狼疮肾炎患者外周血B细胞中X-盒结合蛋白1的表达和临床意义

目的检测狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者和健康者外周血CD19+B细胞中未剪接型X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1 unspliced,XBP1u)和剪接型X盒结合蛋白1转录因子(X-box binding protein 1spliced,XBP1s)mRNA的表达,并探讨XBP 1在LN患者的临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测65例LN患者和30名健康对照组外周血CD19+B细胞中XBP1u、XBP1s的表达水平,用流式细胞术检测外周血中CD19−CD138+浆细胞/CD19+B细胞比例,分析LN患者XBP1表达与B细胞亚群及临床相关指标的相关性。结果(1)LN组CD19+B细胞活动期组中XBP1u mRNA的表达水平为(0.078±0.034),高于健康对照组的(0.035±0.011)(P<0.05)、高于稳定期组的(0.049±0.016)(P<0.05);LN组CD19+B细胞活动期组中XBP1s mRNA(0.076±0.037),高于健康对照组的(0.022±0.010)(P<0.05)、高于稳定期组的(0.043±0.017)(P<0.05);(2)LN组中CD19−CD138+浆细胞/CD19+B细胞比例活动期组为(0.059±0.024),显著高于健康对照组的(0.034±0.011)(P<0.01)、活动组(0.059±0.024)高于稳定组的(0.073±0.036)(P<0.05);(3)LN患者XBP1u、XBP1s表达与CD19−CD138+浆细胞/CD19+B细胞比例呈正相关(r值分别为0.138、0.036),与抗双链DNA抗体、系统性红斑狼疮疾病活动性指数评分值呈正相关(r值分别为0.417、0.058),与血红蛋白、补体C3呈负相关(r值分别为−0.559、−0.219)。结论(1)LN患者外周血单个核细胞中XBP1u、XBP1s mRNA在活动组中表达量较健康组增加,且与系统性红斑狼疮疾病活动性指数评分值及抗双链DNA抗体呈正相关;(2)XBP 1在LN患者B细胞中表达升高,与浆细胞明显相关,提示XBP 1可能通过促进B细胞分化而参与LN的发病。

内质网应激通过miRNA-155作用PI3K-Akt-mTOR信号通路促进狼疮性肾炎进展的研究

目的内质网应激(ERS)是狼疮性肾炎(LN)进展期间的致病因素之一。虽然microRNAs(miRNAs)已经被证明与狼疮性肾炎的发生发展有密切关系,但内质网应激与miRNA在肾系膜细胞中的作用仍不清楚。本研究探讨miRNA-155在肾系膜细胞内质网应激中的作用及其在LN中作用机制。方法通过在40只小鼠(10只正常和30只LN小鼠)模型中进行肾组织活检来检验内质网应激的活性;分别在CTL和LN组间,ERS阳性/阴性亚组间,通过qRT-PCR实验检测miRNA-155的表达水平,通过Western Blot实验检测肾炎组织中PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白(P85、Akt、p-Akt、m-TOR、p-mTOR、S6、p-S6)以及内质网应激诱导型分子伴侣GRP78的表达情况;在体外肾系膜细胞中诱导内质网应激后,构建miRNA-155对照组和干扰组(沉默miRNA-155,或者添加PI3K-Akt-mTOR信号通路抑制剂),分别通过qRT-PCR实验检测细胞中miRNA-155的表达水平,通过MTT实验检测系膜细胞增殖能力,通过qRT-PCR、Western Blot实验检测PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白在mRNA水平和蛋白质水平的情况。结果(1)在大多数狼疮性肾炎模型中均表现出内质网应激反应为阳性。(2)在内质网应激活性为阳性的狼疮均表现出miRNA-155高表达。(3)在肾系膜细胞中,诱导内质网应激后发现miRNA-155表达增高,且细胞增殖能力增强;在诱导内质网应激后,沉默miRNA后,细胞增殖能力下降。(4)在ERS(+)肾系膜细胞中,发现miRNA-155表达增高的同时,Western Blot实验显示PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白水平均增高;在肾系膜细胞中,诱导内质网应激后,沉默miRNA-155后,Western Blot实验显示PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白水平均下降;在ERS(+)肾系膜细胞中,发现miRNA-155表达增高的同时,添加PI3K通路抑制剂后,细胞增殖能力下降。结论内质网应激可使狼疮性肾炎患者中miRNA-155表达增加,进而作用于PI3K-Akt-mTOR信号通路促进狼疮性肾炎进展。