胃癌和大肠癌中肿瘤相关基因NGX6的表达

目的:研究肿瘤相关基因NGX6在胃癌与大肠癌组织以及其配对癌旁正常组织中的表达,探讨此基因在胃癌、大肠癌发生发展中的作用.方法:采用RT-PCR方法、点杂交、Northern-blot方法分别检测34例胃癌、34例大肠癌患者癌瘤组织、癌旁(手术切缘,距肿瘤5cm以上)正常组织NGX6基因表达.结果:RT-PCR显示:NGX6基因在73.5%的大肠癌组织(25/34)和93.8%的有淋巴结或远处转移的大肠癌组织(15/16)中存在表达减弱或不表达,其表达下调率明显高于相应的癌旁组织和无淋巴结或远处转移大肠癌(26.5%、55.6%,P<0.05)。但此基因表达与大肠癌病理类型无显著相关性。点杂交和Northern-blot证实了RT-PCR结果。而胃癌与配对癌旁正常组织中未发现NGX6表达水平改变(表达下调率:29.4%vs41.2%,P>0.05).结论:NGX6基因在大肠癌中表达下调,此基因的低表达在大肠癌的发生和转移中起着一定的作用,但可能与胃癌的发生无关.

短双链RNA特异性抑制哺乳动物细胞中绿色荧光蛋白基因表达

背景与目的:双链RNA特异性地降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默。本研究旨在探讨绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)的短双链RNA(shortinterferingRNAs,siRNAs)是否能抑制GFP在哺乳动物细胞中的表达。方法:用荧光显微镜和荧光分光光度计观察合成的GFPsiRNAs对绿色荧光蛋白表达基因pEGFPC2在HeLa细胞中表达的影响,同时观察长链GFPdsRNA、Cx26siRNAs和长链Cx26dsRNA对荧光蛋白表达的影响,并通过流式细胞仪观察上述不同种类的dsRNA对细胞凋亡的影响。结果:GFPsiRNAs能特异性抑制GFP基因在HeLa细胞中的表达,而Cx26siRNAs对荧光蛋白的表达没有影响。长链双链RNA可以诱导细胞的凋亡,而siRNAs对细胞的凋亡无影响。结论:siRNAs能在哺乳动物特异性抑制基因的表达,该研究将为利用siRNA作为一种治疗手段提供一定的理论依据。

双向电泳和质谱技术研究鼻咽癌候选抑瘤基因NGX6的功能

目的：NGX6基因是我室克隆的与鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,它的功能与作用机制目前尚不清楚。方法：通过亚克隆的方法将NGX6 cDNA 片段克隆至pcDNA3.1(＋)的表达载体，经脂质体导入HNE1细胞,采用双向凝胶电泳分离细胞内蛋白质，筛选差异表达的蛋白质点进行质谱分析和生物信息学资料处理。结果：我们鉴定出7种表达下调的蛋白质，其中包括RAB蛋白、NG24前体、LIM同源盒9等。这些蛋白参与了细胞生长、增殖和分化的信号传导通路。结论：这些结果说明NGX6基因可能通过多种途径影响鼻咽癌的生长。本文为研究NGX6的作用机制提供了很好的实验资料，对鼻咽癌的基因治疗奠定了一定的研究基础，也为研究其他基因的作用机制提供了新思路。

人鼻咽上皮组织中间隙连接蛋白基因表达谱的研究

目的 :研究细胞间隙连接蛋白基因 (Cx)在正常人鼻咽上皮组织中的表达谱 ,在此基础上探索细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌组织中的表达 ,为研究鼻咽组织癌变的原因和机理提供新思路。方法 :根据基因库中人间隙连接蛋白基因的mRNA序列 ,合成间隙连接蛋白基因家族中 1 3个基因的PCR引物 ,用RT -PCR的方法检测这些基因在鼻咽组织中的表达。结果 :1 8例正常人鼻咽组织中 ,检出Cx30、31 .1、37、40、43分别有 1 6、1 6、1 7、1 5、1 7例表达 ,Cx2 6、31、32、45分别有 1 0、1 1、9、9例表达 ,Cx36、46、46 .6、50分别有 1、0、1、3例表达。结论 :正常人鼻咽组织中 ,主要表达的间隙连接蛋白为Cx30、31 .1、37、40。

Cx26基因重表达抑制人鼻咽癌细胞系HNE1的恶性增殖

间隙连接蛋白 (Cx)基因在胚胎发育、细胞生长、分化以及细胞内环境的稳定过程中起重要调节作用 .肿瘤发生与Cx基因的表达及功能异常密切相关 ,肿瘤细胞常存在Cx基因表达下调或缺失 .将人Cx2 6基因编码区cDNA序列 ,亚克隆于真核表达载体pcDNA3 1(+) ,采用脂质体转染 ,将重组表达载体pcDNA3 1(+) Cx2 6转入鼻咽癌细胞系HNE1,使Cx2 6基因在HNE1中重表达 ,探讨Cx2 6基因对鼻咽癌细胞系HNE1的生物学功能的影响 .研究结果表明 :Cx2 6基因的重表达 ,抑制HNE1细胞生长 ,细胞周期阻滞于G0 G1期 ,HNE1细胞的克隆形成能力下降 ,裸鼠致瘤能力减弱 .

间隙连接蛋白Cx43、Cx45在鼻咽癌组织中的表达

背景与目的:间隙连接在细胞间的营养物质、离子和细胞调节因子的交换中起重要作用。间隙连接异常,细胞间的物质交换障碍,往往导致细胞分裂失控。在有些癌组织和癌细胞中存在间隙连接的功能异常,恢复这些癌细胞的间隙连接功能,它们表现出正常细胞的生物学表型。因此,探讨细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌中的表达,将有可能为临床诊断提供方法,为鼻咽癌的发病机理提供新思路。方法:采用免疫组化技术检测间隙连接蛋白Cx43、Cx45在鼻咽组织中的表达。结果:①Cx43、Cx45在鼻咽慢性炎症组织和鼻咽癌组织中有表达差异,在鼻咽癌中,Cx43、Cx45阳性率为44.8%、46.6%,与鼻咽慢性炎症柱状上皮细胞阳性率的86.5%和100%比较,显著性下降(P<0.01)。②鼻咽慢性炎症组织比鼻咽癌组织含鳞状细胞的百分率低(P<0.01),分别为29.7%和56.9%。③Cx43、Cx45在鼻咽癌旁柱状上皮细胞中的表达低于癌旁鳞状上皮细胞(P<0.001),高于癌细胞(P<0.01)。结论:Cx43、Cx45在鼻咽组织中的表达异常,可能与鼻咽组织鳞化和癌变有关。

真核基因的快速克隆及表达

以细胞间隙连接蛋白基因Cx2 6作为目的基因 ,通过T -A载体介导 ,构建真核表达重组载体pcDNA3 1(+) /Cx2 6 ,重组表达载体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,表达Cx2 6间隙连接蛋白。