2003年湘雅医院临床分离菌的分布及耐药性分析

目的 了解湘雅医院临床分离病原菌的分布及耐药性，为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法 应用MicroSean微生物分析系统，结合K-B法药敏试验对临床分离菌株进行鉴定和药物敏感性测定，以SPSS软件对结果进行统计分析。结果 3747株病原菌中，革兰阴性（G^-）杆菌2052株，占54，8％；革兰阳性（G^-）球菌1629株，占43.5％。在G^-杆菌中分离率居前五位的依次为铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌；G杆菌对美洛培南的耐药率最低，在0％～6．4％之间；其次为头孢哌酮／舒巴坦。G^-杆菌对其他常用抗菌药物的耐药率为4.4％-85．9％。G^＋球菌中，以凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）分离率最高，占G^＋球菌的57.0％（929／1629）。甲氧两林耐药株分别占金黄色葡萄球菌（SA）和CNS的55．1％和61.7％；尚未发现万古霉素耐药或中介菌株。葡萄球菌对强力霉素的敏感性仅次于万古霉索，耐药率仅为2．8％～4．4％，而对红霉素、复方新诺明、阿齐霉素的耐药率达73.3％～88．6％。结论 葡萄球菌、肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌及肠球菌是湘雅医院临床分离的主要病原菌。临床分离菌株耐药性已十分严重，应加强耐药性监测、合理应用抗菌药物。

医学本科生传染病学教学的几点体会

在本科98级传染病学的教学中,笔者取得了良好的教学效果,主要是教学组老师从思想上重视教学,积极进行教学改革,注重学生能力和素质的培养,引导学生主动地提高自己的知识水平。

蛋白质芯片技术及其在传染病研究中的应用进展

蛋白质芯片是一种新型的蛋白质功能分析技术,具有高通量、快速、敏感、准确、微型化和自动化等特点。它在传染病病原体的检测、毒力及致病机制、耐药机制的研究、宿主免疫机制的阐明、新替代疫苗的研制、新抗生素靶位的发现等方面将有着巨大的应用前景。本文就蛋白质芯片技术及其在传染病研究中的应用进展作了概述。

型特异性引物PCR研究HBV基因型与临床表现的关系

目的 :研究乙肝病毒 (HBV)基因型与临床表现的关系。方法 :收集湖南省慢性携带、慢性轻度、慢性中度、慢性重度和慢性重型等 5种临床类型的慢性乙肝病人的血清 2 2 0例 ,采用型特异性引物进行巢式PCR ,对血清中的HBV进行基因分型 ,比较不同基因型的临床资料。结果 :发现B ,C两种基因型 ,比例分别为 86 .4 %和 13.6 %。随着病情加重 ,基因C型的比例增加 (P <0 .0 5 )。C型的谷丙转氨酶 (ALT)、总胆红素 (TBIL)、HBV DNA等平均水平均较B型高 ,但无统计学意义。C型的ALT升高率 (96 .7% )显著高于B型 (75 .2 % ) (P <0 .0 5 )。B ,C两型的HBeAg阳性率总体无差别 ,但在慢性重型以及 2 130岁年龄段的患者中 ,C型的HBeAg阳性率 (35 .0 %和 5 0 .0 % )均显著高于B型 (14 .4 %和 2 4 .5 % ) (均P <0 .0 5 )。结论 :湖南省HBV基因型以B ,C型为主 ,基因型与临床表现有相关性 。

幽门螺杆菌对肝癌细胞HepG2的体外细胞毒作用

背景与目的:幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因,人和动物胃肠外疾病亦与HP感染密切相关,本研究探讨HP对肝癌细胞株HepG2的形态和生长的影响。方法:利用体外细胞培养技术,将不同浓度的cagA(+)HP和cagA(-)HP与HepG2共同培养,应用细胞形态学观察、DNA电泳、透射电镜、MTT检测、酶学检测等技术,观察HP菌液对体外培养HepG2细胞的形态、生长速度和酶学改变的影响。结果:(1)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大和作用时间的延长,HepG2细胞形态由贴壁的梭形变为圆形,贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,并且细胞周围出现碎片;(2)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大,可见DNA条带;(3)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大和作用时间的延长,HepG2细胞核染色质浓缩,呈新月形聚集于核缘,胞质浓缩,可见空泡;(4)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大,对HepG2细胞杀伤率逐渐增强(P<0.01);(5)与cagA(+)HP菌液共同孵育后,HepG2细胞出现ALT、LDH升高(P<0.01);(6)未发现cagA(-)HP对陈仁,等.幽门螺杆菌对肝癌HepG2细胞生长的影响。结论:cagA(+)HP对HepG2细胞具有明显的体外细胞毒作用,其毒性作用与HP菌液的浓度和作用时间呈明显正相关。

重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞的增殖及凋亡的影响

探讨重楼皂苷Ⅰ(paris saponinⅠ,PSⅠ)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响及相关机制.MTT法检测PSⅠ对肝癌SMM-C7721细胞株的增殖抑制作用,Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化,流式细胞术Propidium iodide(PI)染色检测细胞周期及凋亡的情况,免疫印迹的方法检测Fas、Bcl-2、Bax、细胞周期素D1(cell cycle regulatory factor D1,Cyclin D1)和细胞周期素E(cell cycle regulatory factor E,Cy-clin E)的表达情况.PSⅠ能时间和浓度依赖性的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).干预后的SMMC-7721细胞染色质浓缩,核碎裂,凋亡小体形成,呈典型的凋亡变化.细胞周期阻滞于G1期,并且有凋亡峰形成,呈浓度依赖性.PSⅠ能浓度依赖性地上调Fas和Bax的表达,下调Bcl-2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白的表达水平.PSⅠ可能是通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制,从而抑制肝癌细胞的增殖.

幽门螺杆菌对人肝细胞系HepG2原癌基因c-fos表达的影响

目的 探讨H .pylori对HepG2c-fos基因表达的影响。 方法 将H .pylori与HepG2共同培养 1、3、6、12和2 4h ,采用RT -PCR和Westernblot方法检测不同作用时相细胞的c -fosmRNA和蛋白表达。结果 cgA+ H .pylori作用HepG2后c -fos呈短暂一过性表达升高 ,c -fosmRNA、蛋白质在H .pylori感染后 1h开始增加 ,6h达高峰 ,表达水平分别为对照组的 2 .5倍和 1.6倍 (P <0 .0 1)。 12h开始下降 ,2 4h基本恢复到刺激前水平。而cgA-H .pylori及空肠弯曲菌与HepG2细胞共培养后 ,未见该基因的表达升高。结论 cag+ A H .pylori可诱导HepG2c -fos基因表达升高 ,其在肝癌发生中的作用有待进一步研究。

阿德福韦酯联合胸腺肽α_1与单用阿德福韦酯比较治疗慢性乙肝的系统评价

目的系统评价阿德福韦酯联合胸腺肽α1(ADF+Tα1)与单用阿德福韦酯比较治疗慢性乙型肝炎的疗效。方法电子检索Cochrane图书馆、MEDLINE、PubMed、中国生物医学文献数据库、CNKI、万方、VIP数据库,均从建库检索至2010年2月,并追踪已获文献的参考文献,纳入ADF+Tα1与单用ADF比较的随机对照试验(RCT)。由2名研究者按照Cochrane Handbook 5.0.2手册独立纳入试验、评价质量及提取数据,采用RevMan5.0软件进行Meta分析。结果最终纳入11个RCT,共895例患者,其方法学质量均为C级。Meta分析结果显示:主要结局指标(HBeAg血清转换)在治疗6个月、12个月时,试验组均优于对照组,其差异有统计学意义[RR(95%CI)分别为1.77(1.38,2.27)和1.74(1.44,2.10)];次要结局指标(HBV-DNA转阴、HBeAg转阴、ALT复常、HBV-DNA变异,完全应答、HBsAg阴转)在治疗6个月、12个月后,试验组也均优于对照组,且差异有统计学意义。结论本系统评价结果表明,ADF+Tα1治疗慢性乙型肝炎疗效优于单用ADF,且在治疗6个月时便可观察到明显差异,但受纳入文献质量限制,以上结论尚需高质量的临床试验进一步证实。

FASL、TRAIL在慢性乙型肝炎患者外周血淋巴AICD中的作用

目的:探讨FASL、TRAIL在慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes,PBLs)活化诱导细胞凋亡(activation induced cell death,AICD)中的作用。方法:分离20例正常人、24例慢性乙型肝炎患者及24例慢性重型乙型肝炎患者的PBLs,体外单独或与植物血凝素(PHA)共同培养48小时,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫组化SABC法检测FASL、TRAIL.在慢性乙肝患者PBLs的表达。结果:PHA活化前,FASL.mRNA、TRAIL mRNA在上述3组研究对象外周血淋巴细胞均不表达;PHA活化后;二者表达明显上调,且慢性乙型肝炎组高于正常对照组,慢性重症肝炎组低于正常对照组,差异有显著性(P<0.01)。正常人静息的外周血淋巴细胞不表达FASL和弱表达TRAIL,经PHA活化后,二者表达均明显上调(P<0.01)。结论:FASL、TRAIL参与了乙型肝炎患者外周血淋巴细胞AICD过程,并可能是其重要效应分子。

丙型肝炎病毒核心区蛋白在HepG2细胞中的表达

目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中 ,用脂质体包裹后转染肝癌细胞系HepG2 ,通过G4 18筛选获得稳定转染细胞系 ,并通过间接免疫荧光法检测HepG2中丙型肝炎病毒核心区蛋白的表达。结果 :克隆的基因全长 5 94bp ,并经测序和重组质粒双酶切证实为所需目的基因 ;经间接免疫荧光验证实转染了目的基因的HepG2细胞中有丙型肝炎核心区蛋白的表达。结论 :丙型肝炎病毒核心区蛋白能在HepG2细胞中稳定表达。

人工肝支持系统治疗重型肝炎的临床研究

为探索治疗重型肝炎的有效方法。方法 :在综合疗法基础上采用人工肝支持系统治疗重型肝炎。结果 :治疗后血清总胆红素和谷丙转氨酶明显下降 (P <0 .0 1) ,治疗后凝血酶原时间明显缩短 (P <0 .0 5 ) ,治疗组重型肝炎好转率为 72 % (31/4 3) ,显著高于对照组 (46 .8% ,2 2 /4 7) (P <0 .0 5 )。结论

超广谱β-内酰胺酶的产生与临床抗生素应用的相关性研究

目的 :了解超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的产生与临床抗生素应用的关系。方法 :应用双纸片扩散法对临床分离的革兰氏阴性杆菌进行ESBLs检测 ,并对患者在ESBLs检测前的抗菌药应用情况进行调查。结果 :16 1株革兰氏阴性杆菌中检出ESBLs阳性菌 5 7株 (35 4 % )。感染ESBLs阳性菌患者在检测前使用任何抗菌药及使用第三代头孢菌素的比率 [分别为 96 4 % (5 5 5 7)和 4 2 1% (2 4 5 7) ]明显高于感染ESBLs阴性菌患者在检测前使用任何抗菌药及使用第三代头孢菌素的比率 [分别为 80 6 % (84 10 4 )和 16 3% (17 10 4 ) ],两者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 5 ) ;并且前者使用第三代头孢菌素时间 [(7 5± 5 4 )d]也明显长于后者 [(2 7± 2 .6 )d](P <0 .0 0 5 )。结论 :抗菌药的应用尤其是第三代头孢菌素的应用 ,是ESBLs阳性菌发生的危险因素。

各型病毒性肝炎患者血清一氧化氮水平的测定及临床意义

目的 :为了解一氧化氮 (NO)在肝损害中所起的作用 ,采用硝酸还原酶法检测慢性肝炎、重型肝炎、肝硬化患者血清NO水平。慢性肝炎组血清NO值升高 ,与重型肝炎、肝硬化及对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而重型肝炎组、失代偿性肝硬化组、对照组中血清NO值比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,PTA <40 %的患者NO值与 >40 %的患者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,低白蛋白血症患者其NO值与正常白蛋白血症患者比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结果显示在引起肝损害机制中 ,一氧化氮具有双重效应作用。

脂多糖诱导肝细胞HepG2释放HMGB-1的研究

观察小剂量LPS（lipopolysaccharide）刺激下非坏死HepG2细胞是否存在HMGB1（high mobility group box—1 protein）移位及释放．以终浓度为100μg／L的LPS作用HepG2和RAW264．7细胞0、4、8、12、16、20、24h．LPS作用16-24h．HepG2和RAW264．7细胞培养上清中均可以检测到明显的HMGB1，与对照组差别有显著性（P〈0．05）．而MTT法和上清中LDH（lactate dehydrogenase）含量测定显示，LPS处理24h的HepG2存活率仍然非常高．免疫荧光观察到HMGB1的释放伴随着其从细胞核向胞浆的移位．由此可见，经LPS诱导，非坏死状态的HeDG2细胞可发生HMGB1的移位及释放．

幽门螺杆菌对肝细胞系HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA表达的影响

目的:研究幽门螺杆菌(H pylori)处理对肝细胞系HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA表达的影响. 方法:将H pylori与HepG2共同培养1 h、3 h、6 h、12 h 和24 h,采用半定量RT-PCR方法分析共培养不同时间后HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA的表达水平. 结果:CagA+ H pylori与HepG2细胞共同孵育1 h后,即可见cyclinD1 mRNA表达升高,3h达高峰,约为对照的4.0倍(P<0.01);共同孵育3 h后即可见PCNA mRNA表达升高,6 h达高峰,约为对照的2.0倍(P<0.05).而CagA- H pylori 和HepG2细胞共同孵育后,未见两基因的表达升高. 结论:CagA+ H pylori能诱导HepG2 cyclinD1,PCNA mRNA表达升高,提示其在肝癌的发生中起一定作用.

C_(57)BL/6小鼠幽门螺杆菌感染动物模型的建立

目的:建立幽门螺杆菌(Hpylon)小鼠感染模型. 方法:以C57BL/6小鼠为实验动物,经口感染接种H pylori 悉尼株(SS1),置层流柜中饲养.用HE染色、石碳酸-碱性品红染色、免疫组织化学染色、尿素酶实验、细菌培养等方法检测接种小鼠,并用PCR、基因测序方法对胃组织细菌、胃组织分离培养细菌DNA进行分析. 结果:小鼠胃组织分离培养的细菌与接种细菌形态及特性相同.胃窦隐窝可观察到细菌定植,胃黏膜下层可见炎症细胞浸润.胃组织DNA中成功扩增出H pylori 16SrRNA及cagA基因的目的片段,基因测序结果显示与接种菌株序列完全一致. 结论:H pylori SS1经口接种C57BL/6小鼠2 mo后可成功在胃内定植并导致成慢性胃炎.

肝癌组织中螺杆菌16SrRNA基因的检测

目的:探讨螺杆菌感染是否与人类肝癌的发生相关.方法:选取经病理诊断的肝癌组织38例,肝硬化15例,慢性肝炎12例,肝良性肿瘤15例,采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16SrRNA检测螺杆菌,扩增产物经Southern杂交证实,并对部分标本的PCR产物进行测序及同源比较.阳性者再扩增幽门螺杆菌(Hpylori)的特异基因(26Ku蛋白)和相关功能基因(cagA,vacA,glmM,rps4)来验证是否为该菌.结果:52.6%(20/38)的肝癌组织中发现螺杆菌存在,而非肝癌组无一例阳性(P<0.01).所有PCR产物用South-ern杂交得到证实.10例测序及同源比较显示,肝癌组织中的螺杆菌16SrRNA序列与Hpylori的16SrRNA序列有99-100%的同源性.阳性标本中26ku基因大部分亦阳性(14/20),但仅3例扩增出cagA基因,4例扩增出glmM基因,一直未扩增出vacA基因和rps4基因.结论:肝癌组织中存在螺杆菌感染,他与肝癌的发生可能存在某种联系.

HMGB1对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响

目的:观察HMGB1对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响并初步探讨其可能机制。方法:采用不同剂量(0,10,50,100 ng/mL)重组HMGB1(rHMGB1)刺激HepG2细胞24 h,用MTT法检测HepG2细胞增殖,Western印迹和RT-PCR法检测cyclin D1,PCNA的表达。结果:不同剂量(10,50,100 ng/mL)rHMGB1组HepG2细胞增殖能力均明显高于对照组(P<0.05)。HMGB1抗体(20μg/mL)能中和HMGB1(10ng/mL)对HepG2细胞的促增殖作用(P<0.05)。Western印迹和RT-PCR显示,与对照组比较,HMGB1能明显促进HepG2细胞PCNA,cyclin Dl蛋白和mRNA的表达(P<0.05),HMGB1抗体能明显抑制HMGB1上调PCNA,cyclin Dl蛋白和mRNA的表达(P<0.05)。结论:HMGB1可能通过上调cyc-lin Dl和PCNA表达,促进HepG2细胞增殖。HMGB1抗体对肝细胞癌可能有治疗作用。

肝损伤模型小鼠高迁移率族蛋白-1的表达

将刀豆蛋白A(Con A)经尾静脉注射入雄性Balb/C小鼠,建立T细胞介导的Con A急性肝损伤小鼠模型,检测模型小鼠不同时间点血清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)及肝组织HMGB1mRNA的表达水平,并与血清中TNF-α进行对比.实验显示:在Con A注射后0～3h,小鼠血清中的未能检测出HMGB1蛋白特异带;但在4h后,检测出一条微弱的HMGB1蛋白特异带;在6～36h,均检测出一条清晰的HMGB1蛋白特异带,在8￣12h处于一个高水平状态.而正常对照组小鼠血清中未能检测HMGB1蛋白.与HMGB1动力学曲线不同,血清中TNF-α水平在Con A注射后2h就达到峰值,4h后迅速下降,8h恢复到正常范围.Con A小鼠肝细胞中HMGB1mRNA的表达在Con A注射1h后即达到峰值,是对照组的2.4倍,之后迅速回落,3～12h均低于对照组水平(0.5～0.8倍),24h后逐渐恢复正常水平.初步揭示HMGB1在Con A小鼠急性肝损伤中可能发挥重要作用,血清中HMGB1蛋白与TNF-α相比,呈现出迟发与长效的特点,HMGB1给肝细胞造成损伤有足够强度和效应时间.