携带突变型人IκBαDN cDNA重组嵌合腺病毒Ad5F35的制备与表达

目的制备携带突变型人核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)cDNA的重组5型和35型嵌合腺病毒(Ad5F35),并分析其表达。方法应用DNA重组技术,从含有突变型人IκBα(IκBαDN)cDNA的重组逆转录病毒载体pCLX-IκBαDN克隆IκBαDNcDNA到pDC316载体以构建pDC-IκBαDN并随即制备携带IκBαDNcDNA的重组嵌合腺病毒Ad5F35。转染HL-60细胞后,通过实时定量PCR分析IκBα的表达。结果通过DNA重组技术,将IκBαDNcDNA成功克隆到pDC316载体。DNA序列测定显示,重组pDC-IκBαDN载体内携带有无其它突变并具有正确阅读框架的人IκBαDNcDNA。转染HL-60细胞48h后,HL-60细胞IκBαmRNA表达增加。结论成功制备到含有人IκBαDNcDNA的重组嵌合腺病毒Ad5F35,并能够在HL-60细胞有效表达IκBα。

FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病中的临床意义

目的分析FLT3基因突变在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的临床意义。方法抽取34例APL患者骨髓标本,采用PCR、RT-PCR和DNA酶切技术检测FLT3基因内部串连重复(FLT3-ITD)、FLT3基因D835突变(FLT3-D835),并分析它们与患者临床表现、症状、疗效的关系。结果APL患者外周血高WBC数(WBC≥10×109/L)的阳性率,FLT3-ITD突变型明显高于FLT3-ITD野生型(P<0.05),而FLT3-D835突变与其野生型差异无显著性;骨髓原始细胞+早幼粒细胞之和高含量(≥80%)、B级出血症状、完全缓解(CR)阳性率,FLT3突变型与FLT3野生型患者差异均无统计学意义(P>0.05)。结论大部分FLT3-ITD突变型APL患者常表现高外周血WBC数,骨髓原始细胞与早幼粒细胞之和高含量,B级出血症状及CR率与野生型患者无显著差异。