人脂肪干细胞的提取和鉴定

背景:脂肪干细胞是存在于脂肪中的全能干细胞,具备自我更新能力与多向分化潜能,遗传背景相当稳定,体内植入后免疫排斥少,是一种比较理想的种子细胞。目的:提取人大网膜脂肪干细胞,并进行成脂和成骨分化能力鉴定。方法:收集手术患者大网膜的脂肪组织,经Ⅰ型胶原酶消化、过滤、离心后进行原代培养,观察细胞生长状态;用细胞计数法绘制人脂肪干细胞增殖曲线,计算处于对数生长期的倍增时间;用相应的定向诱导液诱导人脂肪干细胞向脂肪细胞及骨细胞方向分化,并用油红O染色、茜素红染色进行鉴定。结果与结论:从手术患者大网膜脂肪组织中成功分离人脂肪干细胞,贴壁生长的人脂肪干细胞为长梭形,形态类似成纤维细胞。第3代人脂肪干细胞生长曲线呈S形,对数生长期人脂肪干细胞的倍增时间为45.90 h。人脂肪干细胞经成脂、成骨定向诱导分化2,3周后,油红O染色显示细胞内有大小不等的橘红色脂肪滴,茜素红染色可见着橘红色的典型钙化结节,提示所培养的脂肪干细胞具有向脂肪细胞、骨细胞系分化的能力。

UGT1A1*6基因多态性与IP方案治疗广泛期小细胞肺癌患者临床疗效和毒副反应的相关性分析

目的：探讨尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1＊6（UGT1A1＊6）基因多态性与IP方案治疗的广泛期小细胞肺癌（ED-SCLC）患者临床疗效和毒副反应的相关性。方法选择2010年3月至2013年4月我院应用IP方案治疗的46例ED-SCLC患者，化疗前采全血提取基因组DNA，PCR法扩增目的基因片段，焦磷酸测序法测定UGT1A1＊6的基因多态性，化疗过程中观察并分析患者的临床疗效及不良反应的发生情况，探讨UGT1A1＊6基因多态性与不良反应和疗效之间的关系。结果46例患者中，UGT1A1＊6位点野生型G/G 34例（73％），杂合突变型G/A 8例（17％），纯合突变型A/A 4例（8％）。化疗期间，突变杂合型（G/A）及纯合突变型（A/A）患者3-4级腹泻和中性粒细胞减少的发生率明显高于UGT1A1野生型（G/G）（P〈0.05），UGT1A1＊6各种基因型之间血小板减少的发生率比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 UGT1A1＊6基因多态性与IP方案治疗ED-SCLC发生严重的腹泻和中性粒细胞减少有关，但与其临床疗效无关。

较高浓度神经肽Y抑制人脂肪干细胞增殖并促进其分化

目的研究不同浓度神经肽Y(NPY)对人脂肪干细胞(h ADSC)增殖及分化的影响。方法分离h ADSC,用(10^(-6)~10^(-15))mol/L NPY诱导刺激h ADSC,MTT法检测其增殖;分别用完全培养基、NPY和胰岛素处理h ADSC,油红O染色观察h ADSC的分化;Western blot法检测各组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、诱导细胞死亡的d FF45样效应因子C(Cidec)和受体相互作用蛋白140(RIP140)的表达水平。结果 (10^(-11)~10^(-15))mol/L NPY促进h ADSC增殖,(10^(-6)~10^(-10))mol/L NPY抑制h ADSC增殖;(10^(-7)、10^(-9)、10^(-11))mol/L NPY均诱导h ADSC分化,并增加PPARγ、C/EBPα蛋白表达,同时促进白色脂肪组织特异性标志Cidec、RIP140蛋白的表达。结论较低浓度NPY促进h ADSC增殖,较高浓度NPY抑制h ADSC增殖并促进其分化。

缺营养状况下培美曲塞对小鼠肺癌细胞系LLC化疗的影响

目的观察小鼠肺癌细胞系LLC分别在全营养和缺营养(无氨基酸无血清培养)情况下,使用化疗药物培美曲塞的效果。方法噻唑蓝(MTT)方法检测培美曲塞对小鼠肺癌细胞LLC细胞的半抑制浓度(IC50),决定培美曲塞干预浓度。将小鼠肺癌细胞系(LLC)培养在全营养和无氨基酸无血清培养基中,分别用培美曲塞处理12 h,用MTT法检测细胞活性,用采用凯基活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB荧光显微镜法)检测细胞凋亡。结果培美曲塞对LLC的IC50为28.67 mM。将0、3.58 mM、7.16 mM、14.33 mM、28.67 mM和57.34 mM做为培美曲塞的干预浓度,培美曲塞浓度在以上干预浓度下,无营养培养基中(NF),对LLC的抑制率分别为0,17.4%,26.6%,37.7%,39.0%,45.8%;全营养组(FN)中的抑制率为0,23.7%,30.2%,48.9%,57.4%,67.4%。缺营养的状况下,培美曲塞对小鼠肺癌细胞LLC的杀伤作用明显下降(P<0.05)。缺营养和全营养的情况下,LLC细胞的凋亡率分别为24.9%,22.6%;缺营养情况下和全营养情况下,肺癌细胞在化疗药物作用下的死亡率分别为25.3%,34.2%。结论缺营养的情况下,小鼠肺癌细胞对化疗药物培美曲塞的敏感性降低。