeletedgene1),GenBank登录号为AF447582,全长cDNA为3.113kb,预测其开放阅读框编码一个含166个氨基酸的跨膜蛋白质,通过电子-聚合酶链反应(electric-polymerasechainreaction,e-PCR)将该基因定位于5q33。结论:HLCDG1基因是一个在肺癌中表达下调的新基因,这提示HLCDG1可能与肺癌的发生、发展相关。

肺癌差异表达cDNA序列的分离与鉴定

背景与目的:肺癌癌变的分子机理至今还不很清楚,其关键是未找到与肺癌密切相关的基因。本研究拟分离和鉴定肺癌差异表达cDNA序列,为进一步克隆肺癌相关基因打下基础。方法:采用mRNA差异显示、克隆、反向点杂交、测序和Reversetranscription-PCR(RT-PCR)方法分离在肺癌组织和肺癌细胞系中表达下调或不表达,以及在肺癌组织和肺癌细胞系中过表达的差异cDNA序列。结果:mRNA差异显示获得16条差异的片段。将差异片段进行克隆、反向点杂交、测序、同源性比较,共获得10条不同的cDNA序列。其中2条为新基因,8条与已知基因高度同源。进一步RT-PCR证实LXDD1、LXDD2两条cDNA序列在肺癌及正常肺支气管粘膜组织中存在差异表达。结论:运用mRNA差异显示,成功分离了10条差异表达cDNA序列,并证实其在肺癌及正常肺支气管粘膜组织中存在表达差异。这些差异表达cDNA序列可能与肺癌的发生发展密切相关。

肺癌相关基因克隆策略与进展

肺癌和其它肿瘤一样是遗传和环境等诸多因素的相互作用所致 ,涉及到大量相关基因结构和表达调控的改变。寻找肺癌致病相关基因是阐明肺癌分子发病机制的关键。基因识别的基础在于其表型 ,但对于肺癌来说 ,其表型是遗传因素与环境因素相互作用的复杂表现 ,无法运用功能克隆法来寻找其相关基因。目前大多采用的方法和策略有定位克隆法。

鼻咽癌FRA3B脆性部位的微卫星不稳定性分析

目的 探讨鼻咽癌染色体脆性部位FRA3B区域的微卫星不稳定性 (MicrosatelliteInstability ,MSI)。方法 选择FRA3B区域附近的 6个微卫星多态标记对 30例鼻咽癌进行MSI分析。结果 MSI的发生率为6 3.33% (19/ 30 ) ,其中复制错误 (ReplicationErrors ,RER)阳性率为36 .6 7% (11/ 30 )。MSI频率较高的 3个位点为D3S15 47(30 .8% )、D3S1313(34 .6 % )和D3S130 0 (37.5 % )。临床Ⅰ～Ⅱ期患者MSI频率高于Ⅲ～Ⅳ期 (P <0 .0 5 )。结论 揭示FRA3B脆性部位的MSI为鼻咽癌形成过程中的早期分子事件 。

鼻咽癌染色体3p14的精细等位基因缺失分析(英文)

目的 进一步明确鼻咽癌染色体３ｐ１４区域等位基因杂合性丢失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）的频率与共同缺失区范围，以便分离该区域内与鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法 选择位于３ｐ１４的６个高密度微卫星多态标记，对３２例鼻咽癌组织进行ＬＯＨ分析。结果 ７１．８８％（２３／３２）的鼻咽癌在至少１个位点发生ＬＯＨ，丢失频率较高的３个位点是Ｄ３Ｓ１３１３（４６．４３％）、Ｄ３Ｓ１３００（５０．０％）和Ｄ３Ｓ１３１２（４４．４４％）。在存在丢失的２３例患者中，８例表现为一个连续的非随机的ＬＯＨ区域，其最小共同缺失区为Ｄ３Ｓ１３１３～Ｄ３Ｓ１３１２（约３．４个厘摩）。且该区域的缺失与鼻咽癌临床分期、ＥＢ病毒感染有明显关系。结论 鼻咽癌在３ｐ１４的最小共同缺失区位于Ｄ３Ｓ１３１３～Ｄ３Ｓ１３１２之间，该区域可能存在一个尚未克隆的与鼻咽癌发生发展密切相关的抑瘤基因。