黄芩苷通过上调lncRNA H19表达来减轻MPP^(+)诱导的PC12细胞神经毒性

目的探讨黄芩苷是否通过上调长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)H19表达来减轻1-甲基4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP^(+))诱导的PC12细胞神经毒性。方法分别采用0.5、0.75、1、2 mmol/L MPP^(+)和10、20、50和70μmol/L黄芩苷作用PC12细胞,后续试验使用水平分别选择0.75 mmol/L MPP^(+)和50μmol/L黄芩苷;以0.75 mmol/L MPP^(+)损伤PC12细胞,体外模拟帕金森病,并加入黄芩苷;采用四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)进行细胞活力测定,Annexin V-异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate isomer,FITC)/碘化丙啶(Propidium iodide,PI)双染法进行凋亡定量分析,蛋白质印迹分析(Western blot)检测Pro-天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3,Cleaved-caspase-3,B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的相对表达水平,实时定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)进行lncRNA H19的相对表达水平检测;在PC12细胞中转染lncRNA H19小干扰RNA(lncRNA H19 siRNA,si-H19),并加入MPP^(+)和黄芩苷,考察PC12细胞增殖、凋亡等变化。结果与对照组比较,MPP^(+)降低PC12细胞的存活率、Bcl-2蛋白、lncRNA H19相对表达水平,提高PC12细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3,Bax蛋白相对表达水平(P<0.05),而Pro-caspase-3蛋白相对表达水平无明显变化(P>0.05)。与MPP^(+)组比较,黄芩苷显著提高MPP^(+)诱导的PC12细胞的存活率、Bcl-2蛋白、lncRNA H19相对表达水平,降低PC12细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3,Bax蛋白相对表达水平(P<0.05),而Pro-caspase-3蛋白相对表达水平无明显变化(P>0.05)。转染si-H19后黄芩苷和MPP^(+)诱导的PC12细胞的存活率、Bcl-2蛋白相对表达水平降低,PC12细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3,Bax蛋白相对表达水平升高(P<0.05),而Pro-caspase-3蛋白相对表达水平无明显变化(P>0.05)。结论黄芩苷上调lncRNA H19表达,提高MPP^(+)诱导的PC12细胞活力和降低其凋亡,减轻MPP^(+)诱导的PC12细胞神经毒性。

血清音猬因子和miR-199a与缺血性脑卒中患者侧支循环形成的关系

目的检测缺血性脑卒中(ischemic stroke, IS)患者血清音猬因子(sonic hedgehog, SHH)、miR-199a水平,分析其与脑侧支循环形成的关系。方法 IS患者121例,根据入院1周内ASITN/SIR分级将患者分为侧支循环不良组51例和侧支循环良好组70例;60例体检健康者为对照组。采用ELISA法检测各组血清SHH、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)水平,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-199a相对表达量。收集患者临床资料,采用多因素logistic回归分析IS患者脑侧支循环不良的影响因素;采用Pearson相关或Spearman秩相关分析血清SHH、miR-199a与ASITN/SIR分级、VEGF的相关性;绘制ROC曲线,评估血清SHH水平和miR-199a相对表达量对IS患者侧支循环不良的预测效能。结果侧支循环不良组、侧支循环良好组血清VEGF[(142.05±13.26)、(190.32±21.35)ng/L]、SHH[(192.34±23.64)、(221.35±35.26)μg/L]水平及miR-199a相对表达量(1.32±0.35、1.53±0.42)高于对照组[(123.24±9.35)ng/L、(165.15±19.65)μg/L、1.03±0.46](P<0.05),侧支循环不良组血清VEGF、SHH水平和miR-199a相对表达量低于侧支循环良好组(P<0.05)。血清SHH、miR-199a与ASITN/SIR分级呈负相关(rs=-0.567,P<0.001;rs=—0.491,P=0.001),与VEGF水平呈正相关(r=0.613,P<0.001;r=0.567,P<0.001)。收缩压(OR=1.707,95%CI:1.676~1.805,P=0.006)、是否服用他汀类药物(OR=1.758,95%CI:1.602~1.953,P=0.002)、VEGF(OR=1.826,95%CI:1.701~2.132,P=0.001)、SHH(OR=2.032,95%CI:1.945~2.349,P<0.001)和miR-199a(OR=2.010,95%CI:1.910~2.276,P<0.001)是IS患者侧支循环不良的影响因素。SHH、miR-199a最佳截断值分别为201.35μg/L、1.47时,预测IS患者侧支循环不良的AUC分别为0.695(95%CI:0.595~0.795,P<0.001)、0.708(95%CI:0.615~0.801,P<0.001),二者联合检测预测IS患者侧支循环不良的AUC(0.881)高于单独SHH、miR-199a(P<0.05),其灵敏度为90.20%,特异度为91.43%。结论 IS侧支循环不良患者血清SHH水平降低、miR-199a表达下调,SHH、miR-199a与IS患者侧支循环不良有关,可为侧支循环形成的评估提供参考。

急性缺血性脑卒中患者血清miR-103,miR-29b的表达水平变化及其临床意义

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清miR-103,miR-29b的表达水平变化及其临床意义。方法收集2016年1月-2019年12月本院神经内科收治的126例AIS患者(AIS组),根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(45例)、中度组(57例)和重度组(24例),根据改良Rankin量表(mRS)评分将其分为预后良好组(78例)和预后不良组(48例),另选择56例同期于本院门诊体检健康者为对照组,检测血清miR-103,miR-29b表达水平,Spearman秩相关性分析miR-103,miR-29b表达水平与NIHSS,mRS评分的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-103,miR-29b表达水平对神经功能预后的预测价值。结果 AIS组血清miR-103表达水平高于对照组(P<0.05),miR-29b表达水平低于对照组(P<0.05),血清miR-103表达水平随着AIS患者神经缺损程度加重而升高(P<0.05),miR-29b表达水平则降低(P<0.05)。预后不良组血清miR-103表达水平高于预后良好组(P<0.05),miR-29b表达水平低于预后良好组(P<0.05)。Spearman秩相关性分析显示AIS患者血清miR-103表达水平与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r2=0.636、0.794,P<0.05),miR-29b表达水平与NIHSS评分、mRS评分呈负相关(r2=-0.664、-0.659,P<0.05)。ROC分析显示miR-103,miR-29b表达水平预测AIS患者神经功能预后的曲线下面积(AUC)为0.713、0.741,联合miR-103,miR-29b表达水平预测AIS患者神经功能预后的AUC为0.918,高于单独miR-103,miR-29b表达水平(P<0.05)。结论 AIS患者血清miR-103表达水平升高,miR-29b表达水平降低,miR-103表达上调、miR-29b表达缺失均与AIS患者神经功能缺损程度和神经功能恶化有关,可以为患者神经功能预后评估提供参考。