PKCι在宫颈癌YAP1信号通路中的作用及与预后的关系

目的 探讨蛋白激酶Cι(protein kinase Cι,PKCι/PRKCI)在宫颈癌YAP1信号通路中的作用及其与预后的关系。方法 选择2013年1月至2015年1月全子宫术后宫颈正常组织(normal cervical tissue, NCT)、宫颈低级别鳞状上皮内病变组织(low-grade squamous intraepithelial lesions, LSIL)、宫颈高级别鳞状上皮内病变组织(high-grade squamous intraepithelial lesions, HSIL)以及早期宫颈鳞状细胞癌组织(squamous cell carcinoma, SCC),每组80例。采用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)法检测4组组织中PKCι以及YAP1表达水平并进行相关性、临床病理以及预后分析。将PRKCI基因过表达转染人宫颈癌SiHa细胞系,通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率,PRKCI抑制剂aurothiomalate处理,采用CCK-8检测存活率,Transwell实验检测细胞迁移。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测PRKCI基因表达,并予以转录组测序以及qRT-PCR验证。结果 NCT、LSIL、HSIL以及SCC患者PKCι、YAP1阳性率差异有统计学意义(P<0.05),且级别越高,PKCι、YAP1阳性率越高(P<0.05)。宫颈病变级别与PKCι以及YAP1阳性表达均呈正相关(P<0.05)。在SCC中PKCι以及YAP1阳性表达相互之间的均呈正相关(P<0.05)。PKCι以及YAP1阳性表达在SCC不同的分化程度以及有无脉管瘤栓之间均有统计学差异(P<0.05)。SCC患者生存预后分析中单因素分析显示,各蛋白表达、分化程度、淋巴结是否转移以及脉管瘤栓情况是影响总生存预后的独立因素(P<0.05);SCC患者各蛋白表达以及淋巴结是否转移是影响患者5年生存率的独立因素,其中PKCι、YAP1蛋白高表达以及淋巴结转移为危险因素(P<0.05)。SiHa细胞中PKCι转染组PKCιmRNA表达水平均明显升高,与空载脂质体组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 宫颈病变患者常伴有PKCι以及YAP1表达异常,相互之间可能存在协同作用,影响SCC的发生发展及其预后,促进SCC细胞增殖以及迁移,为SCC的发病机制研究及其诊治判断预后提供可能的依据。

鼻咽癌放疗患者张口功能锻炼器的研制与应用

目的研究鼻咽癌放疗患者张口功能锻炼的最佳方式。方法将120例鼻咽癌放疗患者随机分为三组各40例:自主张口锻炼组40例、咬软木塞组40例、张口功能锻炼器组40例。观察3种方式对鼻咽癌放疗患者张口程度影响及在放疗前、放疗结束后6个月观察三组患者门齿距的变化。结果三组放疗后张口困难程度和门齿距比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),其中张口功能锻炼器组优于其他两组。结论鼻咽癌放疗患者使用张口功能锻炼器进行张口锻炼,有利于维持门齿距,降低张口困难程度。

Notch信号通路在间充质干细胞分化成唾液腺腺泡细胞中的作用

目的观察Notch信号通路在骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成唾液腺腺泡细胞过程中的作用。方法从6~8周SD大鼠股骨及胫骨端分离MSCs,从1周龄SD大鼠颌下腺中分离唾液腺腺泡细胞,Transwell小室MSCs和腺泡细胞共培养,Westernblot测定Notch蛋白表达,流式细胞仪测定腺泡细胞的比例。结果MSCs和唾液腺腺泡细胞共培养2周后,52.34%±8.26%的MSCs向腺泡细胞分化。MSCs和唾液腺腺泡细胞共培养组Notch蛋白高表达,加入Notch信号激活剂后Notch表达上调,腺泡细胞比例升高至66.72%±9.43%(P<0.05),加入Notch信号抑制剂后Notch表达下调,腺泡细胞比例降低至38.55%±6.81%(P<0.05)。结论MSCs向唾液腺腺泡细胞分化过程中Notch通路激活,激活或抑制Notch通路可以增强或减弱MSCs转化为唾液腺腺泡细胞的效应。

基于生物信息学构建结肠癌内源性RNA网络

目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的高发病率和高病死率对人类健康构成了巨大威胁。环状RNA(circRNAs)和微RNA(microRNAs,miRNAs)作为相互竞争的内源性RNA(endogenous RNAs,ceRNAs),已被发现在致癌过程中发挥了重要作用。本文通过构建CRC中的circRNA/miRNA/mRNA调控网络,旨在探讨CRC发生过程中的具体分子机制。方法:从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库获得CRC的circRNA测序数据,筛选差异circRNA并用癌症特异性circRNA数据库(Cancer-specific CircRNA Database,CSCD)鉴定其结构;采用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载miRNAs和mRNAs测序数据并筛选差异基因;应用CircInteractome数据库预测差异circRNA对应的miRNA;采用DIANA、miRanda、PicTar和TargetScan数据库预测差异miRNA对应靶基因;应用R语言进行靶基因的基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)的富集分析;采用蛋白质相互作用分析数据库String结合网络可视化分析软件Cytoscape3.7.2构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图和筛选核心基因;验证前10位核心基因(Top10 hub基因)的mRNA表达量;采用Cytoscape3.7.2构建circRNAs/miRNAs/mRNAs和circRNAs/miRNAs/Top10 hub mRNAs网络图;采用real-time PCR检测hsa_circRNA_0065173、hsa-mir-450b、hsa-mir-582、腺苷酸环化酶5(adenylate cyclase 5,ADCY5)、毒蕈碱型乙酰胆碱受体M2(muscarinic acetylcholine receptor M2,CHRM2)、大麻素I型受体(cannabinoid receptor 1,CNR1)和溶血磷脂酸受体1(lysophosphatidic acid receptor 1,LPAR1)在CRC组织和癌旁组织中的表达水平。结果:共筛选出14个差异circRNAs,在CSCD上可查询到8个;获得circRNAs靶向miRNAs 34个;mRNA在进行PPI和Top10 hub基因筛选时,得到Top10 hub基因分别为CHRM2、黑色素浓集激素受体2(melanin concentrating hormone receptor 2,MCHR2)、G蛋白γ3亚单位(G-protein gamma 3 subunit,GNG3)、神经肽Y受体Y1(neuropeptide Y receptor Y1,NPY1R)、CNR1、LPAR1、ADCY5、腺苷酸环化酶2(adenylate cyclase 2,ADCY2)、G蛋白偶联受体γ7抗体G(gamma 7,GNG7)、趋化因子12(chemokine 12,CXCL12);Top10 hub基因的表达量验证显示:Top10 hub基因在CRC中均下调;构建的网络图表明hsa_circRNA_0065173可能通过调控hsa-mir-450b、hsa-mir-582而调控ADCY5、CHRM2、CNR1、LPAR1基因,这些基因可能可作为治疗CRC的潜在相关靶点。Realtime PCR结果显示:与癌旁正常组织比较,CRC组织中hsa_circRNA_0065173、ADCY5、CHRM2、CNR1和LPAR1的表达水平均显著降低(均P<0.05);hsa-mir-450b、hsa-mir-582的表达水平均显著升高(均P<0.05)。结论:本研究构建了潜在的circRNAs/miRNAs/mRNAs网络,它可为circRNA通过ceRNA机制介导CRC的发生、发展提供新的见解。

PKCι/YAP1在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的探讨蛋白激酶Cι(PKCι)、Yes相关蛋白1(YAP1)与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染在宫颈癌局部免疫微环境中的相关性。方法选择宫颈正常组织(NCT)、宫颈低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)以及宫颈鳞状细胞癌(SCC)各80例。收集4组蜡块组织,实时荧光PCR法测定4组组织高危型HPV感染率;免疫组织化学法检测4组组织中PKCι、YAP1、CD4及CD8表达水平并进行相关性以及临床病理分析。结果NCT、LSIL、HSIL以及SCC各组间高危型HPV感染率、PKCι、YAP1、CD4、CD8阳性率差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈病变级别与高危型HPV感染、PKCι、YAP1及CD8阳性表达均呈正相关(P<0.05),与CD4阳性表达呈负相关(P<0.05);在SCC中HPV感染、PKCι、YAP1以及CD8阳性表达相互之间的均呈正相关,而与CD4阳性表达均呈负相关(P<0.05);HPV感染、PKCι、YAP1及CD8阳性表达在SCC不同分化程度及有无脉管瘤栓之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈病变患者常伴有高危型HPV感染与PKCι、YAP1、CD4及CD8表达异常,相互之间可能存在协同作用,造成SCC的局部免疫抑制微环境,为SCC的发病机制研究及其诊治提供可能的策略。

E-Cadherin/β-Catenin与PTEN-PI3K/Akt在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其意义

目的通过检测卵巢浆液性肿瘤(OST)组织中上皮型-钙粘蛋白(E-Cadherin)、β-连环蛋白(β-Catenin)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)110α、磷酸化丝氨酸蛋白激酶B(p-PKB/AktSer473)以及Ki-67表达,揭示E-Cadherin/β-Catenin与PTEN-PI3K/Akt通路在OST发生发展中的作用,探讨OST的发生发展机制。方法应用免疫组化法,检测10例卵巢正常上皮(NOT)、12例浆液性囊腺瘤(OSA)、18例浆液性交界性囊腺瘤(OSBT)、60例卵巢浆液性癌(OSC)石蜡包埋组织中E-Cadherin、β-Catenin、PTEN、PI3K110α、p-AktSer 473以及Ki-67蛋白表达,并结合OSC的临床病理特征进行统计分析。结果(1)OSC组E-Cadherin、PTEN阴性细胞率均高于OSBT、OSA和NOT(均P<0.05)。(2)OSC浸润与非浸润的标本中E-Cadherin、PTEN阴性细胞率的差异有统计学意义(P<0.05);OSC有无淋巴结转移的标本中E-Cadherin、PTEN阴性细胞率差异也有统计学意义(P<0.05)。(3)OSC中PI3Kp110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67阳性细胞率高于OSBT、OSA和NOT,差异有统计学意义(P<0.01)。(4)OSC浸润与非浸润的标本比较,PI3Kp110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67阳性细胞率的差异有统计学意义(P<0.01);OSC有无淋巴结转移的标本比较,PI3Kp110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67阳性细胞率的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论E-Cadherin、PTEN蛋白表达的缺失伴随PI3K110α、p-AktSer473、β-Catenin以及Ki-67蛋白的过度激活,可能共同参与OST的发生发展,检测上述蛋白可为OST的临床诊治以及预后判断提供依据。

卵巢癌的二元论及其相关蛋白表达差异

目的比较E-钙粘附素(E-Cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)以及P53蛋白,在低级别浆液性癌(LGSC)、高级别浆液性癌(HGSC)、早期透明细胞癌(ECCC)与晚期透明细胞癌(ACCC)中表达的差异,探讨卵巢癌(OC)的二元论发病机制。方法收集我院2002年1月~2017年11月100例OC石蜡包埋组织,应用M.D.Anderson癌症中心的两级组织学分级系统将卵巢浆液性癌(OSC)进行分级,运用国际妇产科联盟(FIGO)分期系统将OC分期,采用免疫组织化学法检测22例LGSC、38例HGSC、20例ECCC以及20例ACCC组织中E-Cadherin、β-Catenin、PTEN、PI3K110α、p-AktSer 473以及P53蛋白表达,并结合临床病理特征进行统计分析。结果E-Cadherin、β-Catenin蛋白表达在LGSC与HGSC以及ECCC与ACCC之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN、PI3K110α、p-AktSer 473以及P53蛋白表达在LGSC与HGSC以及ECCC与ACCC之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在LGSC与ECCC中E-Cadherin、β-Catenin蛋白表达均呈负相关(P<0.05),在HGSC中PTEN与PI3Kp110α、p-AktSer473以及P53蛋白表达均呈负相关(P<0.05),在ECCC中PTEN与PI3Kp110α以及p-AktSer473蛋白表达均呈负相关(P<0.05)。发病年龄≤50与>50、G1~2与G3以及Ⅰ~Ⅱ与Ⅲ~Ⅳ期在LGSC与HGSC以及ECCC与ACCC之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论E-Cadherin蛋白表达的缺失和β-Catenin蛋白的过度激活共同参与LGSC以及ECCC的发生、发展,而PTEN蛋白表达的缺失,PI3K110α以及p-AktSer 473蛋白的过度激活共同参与HGSC及ECCC的发生、发展,P53蛋白的过度激活参与HGSC及ACCC的发生、发展,这为探讨OC的二元论发病机制、临床诊治以及预后判断提供了依据。

蛋白激酶Cι/Yes相关蛋白1与人乳头瘤病毒在肿瘤微环境中的作用研究进展

宫颈癌是女性最常见恶性肿瘤之一,有研究已证实人乳头瘤病毒(HPV)感染特别是高危型HPV,是引起宫颈癌的主要原因,但仅1%HPV感染者转变为宫颈癌,研究认为免疫抑制是其协同因子之一。蛋白激酶Cι(PKCι)是一种非经典型蛋白激酶C,PKCι通过下游效应因子Yes相关蛋白1(YAP1)促进免疫抑制,而YAP1则通过募集骨髓来源的抑制性细胞和CD8^+T细胞来促进肿瘤的免疫抑制;调节PKCι/YAP1为宫颈癌免疫治疗提供可能的靶点。本文对PKCι/YAP1与HPV在肿瘤微环境中的作用研究进展进行综述。

诱导多功能干细胞来源肝样细胞体内抗肝纤维化

背景:诱导多功能干细胞具有与胚胎干细胞相似的自我更新、增殖及分化能力,无来源限制,又不存在伦理问题,有望成为治疗肝病的细胞来源。目的:观察诱导多功能干细胞来源肝样细胞体内移植对肝纤维化的改善作用。方法:采用三步法将诱导多功能干细胞诱导分化为肝样细胞,采用糖原染色、LDL摄取实验、免疫组织化学法检测诱导分化细胞合成糖原能力、摄取LDL能力和甲胎蛋白、白蛋白、CK18蛋白表达。取成年雄性SD大鼠45只(由中南大学湘雅医学院附属海口医院医学实验动物中心提供),随机分为3组,分别为正常对照组、模型组、细胞移植组,每组15只。模型组、细胞移植组以腹腔注射四氯化碳方法建立肝纤维化模型,造模后第3天,细胞移植组尾静脉注射0.5 mL诱导分化21 d的肝样细胞,细胞浓度为2×10~9 L^(-1)。细胞移植后4周,取静脉血与肝组织标本,分析肝功能及肝纤维化指标变化与肝病理改变。结果与结论:(1)诱导分化21 d后,人诱导多能干细胞克隆团已经松散,以类圆形或多角形为主,呈铺路石样分布并密集排列,糖原染色可见细胞胞浆内有大量聚集的粉红色糖原,具备摄取LDL的能力,免疫组织化学法观察甲胎蛋白、白蛋白与CK18呈阳性表达;(2)细胞移植后4周,与正常组比较,模型组白蛋白水平显著降低(P <0.05),直接胆红素、间接胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶及Ⅳ型胶原、血清透明质酸酶、血清Ⅲ型前胶原水平均显著升高(P <0.05)。与模型组比较,细胞移植组白蛋白水平显著升高(P <0.05),直接胆红素、间接胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶及Ⅳ型胶原、血清透明质酸酶、血清Ⅲ型前胶原水平均显著降低(P <0.05);(3)细胞移植后4周,细胞移植组炎性细胞浸润、肝细胞变性与坏死程度较模型组均有不同程度的改善;(4)结果表明,诱导多功能干细胞来源的肝样细胞对大鼠肝纤维化具有明显改善作用。

亚砷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对MAPK/ERK信号通路的影响

目的探讨亚砷酸对肺腺癌A549细胞凋亡、MAPK/ERK信号通路的影响及其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验组采用不同浓度(1、3、6μmol/L)亚砷酸处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体,Western blotting检测Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3及MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达水平,RT-PCR检测PCNA、CDK2、CyclinA1表达量。结果实验组肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡率、凋亡小体数量随着亚砷酸处理时间延长而降低,且存在剂量反应效应(P<0.05);Western blotting结果显示,实验组肺腺癌A549细胞中Bax、p53、Caspase-3、p-JNK/JNK及p38蛋白水平高于对照组,而Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白含量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示实验组肺腺癌A549细胞PCNA、CDK2、CyclinA1表达量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论亚砷酸可以通过下调细胞周期基因水平、上调细胞凋亡相关因子含量、降低MAPK/ERK信号传导,来诱导肺腺癌A549细胞凋亡。

入院时PNLR作为转移性结直肠癌患者预后标志物的研究

目的探讨入院时血小板中性粒细胞与淋巴细胞比率(platelets-neutrophils to lymphocytes ratio,PNLR)与转移性结直肠癌患者临床病理特征的关系以及对患者预后的预测价值。方法回顾性选择2013年1月至2014年12月收治的转移性结直肠癌患者140例为研究对象。收集患者入院时血液标本,检测中性粒细胞、血小板和淋巴细胞数值,计算PNLR。绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC),确定PNLR最佳分界截点,并将患者分为PNLR<2000组(n=92)和PNLR≥2000组(n=48)。分析入院时PNLR与临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制不同PNLR组患者生存曲线,并应用Log-Rank检验进行比较。采用非条件Cox回归分析影响转移性结直肠癌患者预后的危险性因素。结果入院时PNLR与年龄、性别、辅助化疗、姑息化疗、寡转移、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)无关(均P>0.05),与临床表现、ECOG、新发转移、转移性切除术、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白蛋白、血小板、中性粒细胞、淋巴细胞有关(均P<0.05)。入组患者5年生存率为72.86%(102/140),PNLR<2000组患者5年生存率为81.52%(75/92)高于PNLR≥2000组的56.25%(27/48),差异有统计学意义(P<0.05)。非条件Cox回归分析发现,ECOG、CEA、白蛋白、PNLR是影响转移性结直肠癌患者生存的危险性因素(P<0.05)。结论入院时PNLR可作为预测转移性结直肠癌患者预后的重要指标,PNLR高者预后差。

lncRNA-PCAT6通过调控miR-185/SIX1轴对肺癌A549细胞上皮间质转化及化疗敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA-PCAT6(lncRNA-PCAT6)对肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)和化疗敏感性的影响,以及对微小RNA-185(miR-185)/SIX1轴的调控作用。方法:取A549细胞,分为空白组、lncRNA-PCAT6低表达腺病毒(PCAT6-Si)组、不含lncRNA-PCAT6-Si的空病毒载体(eGFP-Si-1)组、miR-185低表达腺病毒(miR-185-Si)组、不含miR-185-Si的空病毒载体(eGFP-Si-2)组、PCAT6-Si与miR-185-Si共转染(PCAT6-Si+miR-185-Si)组。RT-qPCR法检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达;Transwell法测定细胞侵袭、迁移能力;免疫荧光检测EMT标志物N-cadherin阳性表达;Western blot法测定SIX1、EMT标志蛋白E-cadherin、Vimentin及N-cadherin表达。取A549细胞系及其顺铂耐药细胞株A549/DDP,RT-qPCR及Western blot法检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达。取A549/DDP转染PCAT6-Si与miR-185-Si,并分为A549组、A549/DDP组、PCAT6-Si组、miR-185-Si组、PCAT6-Si+miR-185-Si、eGFP-Si-1组、eGFP-Si-2组;RT-qPCR检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达;CCK-8法检测各组细胞半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI);Western blot法检测SIX1、耐药相关蛋白P-gp表达;裸鼠荷瘤试验验证PCAT6对A549/DDP细胞化疗敏感性的作用。双荧光素酶试验验证PCAT6与miR-185之间的靶向关系。结果:与A549细胞相比,A549/DDP细胞IC50及RI、lncRNA-PCAT6、SIX1及P-gp表达升高(P<0.05),miR-185表达降低(P<0.05)。敲低A549细胞中lncRNA-PCAT6表达后,miR-185表达升高,SIX1蛋白表达降低,细胞侵袭、迁移能力及EMT进程降低,IC50及RI降低、肿瘤体积减小,且各指标变化差异显著(P<0.05)。敲低miR-185可逆转lncRNA-PCAT6的上述作用。双荧光素酶报告试验证实lncRNAPCAT6与miR-185之间有靶向负调控作用。结论:肺癌A549细胞中lncRNA-PCAT6低表达可靶向上调miR-185,下调SIX1,抑制EMT进程,增强对DDP化疗的敏感性。

新辅助化疗后再分期联合放疗治疗局部晚期鼻咽癌的疗效观察

目的探讨新辅助化疗强度及化疗后降期与否对鼻咽癌治疗预后的影响。方法选取2009-10-01-2012-10-01海口市人民医院接受新辅助化疗的鼻咽癌初治患者226例。患者根治性放疗前行2~4个周期新辅助化疗,影像学检查评估疗效,重新进行临床分期,分为降期组(196例)和未降期组(30例),2组患者均行根治性放疗及同步化疗,完成全部治疗后按期进行随访。SPSS 20.0对数据进行统计学分析,Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果所有患者生存率3年为88.1%(95%CI=0.76~0.89),5年为75.4%(95%CI=0.69~0.78),中位生存期67个月。完成诱导化疗后,196例患者降期,30例未降期,降期组和未降期组中位生存时间分别为68和45个月。降期组和未降期组患者3年总生存率为91.0%(95%CI=0.89~0.93)和69.5%(95%CI=0.66~0.72),差异有统计学意义,χ^(2)=8.47,P=0.005;5年为81.6%(95%CI=0.78~0.86)和53.3%(95%CI=0.49~0.61),差异有统计学意义,χ^(2)=9.15,P=0.001。降期组和未降期组患者3年无进展生存期(FFS)为84.6%(95%CI=0.76~0.88)和62.7%(95%CI=0.59~0.68),差异有统计学意义,χ^(2)=6.82,P=0.008;5年为76.5%(95%CI=0.71~0.89)和42.6%(95%CI=0.40~0.51),差异有统计学意义,χ^(2)=8.93,P=0.007。降期组和未降期组患者3年局部无复发生存期(local recurrence-free survival,LRFS)为95.0%(95%CI=0.90~0.98)和82.3%(95%CI=0.78~0.87),差异有统计学意义,χ^(2)=5.52,P=0.010;5年为82.3%(95%CI=0.77~0.89)和43.2%(95%CI=0.39~0.48),差异有统计学意义,χ^(2)=7.87,P=0.002。诱导化疗预后完成2个周期较完成3个周期(χ^(2)=8.79,P=0.003)和4个周期(χ^(2)=8.92,P=0.003)者差,完成3和4个周期诱导化疗患者预后差异无统计学意义,P>0.05。降期患者中,T和N降期者3年总生存率为81.2%(95%CI=0.76~0.88)和95.5%(95%CI=0.86~0.99),差异有统计学意义,χ^(2)=3.59,P=0.015;5年总生存率为64.7%(95%CI=0.59~0.69)和90.3%(95%CI=0.86~0.94),差异有统计学意义,χ^(2)=3.07,P=0.013。结果提示N降期患者预后更好。生存预后因素分析显示,诱导化疗周期长(OR=2.44,95%CI为=1.13~4.36)和化疗后不降期(OR=1.74,95%CI为1.05~3.96)是局部晚期鼻咽癌患者总生存预后的危险性因素。结论新辅助化疗明显改善鼻咽癌降期患者预后,合适的诱导化疗强度为3~4个周期。

宫颈癌局部免疫微环境及其相关蛋白表达分析

目的分析高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)感染及CD4、CD8在宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)局部免疫微环境中的作用,探讨HR-HPV感染与蛋白激酶Cι(protein kinase Cι,PKCι)以及Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)的相关性。方法收集2013年1月至2015年1月中南大学湘雅医学院附属海口医院全子宫术后CSCC、宫颈高级别鳞状上皮内病变(cervical high-grade squamous intraepithelial lesions,CHSIL)、宫颈低级别鳞状上皮内病变(cervical low-grade squamous intraepithelial lesions,CLSIL)以及正常宫颈组织(normal cervical tissue,NCT)的组织学标本共四组,每组80例,共320例。根据各病例在我院就诊时检测的HR-HPV感染的结果,计算各组HR-HPV的感染率。采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测各组组织中CD4、CD8及PKCι、YAP1蛋白表达水平,分析宫颈病变患者HR-HPV感染与CD4、CD8、PKCι、YAP1蛋白表达之间的相关性及影响CSCC患者的预后因素。结果与NCT组相比,LSIL组、HSIL组及CSCC组HR-HPV感染率、PKCι、YAPl及CD8阳性率明显升高,CD4阳性率明显降低,组间差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为125.20、122.25、126.82、55.77、71.59,P值均<0.05),且PKCι、YAP1、CD8阳性率越高,CD4阳性率越低。宫颈病变严重程度与HR-HPV感染率、CD8及PKCι、YAP1蛋白阳性表达率均呈显著正相关(r值分别为0.60、0.40、0.58、0.59,P值均<0.05),而CD4蛋白阳性表达率与宫颈病变严重程度呈显著负相关(r=-0.46,P<0.05)。Cox多因素分析结果表明,HR-HPV感染、CD8、PKCι、YAP1蛋白高表达以及淋巴结转移为影响CSCC预后的危险因素,CD4高表达为CSCC预后的保护因素。结论CSCC的发病机制与HR-HPV感染密切相关,同时伴随PKCι、YAP1蛋白的过表达及局部免疫微环境失衡,这有可能为研究CSCC的发病机制及其诊治预后提供一定的依据。

不同靶区确定法放射治疗脑胶质瘤的临床研究

目的:比较两种放疗靶区确定方法对脑胶质瘤疗效的影响及不良反应的差别,探讨放疗靶区确定的方法。方法:116例脑胶质瘤随机分为2组,GTV外放组以增强CT和MR图像融合勾画的大体肿瘤外扩形成的CTV作为靶区,GTV+水肿区外放组以相同方法勾画的大体肿瘤加外周水肿区外扩形成的CTV为靶区,比较两组1、2和3年局部控制率、生存率、近期及远期不良反应。结果:MR图像上勾画的GTV较CT图像上的勾画体积平均增大17%。两组病理Ⅲ+Ⅳ级者1、2和3年生存率分别为79.2%、62.5%、37.5%和81.0%、71.4%、47.6%,差异无统计学意义(χ2=0.611,P=0.434)。两组病理Ⅲ+Ⅳ级者1、2和3年局部控制率分别为79.2%、58.3%、31.8%和81.0%、66.7%、42.9%,差异无统计学意义(χ2分别为0.05、0.331和0.56,P值分别为0.843、0.585和0.468)。但病理Ⅲ、Ⅳ级患者中两组局部控制率和生存率差距在治疗后18个月起有随时间延长而加大的趋势,GTV外放组下降速率相对较快。结论:CT和MR图像融合应作为胶质瘤放疗计划的常规步骤,高病理分级者以大体肿瘤及外周水肿区作为GTV似更有利,低分级者GTV不必包括水肿区。

ADAm12在宫颈癌组织中的表达及在患者疾病预后中的临床意义

目的分析去整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metallop rotease 12,ADAM12)在宫颈癌组织中表达及在宫颈癌患者预后中的临床意义。方法收集2010年4月至2013年1月来中南大学湘雅医学院附属海口医院妇科就诊且行手术治疗的118例宫颈癌组织为研究组,选择同一宫颈癌患者的癌旁组织为对照组,采用免疫组化法检测所有标本的ADAM12。分析ADAM12与宫颈癌的病理参数及5年生存的关系。结果ADAm12蛋白表达与年龄无显著相关性(P>0.05),肿瘤直径较大、FIGO分期较晚、分化程度较低和淋巴结转移的宫颈癌组织ADAm12表达增高(P<0.05);所有患者均获得5年随访,随访118例(100.00%),生存101例(85.59%),死亡17例(14.41%),死亡原因10例癌转移,7例复发。ADAm12蛋白阳性表达的死亡例数较多(P<0.05)。结论ADAM12高表达与宫颈癌预后不佳可能存在关联。

卵巢浆液性肿瘤分类分级的临床意义及其与p53和Ki-67蛋白表达的关系

目的探讨卵巢浆液性肿瘤(OST)分类分级的临床意义以及分类分级与p53、Ki-67蛋白表达的关系,为OST的准确诊断及合理治疗提供依据。方法收集中南大学湘雅医学院附属海口医院2012年1月至2017年11月石蜡包埋卵巢组织100例,参照世界卫生组织(WHO)卵巢肿瘤组织学分类、2013年8月于美国马里兰州举行的卵巢交界性肿瘤工作会议制定的标准以及美国MD Anderson癌症中心的两级组织学分级系统对OST进行分类分级。100例卵巢组织包括10例正常卵巢组织(NOT)、12例卵巢浆液性囊腺瘤(OSA)、18例卵巢交界性浆液性肿瘤(OSBT)、22例低级别浆液性癌(LGSC)和38例高级别浆液性癌(HGSC)。采用免疫组织化学法检测各类型石蜡包埋组织中p53以及Ki-67蛋白表达。分析各类型OST患者临床特征及其与p53蛋白表达和Ki-67阳性指数间的关系。结果OSBT、LGSC、HGSC组发病年龄>50岁[38.9%(7/18)、45.5%(10/22)、73.7%(28/38)]、低分化[0(0/18)、0(0/22)、100.0%(38/38)]、Ⅲ~Ⅳ期[5.6%(1/18)、27.3%(6/22)、39.5%(15/38)]患者比例依次升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。NOT、OSA、OSBT、LGSC、HGSC组间,p53蛋白阳性率[20.0%(2/10)、25.0%(3/12)、27.8%(5/18)、31.8%(7/22)、57.9%(22/38)]、Ki-67阳性指数[(10.40±0.00)%、(31.49±6.53)%、(42.81±6.84)%、(74.29±6.54)%、(77.04±8.88)%]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。卵巢浆液性癌(LGSC+HGSC)患者中,发病年龄≤50岁和>50岁组间p53蛋白阳性率和Ki-67阳性指数差异均无统计学意义(均P>0.05),在不同组织分化程度、临床分期以及有无转移组间二者差异均有统计学意义(均P<0.05)。p53蛋白阳性表达的NOT、OSA、OSBT、LGSC、HGSC患者间Ki-67阳性指数差异有统计学意义(P<0.01)。结论OST分类分级与患者发病年龄、组织分化程度、临床分期相关,其可用于指导治疗以及判断预后。p53蛋白阳性率及Ki-67阳性指数随乳腺病变分级升高而增加,可能与OST的发生、发展有关。

细胞减灭术联合腹腔热灌注化疗治疗腹膜假性黏液瘤患者预后分析

目的评估细胞减灭术(CRS)联合腹腔热灌注化疗(HIPEC)治疗腹膜假性黏液瘤(PMP)患者的临床预后。方法回顾性分析2012年1月至2018年12月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的42例PMP患者的临床资料。所有患者均行开腹CRS联合HIPEC,对患者的手术情况及预后情况进行分析。结果42例PMP患者中腹膜腺黏液蛋白沉积病(DPAM)占61.9%(26/42),腹膜黏液蛋白癌病(PMCA)占28.6%(12/42),混合型占9.5%(4/42)。CRS联合HIPEC后主要手术并发症(Ⅲ~Ⅳ级)发生率为21.4%(9/42)。logistic回归分析显示,既往手术评分(OR=35.765,95%CI 2.746~43.986,P=0.001)及CRS完成度评分(OR=23.865,95%CI 1.345~347.876,P=0.028)是影响PMP患者术后主要并发症的独立因素。42例PMP患者总生存时间为(64.8±4.1)个月,无瘤生存时间为(54.0±4.9)个月;3年和5年总生存率分别为80.8%和65.9%,3年和5年无瘤生存率分别为59.5%和54.6%;不同病理亚型患者的总生存时间差异有统计学意义(P=0.022)。结论CRS联合HIPEC治疗PMP安全有效,多数患者预后较好。

全身炎症评分在不可切除转移性结直肠癌患者预后评估中的价值

目的探讨全身炎症评分(SIS)对不可切除转移性结直肠癌(mCRC)患者预后评估中的价值。方法回顾性分析2014年1月至2016年12月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的130例不可切除mCRC患者的临床资料。分析SIS与不可切除mCRC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,应用Cox回归模型对影响不可切除mCRC患者预后的危险因素进行单因素及多因素分析。结果根据SIS结果将患者分为0分组(40例)、1分组(58例)和2分组(32例)。年龄、性别、原发肿瘤位置、功能状态评分、组织类型、RAS基因状态、转移器官数目、腹膜扩散、分子靶向治疗方面分层患者间不同SIS患者构成差异均无统计学意义(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,SIS 0分、1分、2分组5年总生存率分别为37.5%、19.0%、6.3%,三组差异有统计学意义(χ^(2)=3.152,P<0.01)。多因素Cox回归分析结果显示,女性、原发肿瘤位置为右侧、SIS 1-2分是不可切除mCRC患者总生存的独立危险因素(均P<0.05)。结论SIS可能为不可切除mCRC患者预后评估的重要指标,高SIS患者预后差。