阳离子氧化铁纳米粒作为基因载体的体外实验研究

目的探讨阳离子氧化铁纳米粒(Cationic IONPs)的制备及其作为体外基因载体的可行性。方法改进的共沉淀法制备Fe3O4纳米粒,利用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)进行表面修饰。利用原子力显微镜,激光粒度分析仪,琼脂糖凝胶电泳等手段对Cationic IONPs的形貌、粒径、Zeta电位、DNA结合能力等进行表征。以增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-C1)作为靶基因,荧光显微镜和流式细胞仪分别观察和测定Cationic IONPs和脂质体体外转染效率。结果Cationic IONPs粒径为(32.1±1.8)nm,在pH=7条件下,Zeta电位为(13.5±1.6)mV,与质粒质量比为1:1时结合效率最高,可以携带pEGFP-C1进入细胞并获得表达,转染效率为(32.8±5.2)%,高于阳性对照组LipofectamineTM2000转染效率(28.8±5.6)%。结论氨基硅烷偶联剂修饰的氧化铁纳米粒是一种可用于体外转染的新型非病毒载体。

纳米磁流体介导的重组pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性肝癌细胞HepG2的杀伤作用的体外实验

目的:探讨纳米磁流体介导的重组质粒pEGFP-AFP-TK对AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2的杀伤作用。方法:通过纳米磁流体将构建好的重组质粒pEGFP-AFP-TK并分别转染AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2及AFP表达阴性肝癌细胞SMMC-7721,于荧光显微镜下动态观察;使用RT-PCR和Western blot分析HepG2细胞中TK基因的表达情况,MTT法检测转染重组TK表达质粒后的细胞在更昔洛韦(GCV)作用下的存活率并观察旁观者效应,用流式细胞术分析HepG2细胞的凋亡。结果:纳米磁流体能将重组质粒pEG-FP-AFP-TK转入AFP阳性的HepG2细胞,其转染效率高于脂质体;RT-PCR及Western blot证明转染的AFP阳性的HepG2细胞有TK基因的表达;MTT及流式细胞术分析说明TK基因发挥杀伤细胞作用。结论:纳米磁流体能将重组质粒pEGFP-AFP-TK转染HepG2细胞并获得表达,可作为肝癌基因治疗的基因载体,采用AFP增强子可使目的基因在HepG2细胞中特异性表达,并且在前药GCV的作用下,能使AFP表达阳性的肝癌细胞HepG2发生凋亡及旁观者效应。

基于对氨基苯硼酸修饰磁性纳米粒子及丝网印刷技术测定糖化血红蛋白

制备了对氨基苯硼酸修饰的磁性纳米粒子,其与血液中的糖化血红蛋白(Hb A1c)结合,通过网状玻璃态碳(RVC)电极的磁性区域后,可实现与未糖基化的血红蛋白分离。通过壳聚糖(CS)、正硅酸乙酯(TEOS)和碳纳米管构成的溶胶-凝胶膜修饰丝网印刷电极对血红蛋白进行电化学检测,从而建立了一种用于检测糖化血红蛋白的新方法。在0.10 V电位下,丝网印刷电极的电量与Hb A1c和Hb的浓度有较好的线性关系,检出限分别为6 mg/m L和0.05 mg/m L。该方法电极制作简单,有较好的重现性和稳定性,且能有效排除抗坏血酸(AA)、尿酸(UA)等的干扰,已成功应用于实际样品中Hb A1c的检测。

5-氟尿嘧啶磁性纳米脂质体在大鼠肝癌模型体内的靶向分布

目的经肝动脉给予5-氟尿嘧啶磁性纳米脂质体(MNLF),研究其在大鼠肝癌模型体内的分布。方法建立肝癌大鼠模型,随机分为3组,经肝动脉给药,A组予5-Fu溶液、B组予MNLF、C组予MNLF肿瘤区加磁场,高效液相色谱仪测量给药半小时后各组织的药物浓度,并比较不同给药方式下各组织药物浓度及肝肿瘤与各组织药物浓度比值;肝肿瘤与正常肝组织进行病理切片观察在磁场作用下,MNLF经肝动脉给药的肝肿瘤靶向性。结果经肝动脉给药30min后,C组肝肿瘤部位药物浓度较A及B组明显升高,而心、肺、肠、肾和脾等肝外组织及正常肝组织药物浓度较后2组低,肝肿瘤的药物选择指数显著升高,B组肝肿瘤的药物选择指数亦较A组升高,差异均有显著性(P<0.01)。结论MNLF经肝动脉给药并配合外加磁场治疗肝肿瘤,具有明显的肿瘤靶向性,非靶器官分布明显减少;在不加磁场情况下,MNLF对肝肿瘤仍具有一定的靶向性,但较加磁场情况下选择性降低。

PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制;过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高,分别为18%和24%;脂质体的转染效率为42%,纳米粒的转染效率最高,达61%;以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞,其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降(P<0.05),两种载体之间的差异也非常显著(P<0.05);处理72h后,纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组,分别为23.1%和16.4%。结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体。

丹参素柔性纳米脂质体的制备及包封率的测定

目的对丹参素柔性纳米脂质体的制备工艺及包封率的测定方法进行初步研究。方法采用薄膜超声法制备丹参素柔性纳米脂质体,高效液相色谱法检测包封率。结果制得的丹参素柔性纳米脂质体为球形双层脂质体,包封率为45.8%。结论该法制备丹参素柔性纳米脂质体,工艺简单、可规模化生产,包封率较高;高效液相色谱法测定丹参素的含量,方法简便、准确。

PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体-TK对裸鼠移植性肝癌细胞靶向杀伤作用研究

目的研究PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK对人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治疗作用。方法建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成肿瘤对照组、纯自杀基因组、PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK组3组。对照组不作任何处理,实验组于瘤体内分别直接注射纯自杀基因、PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK,同时于裸鼠腹腔内注射GCV,观察不同时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查,免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达量,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞原位凋亡。同时,用RT-PCR检测肿瘤鼠心,肝,肾的自杀基因表达情况。结果裸鼠皮下成瘤率100%;研究PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK组的肿瘤体积、血清AFP含量、肿瘤MVD和VEGF表达强度均明显低于对照组、纯自杀基因组(P<0.05),细胞凋亡指数都明显高于后两组(P<0.05),可见较多的凋亡细胞。RT-PCR测示肿瘤鼠心,肝,肾未见自杀基因表达,而肿瘤细胞则出现自杀基因表达。结论PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体-TK可显著抑制肿瘤的生长,并对肿瘤治疗具有靶向性,是一种较为理想的肝脏肿瘤靶向给药系统,有望成为治疗原发性肝癌的新型生物制剂之一。

细菌纳米磁小体有望作为靶向药物载体

趋磁细菌细胞内合成的纳米磁小体具有颗粒均匀,晶型稳定的特点,每个磁小体有脂膜包被。提纯的磁小体毒性低,生物相容性好,可作为多种药物和大分子化合物的载体而应用于定向治疗肿瘤。本文介绍了细菌磁小体的结构特点,提出了采用细菌磁小体连接抗癌药物的策略,讨论了建立磁小体载药体系靶向治疗癌症的可能性。

纳米磁靶向药物载体在肝癌治疗中的研究进展

纳米磁靶向药物载体作为一种新型药物载体,能在特定的导向机制下,将药物高效的运输到靶器官,使药物在局部发挥作用,大大地降低了药物对全身的毒副作用。该文综述了磁性纳米微粒的现状及其在磁性靶向药物传递中作为药物载体在肝癌治疗中的应用研究进展。

壳聚糖纳米粒的制备及体外抗幽门螺杆菌效果评价

背景:壳聚糖是甲壳素的脱乙酰产物,这种碱性氨基多糖具有天然抗菌活性,且抗菌广谱,但将其纳米化后抗幽门螺杆菌作用的报道较少。目的:制备壳聚糖纳米粒并评价其体外抗幽门螺杆菌的疗效。设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-03/10在中南大学湘雅医院卫生部纳米生物技术重点实验室完成。材料:采用聚合物分散法用脱乙酰度分别为88.5%和95%的2种壳聚糖粉末制备壳聚糖纳米粒。方法:取0.5mL含幽门螺杆菌(NCTC11639和NCTC11637)5×108CFU/mL的布氏肉汤菌液均匀涂布于培养基上待干燥后,采用打孔法检验不同质量浓度(5,10,15,20g/L),不同pH值(pH=6,5,4)和不同脱乙酰度(88.5%和95%)壳聚糖纳米粒溶液的抑菌效果。主要观察指标:抑菌环直径。抑菌环直径越大,说明该菌对此药敏感性越大,抗菌效果越好;反之越小,抗菌效果越差;若无抑菌环,则说明该菌对此药具有耐药性。结果:pH值在4～6时,壳聚糖纳米粒的抑菌作用与pH值呈负相关(P<0.01),且在pH值为4时的抑菌效果最强。2种不同脱乙酰度壳聚糖对幽门螺杆菌的抑菌作用差异有显著性意义(P<0.05),壳聚糖纳米粒(脱乙酰度95%)的抑菌效果优于壳聚糖纳米粒(脱乙酰度88.5%),在质量浓度处于5～20g/L时抗幽门螺杆菌的作用差异无显著性意义(P>0.05)。结论:壳聚糖纳米粒提高了在体外对幽门螺杆菌的抑菌作用,且此作用在酸性条件下明显增强。用脱乙酰度为95%的壳聚糖粉末制备的壳聚糖纳米粒具有更好的抑幽门螺杆菌的作用。

Fe_3O_4空心磁纳米微球制备工艺条件的影响因素

背景:空心微球材料具有很好的生物相容性,在生物医学和化学等许多领域得到广泛的应用。目的:分析Fe3O4空心磁性纳米微球制备流程中反应温度、反应时间、洗涤次数、超声时间工艺条件对粒径的影响。方法:以聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯-嵌段共聚物F127为原料,用共沉淀法制备空心超顺磁性纳米微球。运用正交试验的数学方法设计一个4×3的正交实验模型,从反应温度、反应时间、洗涤次数、超声时间4个方面考察不同制备条件对空心磁性纳米微球粒径大小的影响。结果与结论:得到的最佳实验制备条件:在75℃下,充分反应6h,用甲醇/去离子水反复洗涤3次之后,用功率为30%的超声处理20min。样品通过0.22μm滤嘴过滤后,用粒径分布仪、X射线衍射和透射电子显微镜对产物进行表征观察,证实用最优的实验条件制备的空心Fe3O4磁性纳米微球粒径为37.5nm,外壳厚度10nm左右,颗粒大小均匀,分布较好。

聚乙二醇和聚丙烯酸钠对纳米碳酸钙口服制剂的改性评估研究

目的利用聚乙二醇(PEG)和聚丙烯酸钠(PAAS)对球形纳米碳酸钙进行表面改性,并应用于肠道除铅的体外效果分析。方法用复方分解法制备球形纳米碳酸钙,分散剂PEG和PAAS进行表面改性,采用粒径与电位分析、扫描电镜、透射电镜、X射线粉末衍射法、红外光谱分析等表征手段对改性的纳米碳酸钙及其粉体的结构特征进行检测,并用原子吸收光谱仪考察其在模拟肠液的体外除铅效果。结果改性纳米碳酸钙中PEG/PAAS比例为1∶1时所制备的纳米碳酸钙粒径、电位、分散性、晶体稳定性最佳,4 h左右能将铅离子浓度降低至30μg/L以下,达到满意的除铅效果,与微米碳酸钙比较两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论经PEG和PAAS改性后的纳米碳酸钙性质稳定,无毒,可进一步制成口服制剂应用于人体肠道除铅。

纳米碳酸钙驱铅效果研究

目的探讨纳米碳酸钙的驱铅效果。方法实验药物纳米碳酸钙(40~80 nm),采用超重力反应沉淀法复制。4周龄大鼠连续14 d饮用醋酸铅溶液被复制成重度铅中毒模型(血铅浓度达到>500μg/L)。原子吸收光谱法检测大鼠血铅浓度。结果给药22 d后,纳米碳酸钙40~80 nm组的血铅平均浓度为(117±7)μg/L,接近正常血铅水平,低于对照组的平均血铅浓度(297±33)μg/L(P<0.05)。结论纳米碳酸钙(40~80 nm)具有较好的驱铅效果,优于自然排铅。

磁性阳离子纳米脂质体的制备及其性能表征

目的探讨磁性阳离子纳米脂质体的制备方法及其性能特征。方法采用薄膜分散法制备磁性阳离子纳米脂质体,并且对其形貌、粒径、磁场响应性、细胞毒性进行表征。结果薄膜分散法制备磁性阳离子纳米脂质体方法简单易行,制备的磁性阳离子纳米脂质体的形貌呈球形,平均粒径为98nm;且具有超顺磁性,在水溶液中的磁场响应性能良好;MTT实验表明磁性阳离子纳米脂质体是毒性较小的基因转染载体。结论薄膜分散法制备的磁性阳离子纳米脂质体粒径小、分布均匀、细胞毒性小,将可作为肝癌基因治疗一种理想的非病毒转染载体。

单壁碳纳米管/羟基磷灰石复合骨材料的制备、微观结构及力学性能分析

目的制备单壁碳纳米管/羟基磷灰石(SWNT/Hap)新型复合骨材料,解决传统支撑骨材料的力学性能缺陷。方法采用原位合成的方法制备SWNT/HAp纳米粒子及其复合材料。并通过红外吸收光谱(IR)和扫描电子显微镜(SEM)观察等方法测试制备效果,并评价复合骨材料的力学性能。结果SWNT/HAp复合骨材料的抗弯强度最大增幅将近50%,达到73MPa;而断裂韧性的最大提高幅度达到3倍,达到2.6MP·am1/2。结论各种检测手段表明制备的SWNT/HAp符合骨材料要求,力学性能有显著提高,满足支撑骨架的抗弯强度及断裂韧性方面的要求。

pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体的构建及在PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体介导下转染肝癌细胞

目的:构建甲胎蛋白(AFP)启动子介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)重组真核表达载体,并检测其在AFP阳性肝癌细胞株的特异性表达。方法:PCR扩增AFP基因启动子、HSV-TK基因,将上述片段插入EGFP-N1载体的多克隆位点,构建pEGFP-AFP-TK重组表达载体,通过包裹PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体,经其介导,转染AFP阳性肝癌细胞株HepG2和AFP阴性肝癌细胞株SMMC7721,利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法检测目的基因在2种细胞系中的表达。结果与结论:肝癌特异性真核表达载体pEGFP-AFP-TK构建成功。利用增强型绿色荧光蛋白及Western blotting法可以检测到嵌合AFP启动子的pEGFP-AFP-TK重组真核表达载体能够特异性在AFP阳性的肝癌细胞株表达,而在AFP阴性的肝癌细胞株中基本不表达。

mTOR抑制剂对大鼠肝癌生长抑制作用的研究

目的探讨m TOR抑制剂对大鼠肝癌的抑制作用及其机制。方法将肝癌细胞植入同源大鼠的肝脏,然后用m TOR抑制剂西罗莫司治疗4周。用磁共振成像监测肿瘤生长情况,通过微脉管密度和血管铸型等体内实验及细胞增殖、微管形成及主动脉环化分析等体外实验评估西罗莫司抗血管生成和抑癌效果。结果西罗莫司治疗组大鼠与对照组相比生存时间明显延长、肿瘤体积小、肝细胞转移和腹水少。西罗莫司还降低了瘤内微血管密度并导致肿瘤广泛性坏死。内皮细胞增殖被抑制所需的西罗莫司浓度低于肝癌细胞。m TOR抑制剂明显抑制微管形成及动脉环的血管发芽新生。西罗莫司治疗的肿瘤中血管生成减少,反而出现套叠式血管生成。结论 m TOR抑制剂抑制了肝癌细胞生长,并主要通过抗血管生成作用延长了荷瘤大鼠生存期。m TOR抑制剂具有治疗肝癌的潜能。

尼古丁增强肺癌细胞耐药性与Bcl-2家族蛋白的关系

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,长期吸烟是导致肺癌患者发生耐药及死亡的主要因素。尼古丁是香烟烟雾中的主要成分,其可以影响肺癌细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)家族蛋白的表达,从而促进癌细胞的生长,增强耐药性。本文主要阐述近年来尼古丁增强肺癌细胞耐药性与Bcl-2家族蛋白关系的相关研究。

艾滋病疫苗的研究进展

HIV疫苗研制的困难在于HIV病毒的高度遗传变异。根据已发现的10种亚型HIV-1型病毒研制的能激发CTL的新疫苗,已证实在临床上有了实际的应用效果。目前的疫苗研制策略包括质粒DNA载体,活重组载体和联合疫苗等。本文着重介绍这几种艾滋病疫苗的研究现状和存在的问题。

Livin反义寡核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的利用Livin反义寡核苷酸在裸鼠体内抑制Livin基因表达,探讨Livin反义核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向Livin基因的反义寡核苷酸,以Lipofectamine2000作为载体导入裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长情况。采用RT-PCR方法检测实验组和对照组Livin基因表达,TUNEL法检测凋亡指数。结果ASODN组裸鼠皮下移植瘤后14d,肿瘤体积明显变小。LivinmRNA表达明显降低。结论Livin反义寡核苷酸可以明显抑制肝癌裸鼠移植瘤的增殖。