精品课程建设中耳鼻咽喉头颈外科学教学方法的探讨与体会

精品课程建设是国家教育部为进一步提高人才培养质量、推进素质教育和创新教育，聚集优质的教育资源，提高课程教学质量，使学生得到最好的教育，并可以在更大的范围内获得教学共享的一项创建活动。为进一步提高教学水平和效果，我科从2006年开始实施耳鼻咽喉头颈外科学精品课程建设，2009年被评为国家精品课程。几年来，我们从课程设置、理论授课和实践见习教学方面进行了初步实践与探索，取得了一定成效。现将我们在精品课程建设实践中的几点体会和建议总结如下：

耳鼻咽喉头颈外科学课堂教学质量的探讨与思考

耳鼻咽喉头颈外科学是研究听觉、平衡、嗅觉诸感觉器官与呼吸、吞咽、发音、语言诸运动器官的解剖、发育、生理和疾病现象的临床医学。该学科专科性强，涵盖器官多，解剖结构复杂而部位隐蔽，教学上存在课程内容多、授课时间相对较少、讲授和学习难度大等问题。同时，由于课时的限制，

新型冠状病毒肺炎疫情下非疫情中心区域耳鼻咽喉头颈外科急诊防护的思考与建议

2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的肺炎具有较高的传染性,人群普遍易感,能通过飞沫及接触传播;气溶胶和粪-口等传播途径尚待明确。耳鼻咽喉头颈外科的急诊诊疗存在医患室内近距离接触,检查过程中患者喷嚏、咳嗽和恶心等反应均极易产生携带病毒的飞沫及气溶胶,且医患直接接触机会多,导致医患暴露风险明显增加。非疫情中心区域,大部分耳鼻咽喉头颈外科急诊患者多为无疫区接触及暴露的人群,如何在保障医疗安全和效果的同时,防范于未然、做好防护、避免医患院内感染显得尤为重要。

EphA2蛋白调控鼻咽癌紫杉醇敏感性的实验研究

目的探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2(erythropoietin-producing hepatocellular re-ceptor,EphA2)蛋白对鼻咽癌细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法采用脂质体2000将EphA2蛋白过表达载体pEGFP-N1-EphA2和空白载体pEGFP-N1分别转染鼻咽癌5-8F细胞,Western blot验证转染效果,CCK-8法检测各组细胞生存率,并计算各组紫杉醇药物IC50值;流式细胞术检测紫杉醇作用后鼻咽癌5-8F细胞周期及凋亡率的改变。结果鼻咽癌5-8F细胞EphA2蛋白上调后,紫杉醇药物在亲本细胞组和空白载体对照组中的IC50值分别为(1.4±0.05)nM/L和(1.3±0.06)nM/L,而实验组中的表达为(3.8±0.52)nM/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期结果显示实验组(45.76±3.89)%较亲本细胞组(65.85±2.28)%和对照组(64.52±3.31)%的G0/G1期细胞的比例明显减少,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05);而S期细胞的实验组(31.56±1.59)%较亲本细胞组(2 5.7 6±1.8 9)%和对照组(2 4.5 5±3.6 4)%和G2/M期细胞的实验组(2 3.1 0±4.55)%较亲本细胞组(8.39±0.81)%和对照组(10.94±3.27)%的比例则明显增多,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);而细胞凋亡率3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论该研究结果表明EphA2蛋白能通过影响鼻咽癌细胞周期改变而调控其对紫杉醇药物的敏感性。

EphA2经P-糖蛋白调控鼻咽癌紫杉醇敏感性的实验研究

目的探讨EphA2经P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)调控鼻咽癌紫杉醇耐药性的分子机制。方法使用慢病毒载体在鼻咽癌细胞中沉默或过表达EphA2,Western blotting检测P-gp蛋白的表达变化;siRNA干扰沉默P-gp表达,CCK8法检测P-gp蛋白在EphA2介导的鼻咽癌紫杉醇耐药中的作用;小分子化合物LY294002阻断PI3K/Akt信号通路,观察该通路在EphA2调控P-gp表达中的作用。结果 P-gp在EphA2沉默组中表达下调,过表达组中上升;紫杉醇作用于空白对照组、阴性对照组和P-gp沉默组的细胞存活率分别是(68.9±4.0)%、(72.4±6.2)%和(52.1±3.7)%,P-gp沉默组对紫杉醇的耐药性较空白和阴性对照组降低(P<0.05);在过表达EphA2的鼻咽癌细胞中下调P-gp表达,紫杉醇刺激后,P-gp沉默组的存活率(36.1±5.1)%显著低于空白对照组(57.9±6.2)%和阴性对照组(58.2±5.8)%(P<0.05);在EphA2过表达鼻咽癌细胞中,给予抑制剂LY294002作用后,Akt总量无明显改变而磷酸化的Akt表达下降,且P-gp表达下降。结论 EphA2通过P-gp依赖性途径促进鼻咽癌紫杉醇耐药,且P-gp蛋白的表达增高与EphA2活化PI3K/Akt有关。

MiR-98靶向MTDH调控鼻咽癌恶性进展的实验研究

目的探讨miR-98对鼻咽癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法利用脂质体介导的miR-98 mimic(及阴性对照)转染鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞,CCK-8检测其体外增殖能力的改变,划痕愈合及Transwell侵袭小室实验检测鼻咽癌细胞的体外迁移及侵袭潜能变化,生物信息学软件预测miR-98可能的靶基因,并经双荧光素酶及Western blotting验证靶基因。结果 MiR-98过表达能抑制鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞的体外生长增殖、迁移及侵袭能力;miR-98对MTDH具有直接靶向调控作用。结论本研究表明miR-98能够靶向MTDH调控鼻咽癌细胞株的体外生长增殖及侵袭能力。

湖南地区汉族非综合征型耳聋相关基因检测及热点突变分析

目的研究湖南地区汉族非综合征型耳聋(NSHL)患者中GJB2、SLC26A4基因的突变频率和突变热点,了解线粒体DNA(mtDNA)12SrRNA A1555G突变的频率。方法收集湖南地区汉族NSHL患者共139例,抽取外周静脉血并提取DNA;分别采用直接测序、变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)和聚合酶联-限制性片段变态(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术对患者进行GJB2、SLC26 A4基因和mtDNA 12 SrRNA A1555 G突变的检测;对SLC26 A4基因突变者进行回访并行高分辨颞骨CT检查。结果61例(43.9%)NSHL患者至少携带一种常见耳聋相关基因突变,GJB2、SLC26A4和线粒体DNA 12SrRNA A1555 G突变的检出率分别为23%、18.7%和3.6%;共发现6种GJB2和13种SLC26 A4基因已报道致病性突变,235delC和IVS7-2A>G分别是GJB2和SLC26A4基因最常见的突变类型,分别占这两个基因突变等位基因的87.5%和46.5%;与SLC26A4基因突变有关的EVAS的发生率为14.4%,低于该地区GJB2基因相关性耳聋的发生率17.3%。结论湖南地区汉族NSHL中43.9%的患者携带常见耳聋基因突变,反映湖南地区遗传性耳聋高发的现象。GJB2基因突变是该地区NSHL最常见的原因,其次为SLC26A4基因。235delC、IVS7-2A>G和A1555G突变分别是GJB2、SLC26A4和线粒体DNA基因的热点突变,占所有突变的71.2%。通过筛查,为其中35.3%的患者明确了分子病因。为该地区进一步开展遗传咨询、基因诊断和产前诊断提供了重要的依据,并为临床用药提供指导。

荧光PCR法在非综合征型遗传性耳聋基因诊断中的应用研究

目的分析GJB2、SLC26A4和mt DNA12SrRNA基因热点突变在非综合征型遗传性耳聋人群中的突变谱和突变频率。方法采用荧光PCR法,针对本院收集的126例非综合征型耳聋患者进行中国人群常见的3个耳聋致病基因GJB2、SLC26A4和mt DNA 12SrRNA的10个热点突变的筛查,分析总结突变数据。阳性结果进一步采用直接测序法进行验证。结果应用荧光PCR技术在126例非综合征型耳聋(non syndromic hearing loss,NSHL)患者中检测出携带基因突变的患者31例,阳性率为24.6%(31/126),其中GJB2双等位基因突变、SLC26A4双等位基因突变和12SrRNA的均质突变分别占该人群分子病因的6.35%(8/126)、2.33%(3/126)和3.17%(4/126)。此外,IVS7-2A>G单等位基因突变的检出率高达11.11%(14/126)。GJB2 c.235del C和SLC26A4IVS7-2A>G是本研究中最为常见的热点突变。进一步采用直接测序法验证阳性位点,其结果与荧光PCR法一致。结论 GJB2双等位基因突变是本研究人群最为常见的分子致病因素,其次为SLC26A4双等位基因突变和12SrRNA的均质突变。GJB2 c.235del C和SLC26A4 IVS7-2A>G是本研究中最为常见的热点突变。

3MA抑制自噬降低头颈鳞癌细胞放疗抵抗性的实验研究

目的探讨6-氨基-3-甲基嘌呤(3MA)对头颈鳞癌细胞放疗抵抗性的影响。方法蛋白印迹法(Western blotting)检测CNE2、6-10B及其放疗抵抗细胞CNE2-Rs、6-10BRs中LC3B蛋白的表达;3MA作用于CNE2-Rs及TU686细胞后LC3B蛋白的表达;克隆集落形成实验检测3MA对头颈鳞癌细胞的放疗抵抗能力及生存分数的改变;细胞免疫荧光法检测3MA对放疗致DNA双链损伤相关指标γ-H2AX焦点数量的改变。结果 LC3B蛋白在放疗抵抗细胞较亲本细胞中表达增加;3MA能有效抑制自噬膜蛋白LC3B的表达;3MA抑制自噬后CNE2-Rs及TU686细胞克隆集落形成能力减弱,生存分数降低;3MA抑制自噬后CNE2-Rs及TU686细胞放疗组中γ-H2AX焦点数量较对照组显著增加。结论 3MA抑制自噬后可能影响放疗后DNA双链损伤修复,进而降低头颈鳞癌细胞的放疗抵抗性。

影像学检查在耳硬化症诊治中的应用及研究进展

耳硬化症是一种表现为鼓膜完整的传导性或混合性听力下降的疾病。耳硬化症的诊断主要根据患者病史和准确的听力学检查,影像学起到辅助作用。但近年来随着影像学技术的发展,影像学检查在耳硬化症的诊疗过程中愈加重要,从术前诊断、鉴别诊断、术前评估手术难度、预测并发症,到术后分析并发症、评估手术疗效等都起到非常重要的作用。本文通过查阅相关文献资料,对耳硬化症影像学的研究进展进行阐述。

Beclin1调控鼻咽癌细胞放疗抵抗的体外研究

目的探讨Beclin1基因对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响。方法Western blotting法检测CNE2、6-10B及其放疗抵抗细胞CNE2-Rs、6-10BRs中Beclin1蛋白的表达,CNE2细胞经不同条件放射线照射后Beclin1蛋白的表达改变;通过脂质体转染Beclin1 cDNA和慢病毒介导的Beclin1 shRNA,在6-10B细胞和CNE2-Rs细胞中分别过表达及沉默Beclin1基因,平板克隆集落形成实验检测鼻咽癌细胞的放疗抵抗能力的改变;细胞免疫荧光法检测DNA双链损伤相关指标γ-H2AX表达的改变。结果Beclin1蛋白在放疗抵抗细胞中表达增加,同时随着放疗时间的延长及放疗剂量的增加,Beclin1蛋白表达迅速升高,随后趋于基础水平;Beclin1过表达后6-10B细胞克隆集落形成能力增强,生存分数增加,γ-H2AX焦点数量减少;相反,Beclin1沉默后,CNE2-Rs细胞克隆集落形成能力下降,生存分数下降,γ-H2AX焦点数量增加。结论Beclin1能促进鼻咽癌细胞的放疗抵抗性,其与放疗后DNA双链损伤修复调控可能相关。

MiR-324-3p经上皮-间质转化调控鼻咽癌迁移侵袭的实验分析

目的探讨miR-324-3p对鼻咽癌细胞体外迁移侵袭能力的影响。方法 MiR-324-3p转移上调其在鼻咽癌5-8F和6-10B细胞中的表达,采用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测上调后的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞迁移及侵袭能力;western blot检测上皮-间质转化(EMT)上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物Vimentin的表达。结果 MiR-324-3p成功转移上调了其在鼻咽癌5-8F和6-10B细胞中的表达。过表达miR-324-3p的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞的体外迁移及侵袭能力显著下降,可同时伴随着E-cadherin的表达上调,Vimentin的表达下降。结论 MiR-324-3p可能通过诱导EMT改变调控鼻咽癌细胞的侵袭转移能力。

MTDH促进头颈鳞癌细胞放疗抵抗的实验研究

目的探讨星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1,又称MTDH)对头颈部鳞状细胞癌(简称头颈鳞癌)放疗抵抗的影响。方法 Western blotting检测放射线照射后头颈鳞癌细胞MTDH蛋白表达的改变。通过脂质体转染的MTDH c DNA和慢病毒介导的MTDH shRNA,分别在不同头颈鳞癌细胞中过表达和抑制MTDH,平板集落形成实验检测头颈鳞癌细胞放疗抵抗能力的改变,细胞免疫荧光染色检测DNA双链损伤指标γH2AX的表达。结果 MTDH在头颈鳞癌细胞中的表达随着放射性照射剂量的增加和时间的延长逐渐升高。在CNE-2细胞中过表达MTDH,其体外集落形成能力增强;相反,在Tu686细胞中抑制MTDH的表达,其体外集落形成能力减弱。同时,细胞免疫荧光显示Tu686细胞在MTDH抑制后,其DNA双链损伤指标γH2AX的表达增加,表明DNA双链损伤修复过程受阻。结论 MTDH能促进头颈鳞癌细胞放疗抵抗的形成,与其对DNA双链损伤修复的调控作用相关。

儿童颅底肿瘤经鼻内镜外科手术治疗分析

目的探讨分析鼻内镜手术在治疗儿童颅底肿瘤中的应用。方法回顾性分析中南大学湘雅医院鼻颅底外科2010年6月-2019年11月收治确诊为颅底肿瘤并行鼻内镜治疗的患儿共44例,其中鼻咽纤维血管瘤17例,朗格汉斯组织细胞增生症7例,骨化纤维瘤5例,原始神经外胚层肿瘤2例,横纹肌肉瘤2例,脑膜瘤2例,间叶性软骨错构瘤1例,颅咽管瘤1例,表皮样囊肿1例,血管纤维脂肪瘤1例,生殖细胞瘤1例,骨母细胞瘤1例,脊索瘤1例,侵袭性垂体腺瘤1例,纤维瘤病1例。结果44例患儿中43例在鼻内镜下完全切除,仅1例鼻咽纤维血管瘤分期切除。术后44例均进行定期随访,随访时间3个月至9年。5例失访,其中骨母细胞瘤1例,脑膜瘤1例,横纹肌肉瘤1例,鼻咽纤维血管瘤2例;12例术后接受放化疗,其中朗格汉斯组织细胞增生症7例,原始神经外胚层肿瘤2例,横纹肌肉瘤1例,脊索瘤1例,生殖细胞瘤1例,随访至今患儿状况良好,均无复发及转移;1例鼻咽纤维血管瘤复发;再次手术后治愈;其余26例患儿术后未见复发。结论鼻内镜颅底手术治疗儿童颅底肿瘤是可行、有效及安全的。

靶向EBV-LMP1脱氧核酶在鼻咽癌中的研究进展

鼻咽癌（NPC）是发生于鼻咽黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，病因学研究显示，EBV感染、环境因素、遗传易感性等与NPC发病密切相关。

鼻咽癌放射治疗的现状与对策

鼻咽癌为我国南方地区高发的头颈部恶性肿瘤，其主要病理类型为非角化型未分化癌。鼻咽癌的解剖学特点、特殊的生物学行为及其对放射线的敏感性，决定了放射治疗为其主要的治疗方式。随着放疗设备及技术不断更新完善，鼻咽癌患者的生存率有了较大提高，但中晚期鼻咽癌的疗效仍不甚理想，部分患者出现放疗抵抗现象，同时放疗所致的并发症仍然严重影响着患者的生存质量。本文将对鼻咽癌放射治疗的现状及存在的问题进行分析，旨在为鼻咽癌的临床治疗提供理论依据及对策。

纽扣式鼻中隔黏软骨膜-软骨瓣在颅底缺损修复重建中的应用

目的介绍鼻内镜下纽扣式鼻中隔黏软骨膜-软骨瓣修复颅底硬脑膜缺损的方法,总结其疗效,并探讨其应用适应证。方法回顾性分析应用纽扣式鼻中隔黏软骨膜-软骨瓣鼻内镜下修复颅底肿瘤手术后硬脑膜缺损病例16例,其中嗅神经母细胞瘤5瘤,颅咽管瘤2例,垂体瘤5例,脑膜瘤3例,生殖细胞瘤1例。依据颅底缺损范围的大小,设计鼻中隔取材组织瓣的切取范围,将一侧的部分黏软骨膜及软骨作为整体一并切下,对组织瓣进行修整并环形缝合防黏骨膜撕脱,利用软骨自身的弹性将软骨完全嵌入缺损骨壁的内层,而将黏软骨膜平铺于缺损骨质的外壁,从而形成一种夹层修复。结果所有病例均一次性重建成功,无脑脊液鼻漏和颅内感染发生;5例嗅母细胞瘤和1例生殖细胞瘤患者术后辅助放射治疗,随访6个月以上;其余病例随访6个月至5年,均未发生脑脊液鼻漏及颅内感染。结论鼻内镜下经鼻入路采用纽扣式鼻中隔黏软骨膜-软骨瓣修复颅底肿瘤术后硬脑膜缺损是一种可靠的颅底重建方法。

星形胶质细胞上调基因-1蛋白在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法采用Western blotting技术检测AEG-1蛋白在4株鼻咽癌细胞株、47例鼻咽癌组织及21例鼻咽部黏膜中的表达。结果 AEG-1蛋白在鼻咽癌细胞和组织中的表达较鼻咽部黏膜均显著上调,其表达水平与患者血清EB病毒滴度的高低(P=0.046)、T分级(P=0.001)、临床分期(P=0.001)、颈部淋巴结转移(P=0.010)呈显著正相关。结论 AEG-1蛋白可能在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。

经鼻内镜手术治疗硬脑膜外来源的海绵窦区肿瘤

目的探讨经鼻内镜切除硬脑膜外来源的海绵窦肿瘤的可行性,并介绍手术入路选择、海绵窦重要结构保护和出血控制。方法硬脑膜外侵犯海绵窦的肿瘤39例,其中为垂体腺瘤17例、鼻咽纤维血管瘤5例、神经鞘膜瘤6例、脊索瘤6例、腺样囊性癌2例、软骨瘤2例、纤维肉瘤1例。根据肿瘤原发的部位和范围,分别选择内镜下经鼻中隔经蝶、扩大鼻中隔经蝶、扩大上颌窦后壁、翼突根和鼻外上颌骨等入路切除肿瘤。结果 33例肿瘤获得全切(全切率84.6%);6例肿瘤获得次全切(次全切率15.4%),无致残和致死性手术并发症。结论只要选择手术入路恰当,手术中保护海绵窦重要结构,采取合理的措施控制海绵窦出血,经鼻内镜切除硬脑膜外来源的海绵窦肿瘤是可行的。

鼻咽部淀粉样变性病的诊治分析

目的探讨鼻咽部淀粉样变性病的发病机制、分类、诊断及治疗。方法通过MRI、腹壁脂肪活检及病理学检查确诊的1例鼻咽淀粉样变性病患者,全麻鼻内镜下切除病变并结合文献进行分析。结果结合影像学资料经鼻内镜下完整切除病变,术后病检示黏膜下见大量无定型样物质,刚果红染色(++),术后随访1年无复发。结论鼻咽部淀粉样变性病需病理切片确诊,MRI是诊断与鉴别诊断该病的最佳辅助检查,其首选治疗方式为鼻内镜下手术切除。