5636例疑似地中海贫血样本的异常血红蛋白分子特征及外周血参数分析

目的 了解可疑罹患(或携带)地中海贫血(简称“地贫”)基因人群中异常血红蛋白基因携带率、异常血红蛋白突变类型及其复合地贫时的分子特征和血细胞参数变化。方法 对中南大学湘雅医学院附属海口医院2016年10月至2022年8月5 636例疑似地贫受试者的样本采用高通量测序技术进行基因检测,对检测出的异常血红蛋白的样本及其血细胞参数进行回顾性分析。结果 5 636例疑似地贫样本中共检出异常血红蛋白46例,检出率为0.82%,突变类型有10种,分别是Hb Owari、Hb HekinanⅡ、Hb Port Phillip、Hb Saclay、Hb New York、Hb Hamilton、Hb J-Bangkok、Hb Shizuoka、Hb Zengcheng和Hb Hachioji;不同异常血红蛋白之间血液表型差异较大,其中Hb New York、Hb HekinanⅡ、Hb Hamilton、Hb Owari、Hb J-Bangkok五组血细胞参数[平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白(Hb)和红细胞分布宽度(RDW)]比较差异均有统计学意义(P<0.05),Hb HekinanⅡ的MCV、MCH、MCHC和Hb平均值最低,Hb Hamilton的四种血细胞参数平均值最高;RDW的数据显示HB New York最高,其次是Hb HekinanⅡ,第三是Hb J-Bangkok,平均值均高于正常范围;性别间的血细胞参数比较差异无统计学意义(P>0.05);异常血红蛋白患者无论是合并α-地贫基因型还是β-地贫基因型,与单纯的异常血红蛋白组相比,血细胞参数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 疑似地贫基因的样本中异常血红蛋白突变类型较多,且有罕见基因型;异常血红蛋白的血细胞参数变化不同,或可为地贫的致病机制找到新的思路。

检验医学实习生培养与就业

临床检验医学实习是巩固、提高、延伸和发展所学的专业知识。为培养符合要求,毕业后能胜任临床检验工作做铺垫,同时增强学生在多元的知识结构和文化环境下,适应社会的能力和就业竞争力,本文从检验医学实习生带教与管理现状存在的主要问题进行剖析,对如何在高校教学改革和医疗改革中有效培养检验医学实习生提出对策,为提高临床检验医学实习生的整体素质、学习效率及就业指导提供参考。

实验性牙髓炎模型兔的构建

背景:以往牙髓炎动物模型的建立大多应用内毒素,不能完全反映临床牙髓炎的形成过程。目的:观察应用变形链球菌诱导兔牙牙髓炎模型不同时间炎症特征。方法:选用20只健康新西兰大白兔,随机将下颌前牙分为实验组和对照组;在兔两颗下颌前牙舌面钻孔,对照组一颗置入生理盐水,实验组另一颗置入变形链球菌,术后1,3,5,7d各处死兔5只;观察牙髓炎炎症转归。结果与结论:实验组术后1d炎症反应较轻,经过3,5,7d牙髓炎症反应逐渐加重,牙髓血管充血、渗出严重,牙髓组织出现坏死。对照组牙髓炎症随着时间的推移,血管扩张逐渐加重,偶有牙髓组织坏死。结果表明,应用变形链球菌诱导牙髓炎症形成过程更符合牙髓炎病理学特征。

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。

富血小板血浆联合米诺地尔酊治疗雄激素性脱发疗效观察

目的:观察富血小板血浆(Platelet-richplasma,PRP)联合米诺地尔酊治疗雄激素性脱发(Androgenetic alopecia,AGA)的临床疗效及安全性。方法:将入选的60例患者按就诊顺序随机分为治疗组和观察组,每各30例。治疗组给予PRP头皮注射,每月1次,共计6次,同时联合米诺地尔酊外涂,2次/天,共治疗6个月;对照组仅给予米诺地尔酊外涂。比较治疗前、治疗3个月及6个月后医生视觉主观评分及皮肤镜下毛发密度,以评判临床疗效。结果:治疗后,医生视觉主观评估两组毛发密度及皮肤镜检测终毛密度和毛发密度均较治疗前有显著增加(P<0.05),并且随着疗程的延长疗效越好。治疗组治疗3个月、6个月后医生评分疗效均优于对照组(P<0.05)。治疗3个月、6个月后,治疗组终毛密度及毛发密度均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),但毳毛密度两组比较差异无统计学意义。结论:PRP联合米诺地尔酊治疗AGA起效快、疗效强,对于单用米诺地尔疗效不显著或不耐受,以及无法口服用药者是一个有效的辅助治疗方法。

肝癌患者TACE治疗前后外周血PD-1、PD-L1的表达及临床意义

目的探讨原发性肝癌患者行肝动脉化疗栓塞术(TACE)前后外周血程序性死亡分子1(PD-1)、配体(PD-L1)的表达及临床意义。方法采集中南大学湘雅医学院附属海口医院28例中晚期肝癌患者(肝癌组)TACE治疗前后外周血及20例健康体检者(对照组)外周血标本,流式细胞仪检测CD4+T、CD8+T细胞及抗原提呈细胞(APC)表面PD-1、PD-L1的表达,并随访PD-1、PD-L1表达与肿瘤分化、疗效的关系。结果肝癌组外周血CD4^+T、CD8^+T细胞及APC表面PD-1、PD-L1表达与对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05),肝癌组均高于对照组;治疗前后肝癌组外周血CD4^+T、CD8^+T及APC表面PD-L1表达,差异有统计学意义(P <0.05),治疗后较治疗前下降;CD4+T、CD8^+T及APC表面PD-1表达也较治疗前下降,但差异无统计学意义(P>0.05);细胞分化差的肝癌组患者外周血PD-1、PD-L1表达较高;治疗效果差的肝癌组外周血PD-1、PD-L1表达较高。结论肝癌患者外周血PD-1、PD-L1表达升高,治疗前后监测PD-1、PD-L1表达可能预测患者预后状态。

近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外分泌肝细胞生长因子延缓慢性肾脏病纤维化进展

目的:分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其可能机制。方法:采用密度梯度法分离培养BM-MSCs,并从细胞形态、表面抗原、分化能力等方面鉴定;采用左侧输尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通过B超、单光子发射计算机断层成像术(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等评估;体外实验分为肾组织与BM-MSCs共培养、肾组织单独培养、BM-MSCs单独培养3组,体外培养7 d,每天收集3组上清液,酶联免疫吸附法测定肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)累积分泌量。肾组织行HE染色,Masson染色。结果:分离培养的BM-MSCs表达抗原CD29,CD90而不表达CD45,成骨诱导茜素红染色阳性,成软骨诱导阿利新蓝染色阳性。LPUUO术后12周,B超示左肾皮质变薄、肾盂积液;SPECT示左肾充盈延迟、梗阻性肾功能受损。上清液HGF累积含量示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组第1,5,6,7天HGF累积分泌量明显高于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。HE染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组和CKD肾组织单独培养组中肾均出现不同程度的病变,并随时间延长加重,但CKD肾组织单独培养组病变更严重;Masson染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组术后第5,6,7天肾组织被染成蓝色的胶原纤维的累计光密度值明显低于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。结论:近交系五指山小型猪BM-MSCs体外分泌HGF,抑制或延缓CKD纤维化进展。

近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞分离培养及生物特性

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)体外分离培养和鉴定方法,比较我国不同种系猪来源BM-MSCs的生物学特性,为下一步研究BM-MSC对ILMW单侧输尿管梗阻所致肾损伤的修复机制提供细胞来源。方法:选取4月龄及10月龄健康ILMW各4头,从距髂骨翼边缘1 cm处穿刺,抽出骨髓约5 m L;经密度梯度法分离单个核细胞,分别用含10%,12%和15%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的完全培养基于体外培养;并取第1代、第3代、第5代、第11代细胞分别行细胞形态学、表型、分化能力、生长曲线、细胞周期等检测。结果:分离培养的BM-MSCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞18 h出现贴壁,第6天进入对数增长期,约9 d后80%融合,传代后细胞状态未出现明显异常。细胞表面抗原检测显示CD29,CD44,CD90表达呈阳性;CD34和CD45表达呈阴性;且各代间差异无统计学意义(均P>0.05)。成骨诱导18 d后,茜素红染色阳性;成软骨诱导21 d后,阿利新蓝染色阳性。细胞周期检测显示G0/G1的细胞百分比约为81.45%。结论:ILMW的BM-MSCs贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后仍能保持稳定的生物学特性,是中国大陆地区猪来源BM-MSC的最佳选择之一。

脂肪间充质干细胞的研究进展

过去,脂肪只被看作是一种能量储存的组织而未引起研究者们重视。直到20世纪80年代中期,确定其参与性激素的新陈代谢后,脂肪组织变成一个参与人体新陈代谢和免疫应答重要的内分泌器官[1]。2001年Zuk等[2]首次报道一种新成体干细胞的来源。

近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adiposederived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法:选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1%I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验:测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果:体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54)μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论:ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。

两种人包皮成纤维细胞分离培养方法的比较

目的:作为理想的种子细胞,成纤维细胞的高效获取及纯化尤为重要。本研究通过比较改良组织块培养法(improved tissue culture method,ITCM)及酶消化培养法(enzyme digestion method,EDM)分离培养人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF),以探讨两种方法的优缺点。方法:ITCM是将剪碎的皮肤组织置0.1%Ⅱ型胶原酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,对真皮组织采用0.25%胰酶于室温下再次消化15 min,待组织块贴壁于培养皿后进行培养。EDM是将剪碎的皮肤组织置0.25%胰酶中于4℃下消化过夜,分离表皮与真皮,将真皮组织再次于4℃下用0.1%Ⅱ型胶原酶消化过夜,然后将组织块与酶的混合物一起过滤、挤压,用含有胎牛血清的培养基冲洗滤网,对得到的细胞悬液进行培养。ITCM与EDM均采用两种酶进行消化,但两种酶的使用顺序、消化时间及温度不同,最终接种于培养皿中进行后续培养的分别是组织块和细胞悬液。本研究利用ITCM和EDM分离、培养HFF,观察ITCM组和EDM组HFF的原代至第3代(Passage 0~Passage 3,P0~P3)的细胞形态;染色波形蛋白、CD68和角蛋白以鉴定细胞纯度;绘制P3生长曲线对比两组细胞的增殖能力。采取120 mJ/cm^(2)的中波紫外线(medium-wave ultraviolet,UVB)照射P3 ITCM组和EDM组HFF,建立光损伤模型。根据有无照射紫外线,实验分为UVB组和未照射对照组(Control)。采取二次离心法提取贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP),用含不同浓度(0,2.5%,5.0%及10.0%)PPP的完全培养基对ITCM组和EDM组的HFF进行分组培养,加入PPP 24 h后用CCK-8试剂盒检测损伤细胞的增殖情况。结果:ITCM组培养至第3天时可观察到大量HFF,受杂质影响小;EDM组HFF形态的观察受到较多杂质影响;第9天时,两组细胞均可传代;两种方法体外分离培养的HFF均呈长梭形、旋涡状生长。HFF培养至P2时ITCM组和EDM组波形蛋白的阳性率比较差异有统计学意义[(97.36±0.76)%vs(99.4±0.56)%,P<0.01],CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(70.8±0.46)%vs(78.37±0.75)%,P<0.01],pan-keratin的表达分别为阳性和阴性。HFF培养至P3时ITCM组与EDM组比较,波形蛋白和角蛋白染色结果差异无统计学意义(均P>0.05),CD68的阳性率比较差异有统计学意义[(74.73±1.37)%vs(85.27±2.63)%,P<0.001]。EDM组P3 HFF的增殖能力显著高于ITCM组(P<0.05)。经UVB(120 mJ/cm^(2))照射后,两种方法获取的HFF出现光损伤改变;2.5%PPP组修复损伤细胞的能力显著高于其余浓度组(P<0.05或P<0.001)。结论:与ITCM法比较,EDM法获得的HFF具有纯化速度快、增殖能力强的优点;PPP对HFF的紫外线损伤具有修复作用。实验结果可为后续临床治疗研究提供理论依据。

1例遗传性MYH9相关疾病家系老年白内障患者临床和基因突变特点

目的了解海南省MYH9相关疾病家系1例老年白内障患者的临床表现和MYH9基因突变特点。方法对该患者进行临床体征评估和实验室检测;应用光学和电子显微镜进行外周血细胞形态和超微结构分析;对MYH9基因的40个外显子和侧翼区进行PCR扩增和测序,确认突变类型。结果通过临床表现和实验室检测,该患者具有典型的巨大血小板、血小板减少和粒细胞内包涵体三联症,且表型复杂多样如伴有长期高脂血症、蛋白尿、肌酐升高、心功能不全、转氨酶升高、哮喘、鼻炎等多种疾病;MYH9基因40个外显子和侧翼区未见致病突变(除25号外显子发生一同义突变,突变类型为A1143A)。结论该老年白内障患者MYH9基因未见致病性突变,其具有的严重临床表型可能与存在新的基因突变类型或新的致病基因有关。

骨髓间充质干细胞经肾动脉移植修复小鼠输尿管损伤的方法学研究

目的:从方法学上研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)经肾动脉移植对小鼠输尿管损伤的修复作用,探讨经肾动脉移植BMSCs的有效性.方法:显微血管夹夹毕49只3～4周龄Balb/c小鼠的左侧输尿管,10 d后取出显微血管夹以解除左侧输尿管梗阻,然后将这些实验小鼠随机分为实验组(n=25)及对照组(n=24).实验组小鼠取出显微血管夹后立即经肾动脉移植荧光素酶标记的Balb/c小鼠BMSCs,对照组小鼠取出显微血管夹后随即关闭切口,不移植BMSCs.磁共振成像对实验小鼠进行扫描,通过测量不同时间点的实验小鼠的左肾盂容积,比较实验组与对照组小鼠左侧输尿管梗阻解除后的左输尿管复通率,评估BMSCs对输尿管损伤的修复作用.结果:实验小鼠左侧输尿管梗阻后的左肾盂容积明显大于梗阻前(P＜0.01);实验组与对照组小鼠左侧输尿管梗阻后10d的左肾盂容积差异无统计意义(P=0.693);实验组小鼠左侧输尿管梗阻解除后的左输尿管复通率较对照组小鼠明显增高(P=0.012).结论:BMSCs经肾动脉移植可促进小鼠输尿管损伤的修复.

大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1 mRNA表达与弥散加权成像表观扩散系数的相关性

目的:探讨大鼠肝纤维化不同分期肝表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)与基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)mRNA表达的相关性。方法:采用猪血清腹腔注射联合高脂饮食建立肝纤维化大鼠模型。给药4周后开始,取实验组大鼠48只和对照组大鼠12只行磁共振弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)检查,计算b值=800 s/mm^2时的ADC值。DWI检查后快速处死大鼠,行病理检查,采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA表达。成模大鼠按肝纤维化病理分期结果又分为S0期组(n=4)、S1期组(n=11)、S2期组(n=12)、S3期组(n=10)和S4期组(n=9),比较肝纤维化各组ADC值及TIMP-1 mRNA的表达,并分析两者的相关性。结果:对照组、肝纤维化S1~4期组大鼠肝ADC值及TIMP-1 mRNA表达差异有统计学意义(分别F=46.54和53.87,均P<0.05),ADC值除对照组与肝纤维化S1期组、S1期组与S2期组、S2期组与S3期组比较差异无统计学意义(均P>0.05)外,其余各组间比较均有统计学意义(均P<0.05);各组TIMP-1 mRNA除肝纤维化S1期组与S2期组、S3期组与S4期组比较差异无统计学意义(均P>0.05)外,其余各组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。秩相关分析显示肝ADC值与TIMP-1 mRNA表达的变化呈负相关(r=–0.76,P<0.01)。结论:随大鼠肝纤维化进程不断加深,ADC值逐渐减低,TIMP-1 mRNA表达逐渐升高,二者呈负相关。

肿瘤相关巨噬细胞的极化与原发性胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤复发的相关性分析

目的:检测肿瘤相关巨噬细胞(TAM)分子表面标志物CD68、CD206在胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(PGI-DLBCL)初诊和首次复发的表达变化,分析其变化与临床相关参数的关系,探讨TAM的极化在PGI-DLBCL复发中的作用。方法:收集28例PGI-DLBCL患者初诊和首次复发后淋巴瘤标本,采用免疫组织化学法分别检测TAM的分子标志物CD68和CD206的表达变化。根据CD68和CD206初诊至首次复发后表达的变化,将28例患者分为"增强"、"稳定"和"减弱"3种情况,分析其变化与临床病理参数、疾病复发的相关性。结果:CD68和CD206不同程度表达的病例所占比例间存在显著差异(P<0.05),且CD68和CD206间存在一定相关性(P=0.008)。CD68和CD206表达变化与患者年龄、性别、分期、有无B症状、病理类型、ECOG评分和IPI评分无关,CD206的表达变化与原发部位有关(P<0.05)。CD68(P=0.23)和CD206 (P=0.818)变化与肿瘤复发时间无关。结论:M2-TAM的极化促进了PGI-DLBCL复发,可能成为预测PG-DLBCL复发的相关指标。

一非肌球蛋白重链9基因相关疾病家系患者的临床及分子生物学特点

目的:探讨一非肌球蛋白重链9基因相关疾病(MYH9-RD)家系的临床表型和分子生物学特性,以阐明MYH9-RD形成的分子机制。方法:通过临床评估和实验室检测对家系进行筛查,应用光学显微镜和自动血细胞计数仪对家系成员进行血小板计数及外周血细胞形态观察,应用聚合酶链反应和直接测序方法分析家系患者MYH9基因突变情况。结果:家系内MYH9-RD患者15例,所有患者均具有典型的"血小板减少、巨大血小板和粒细胞包涵体"三联症,而且都有轻至中度的出血倾向;临床表现具高度复杂性,并伴有严重的白血病、青光眼、心功能不全、转氨酶升高、血脂升高、哮喘、鼻炎及白内障等多种疾病;家系患者MYH9基因的所有外显子与侧翼区均未检测到致病性突变。结论:临床表现和实验室检测表明该家系MYH9-RD诊断成立,其临床表型复杂多样可能与家系患者MYH9基因的所有外显子与侧翼区未检测到致病性突变有关。

血清碳酸酐酶Ⅱ抗体ELISA方法的建立及应用评价

目的建立人血清碳酸酐酶(CA)Ⅱ抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,并对高血压肾病、慢性肾小球肾炎及2型糖尿病肾病患者和健康人群血清CAⅡ抗体水平进行应用评价。方法使用CAⅡ蛋白、CAⅡ的单克隆抗体及相应酶标抗体建立血清CAⅡ抗体ELISA检测方法,并进行精密度、灵敏度、稳定性、抗干扰性等方法学评价。结果血清CAⅡ抗体ELISA检测方法批内精密度为6.0%,批间精密度8.6%,灵敏度为0.032,且具有较好的抗干扰性和稳定性。慢性肾小球肾炎和2型糖尿病肾病患者血清CAⅡ抗体水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),高血压肾病组血清CAⅡ抗体水平与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立满足临床检验需求的血清CAⅡ抗体ELISA方法具有可行性,CAⅡ抗体可能作为自身抗体参与了慢性肾小球肾炎和2型糖尿病肾病的发生进展。

基于表达谱芯片数据的肝细胞癌基因的生物信息学分析

目的:肝细胞癌是全球范围最常见的恶性肿瘤之一,尤其是在亚洲和非洲。然而,肝细胞癌的分子机制仍不清楚。因而,利用生物信息学这一手段寻找参与肝细胞癌的关键基因,以及与肝细胞癌预后相关的基因至关重要。本研究通过对肝细胞癌基因芯片数据进行生物信息学分析,为探索肝细胞癌的分子机制提供理论依据。方法:从基因芯片公共数据库(GEO)下载肝细胞癌基因的芯片数据,经过GEO2R分析筛选差异表达基因后,分别通过DAVID在线分析、STRING-DB数据库、Cytoscape软件、GEPIA和Ualcan在线分析工具,进行差异基因的功能注释、通路分析、蛋白质互作网络分析、预后分析和启动子甲基化水平研究。结果:共筛选出87个肝细胞癌差异表达基因,其中上调基因15个,下调基因72个。功能注释和通路分析结果显示:这些差异基因主要影响氧化还原、细胞氨基酸衍生物代谢、羧酸代谢分解、损伤反应等生物过程,影响亚油酸和维生素A代谢、补体系统及级联反应、甾体激素生物合成和药物代谢等通路。经蛋白质互作网络分析获得2个关键模块区和2个关键基因AURKA和SPP2。预后分析结果显示这两个基因与肝细胞癌患者总生存时间显著相关。AURKA启动子甲基化水平在Normal组和Primary tumor组间差异无统计学意义(P=0.296),在Primary tumor组中SPP2启动子甲基化水平显著下降(P<0.001)。结论:通过生物信息学分析获得2个(AURKA和SPP2)与肝细胞癌相关的关键基因,它们与肝细胞癌患者预后密切相关;基因启动子甲基化不是AURKA和SPP2表达水平的主要因素。

老年患者大肠埃希菌产质粒AmpC酶基因型特点及耐药性分析

目的了解临床分离老年患者大肠埃希菌产质粒AmpC酶的基因型及其耐药(DR)性特点,为临床合理选用抗生素提供依据。方法收集2009年度老年患者临床不重复分离大肠埃希菌233株,用三维试验和确证试验分别进行羟氨苄青霉素(AmpC)酶和超广谱β内酰胺酶(ES-BLs)检测,用接合试验证实酶基因型的转移,通过PCR检测及序列分析进行质粒AmpC酶基因型确定,采用药敏纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验。结果 233株大肠埃希菌中,头孢西丁抑菌环直径≤17mm的有53株,占22.7%,酶提取物三维试验检测7株阳性,4株(1.7%)PCR扩增出CMY-2型质粒AmpC酶,有1株接合试验阳性;ESBLs阳性占68.7%(160/233)。药敏结果显示产质粒AmpC酶大肠埃希菌对二、三代头孢菌素、氨曲南、头孢西丁和含酶抑制剂的DR率明显高于非产酶株(P<0.05),所有大肠埃希菌对亚胺培南和美罗培南均100%敏感。结论从老年患者中成功分离出产CMY-2型质粒AmpC酶大肠埃希菌,产质粒AmpC酶菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药性明显高于非产酶株。

非淋球菌性尿道炎患者支原体和衣原体感染及耐药性分析

目的探讨海南地区皮肤科门诊泌尿生殖道衣原体(CT)和支原体感染及支原体药敏情况。方法 2008-2010年本院皮肤科门诊共1627例就诊患者采用PCR法检测标本中衣原体,采用试剂盒进行支原体培养和药敏试验。结果单纯CT阳性89例,占5.47%,单纯Uu阳性1073例,占65.95%,单纯Mh阳性38例,占2.34%,MH+Uu3例,占0.18%,CT+Uu25例,占1.54%,CT+MH2例,占0.12%,CT+Uu+MH0例。耐药情况为:Uu对四环素、美满霉素、阿奇霉素,克拉霉素及交沙霉素敏感性较好。Mh对四环素、交沙霉素及美满霉素敏感性好。结论本地区衣原体及支原体感染率较高,支原体经验性治疗首选美满霉素、四环素及交沙霉素。临床医师应根据药敏实验结果选择敏感抗生素。