在机能学实验中打造新型的药理学实验教学平台

机能学实验是一门由生理学、病理生理学和药理学(包括基础药理学、麻醉药理学和临床药理学)组成的新兴的基础医学综合实验课程.80年代以来,许多高等医学院校成立了以这三门机能学科学生实验为主的机能学实验中心或机能学实验室,以推动医学基础实验教学改革.药理学实验作为机能学实验的重要组成部分,具有其特定的教学特点,笔者根据这些特点将实验教学分为实验、视听及讨论课三大板块,其中实验课由探索性实验、综合性实验、开放性实验及印证性实验组成,前者占实验的20%～30%.

浅谈药理学实验教学中的“因材施教”

在药理学实验教学过程中,针对学生的专业、层次以及能力、兴趣等特点采用不同的教学方式,充分利用有限的学习时间与教学资源帮助学生掌握基本的药理学实验方法 ,并尽可能给学有余力的学生提供自主解决问题的机会,从而更好地贯彻因材施教的教学理念和方法 ,以适应医学事业发展的需要。

后适应对大鼠实验性局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究后适应对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用与氧自由基的关系。方法大脑中动脉线拴法(MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型:50只♂性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、脑缺血/再灌注模型组(MCAO)、预适应组(MCAO+preconditioning)、后适应组(MCAO+postconditioning)和尼莫地平组(MCAO+nimodip-ine),每组10只大鼠。术后对大鼠进行神经缺陷评分,并取脑组织测量梗死体积。另取50只大鼠,分组、实验方法及步骤同上,术后取梗死侧脑组织做成匀浆,检测脑组织中丙二醛(MDA)、乳酸(LA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果后适应能减少大鼠实验性局灶性脑缺血的梗死体积、降低脑含水量,改善其神经行为。脑组织匀浆生化指标检测发现缺血后适应能降低脑组织中MDA和LA含量;升高SOD和GSH含量,与MCAO模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论缺血后适应能诱导脑缺血耐受,对脑缺血/再灌注损伤产生保护作用,其保护作用与增加脑组织的抗氧化能力有关。

氯沙坦和培哚普利逆转高血压大鼠心血管重构的比较

目的 比较氯沙坦和培哚普利逆转肾血管性高血压大鼠心血管重构作用及其机制 ,为临床用药提供实验依据。方法 以经典两肾一夹肾血管性高血压大鼠为研究模型。采用鼠尾测压法测定大鼠血压的变化 ;反射免疫分析法测定大鼠血浆血管紧张素Ⅱ含量和肾素活性 ;称量法计算各组大鼠心脏与体重的比值 ;高清晰度数码照相扫描分析技术测定各组大鼠主动脉、肠系膜动脉血管管壁厚度、管壁厚度和管腔内径比值、管壁面积和管腔面积比值来估计两类药物对心血管重构的影响。结果 高血压大鼠心脏与体重的比值、主动脉、肠系膜动脉血管管壁厚度和管腔内径比值、管壁面积和管腔面积比值与正常大鼠相比明显增大 (P <0 0 1) ,给予氯沙坦 (2 0mg·kg-1)或培哚普利 (3mg·kg-1)治疗后 ,上述各项指标基本接近正常水平 ,与非用药组相比具有显著差异 (P<0 0 1)。结论 氯沙坦和培哚普利均能明显降低高血压大鼠血压 ;长期应用较低剂量氯沙坦和培哚普利均能有效逆转高血压大鼠病理性心血管重构 ,两药存在等效性。

卡托普利抗同型半胱氨酸和溶血性磷脂酰胆碱损伤大鼠血管内皮功能

目的 研究卡托普利能否保护同型半胱氨酸(Hcy)和溶血性磷脂酰胆碱 (LPC)在体外直接损伤的大鼠离体胸主动脉内皮功能。方法 用Hcy或LPC孵育大鼠离体胸主动脉环 3 0min诱导血管内皮损伤 ,观察卡托普利对Hcy和LPC损伤血管内皮依赖性舒张反应的影响。结果 Hcy( 0 .3～ 3mmol·L-1)或LPC( 1～1 0 μmol·L-1)呈浓度依赖性地损伤乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应 ,但不影响硝普钠诱导的内皮非依赖性血管舒张。卡托普利( 3～3 0 μmol·L-1)预孵育血管环 1 5min,再与Hcy( 1mmol·L-1)共同孵育 3 0min,浓度依赖性改善Hcy对血管内皮依赖性舒张反应的损害。 3 0 μmol·L-1卡托普利也可完全逆转LPC( 3 μmol·L-1)对内皮依赖性血管舒张反应的损害。

卡托普利对动脉粥样硬化家兔血管内皮功能的保护作用及其机制

目的探讨卡托普利对动脉粥样硬化(AS)家兔血管内皮功能和形态的保护作用及其机制。方法采用高脂、高胆固醇饲料饲养家兔制备AS模型的同时口服给予卡托普利8 mg·kg-1,每天1次,连续12周;HE染色观察血管组织形态,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL);高效液相色谱测定血清非对称性二甲基精氨酸(ADMA)浓度;用重组编码人类二甲基精氨酸-二甲胺水解酶2(hDDAH2)基因的腺病毒感染AS家兔离体胸主动脉环2 h,检测对乙酰胆碱累积浓度诱导的最大舒张反应(Emax)、半数有效量(EC50)及DDAH活性。结果与正常组比较,高脂模型家兔胸主动脉内膜和中膜增厚,血清TC,TG和LDL水平升高;血清ADMA浓度升高至(2.24±0.28)μmol·L-1(P<0.01);血管壁DDAH活性降至(0.048±0.007)U·g-1蛋白(P<0.01);Emax降低至(56±8)%(P<0.01),EC50升高至(158±52)nmol·L-1(P<0.01)。与AS模型组比较,卡托普利治疗组血管内膜增厚减轻,血脂无明显降低,血清ADMA浓度显著降低至(1.37±0.23)μmol·L-1(P<0.01),血管DDAH活性增加至(0.084±0.013)U·g-1蛋白(P<0.01),内皮依赖性血管舒张功能改善,Emax增加至(88±4)%(P<0.01),EC50降低至(90±35)nmol·L-1(P<0.01)。AS模型血管转染DDAH2基因后,血管Emax回升至(88±4)%,EC50降低至(98±42)nmol·L-1,DDAH活性升高至(0.112±0.017)U·g-1蛋白,与卡托普利治疗组相似。结论卡托普利对AS家兔血管形态和内皮功能具有明显保护作用,其机制可能与增加血管DDAH活性,降低内源性ADMA浓度有关。

法舒地尔可能通过PI3-K/Akt信号通路抑制大鼠脑缺血/再灌注区神经元的凋亡

目的探讨法舒地尔对大鼠脑缺血/再灌注损伤神经元是否具有抗凋亡作用并探讨其抗凋亡机制。方法大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。运用TUNEL法检测大鼠脑缺血/再灌注区神经细胞的凋亡,免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,Western blot法检测Akt以及Rho激酶特异性底物蛋白MYPT的磷酸化表达。结果法舒地尔能明显减少TUNEL染色阳性细胞数,增加Bcl-2的表达,降低Bax、Caspase-3的表达,升高Akt的磷酸化水平以及降低MYPT的磷酸化水平。结论①法舒地尔能减少大鼠脑缺血/再灌注区神经细胞凋亡。②法舒地尔的抗凋亡机制可能与其抑制Rho激酶活性,进而激活PI3-K/Akt传导通路有关。

银杏叶提取物治疗顺铂所致大鼠肾损伤

目的:研究银杏叶提取物(EGb)对顺铂所致肾损伤的保护作用及其作用机制。方法:单次腹腔注射顺铂(7.5mg.kg-1)于大鼠体内,建立肾损伤模型。连续5d用EGb(50mg.kg-1或100mg.kg-1)灌胃大鼠一次。结果:单次腹腔注射顺铂可诱导大鼠肾功能损伤,促进血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平上升和肾皮质丙二醛(MDA)含量增加;同时抑制对氧磷酶(PON1)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。EGb可显著性降低顺铂所致血清Cr、BUN和肾皮质MDA含量升高,抑制PON1和SOD活性下降,并减轻肾组织的病理学损伤。结论:EGb对顺铂所致肾功能损伤有明显保护作用,其作用机制可能与抗氧自由基损伤,增加对氧磷酶活性有关。

L-NAME和格列苯脲对辛伐他汀脑缺血再灌注损伤保护作用的影响

目的 研究侧脑室注射左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)和格列苯脲 (glibenclamide ,Gly)对辛伐他汀 (simvas tatin ,Sim)脑缺血再灌注损伤保护作用的影响。方法 ①采用ZeaLonga法制作大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型。②6 3只♂SD大鼠以 2 0mg·kg-1辛伐他汀或其溶媒灌胃治疗2wk后 ,于MCAO手术前 4 5min ,经侧脑室注射L NAME(10mg·kg-1)或Gly(3mg·kg-1)以及相应溶媒 ,再灌注 4h和 2 2h进行神经功能缺陷评分 ,评分完成立即取脑制成冠状切片 ,TTC染色后测量脑梗死体积。另取 6 3只SD大鼠操作同上 ,再灌注 2 2h取脑制成匀浆 ,测量乳酸 (LA)、丙二醛 (MDA)含量和超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 辛伐他汀明显缩小大鼠MCAO后的脑梗死体积 ,改善神经功能 ,降低脑组织内LA和MDA含量 ,升高SOD活性 ,L NAME和Gly阻断了辛伐他汀的上述效应。 结论 侧脑室注射L NAME和格列苯脲可阻断辛伐他汀对脑缺血 /再灌注损伤的保护作用 ,辛伐他汀可能通过eNOS

动脉粥样硬化的免疫调节与疫苗研制

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)活化免疫系统产生的免疫应答,既可能导致持久性的动脉炎症反应而促进AS,也可能抑制动脉炎症反应和AS。通过免疫调节,选择性抑制促AS的免疫应答或促进抗AS的免疫应答,可能对AS产生防治作用。

葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。

肥胖成因的学说及评价

在引起肥胖的诸多因素中,遗传因素(内因)与环境因素(外因)两者的综合作用,影响人体能量摄入和消耗的平衡,是单纯性肥胖产生的主要原因。人类在进化过程中形成了一种自觉储备剩余能量的适应性——节俭基因型。我们虽不能对已经具有的"节俭"基因进行改造,但可以对摄食过多及运动不足这两个引起肥胖的主要外因进行干预,在临床实际施治中,可能找到一定的预防和治疗肥胖的对策。

17-β-雌二醇抑制去卵巢胰岛素抵抗大鼠血管重构的发生

目的观察17-β-雌二醇对高果糖诱导的去卵巢胰岛素抵抗大鼠血管重构的影响。方法将48只成年雌性SD(Sprague-Daw ley)大鼠随机分为正常对照组、模型组、17-β-雌二醇替代组、溶媒对照组,每组12只。正常对照组大鼠普通饲料喂养8周;模型组大鼠卵巢切除后,高果糖饲料喂养8周诱导胰岛素抵抗的产生;17-β-雌二醇替代组大鼠卵巢切除后,高果糖饲料喂养同时给予17-β-雌二醇(30μg/kg体重)每天皮下注射;溶煤对照组大鼠卵巢切除后高果糖饲料喂养8周,同时每天给予30μL/kg体重的无水乙醇皮下注射。实验8周末检测各组大鼠收缩压、血清雌二醇,空腹血糖和血清胰岛素水平,计算胰岛素敏感指数。大鼠放血处死后甲醛固定主动脉和肠系膜小动脉,石蜡包埋,切片,HE染色,病理图像分析系统测量主动脉和肠系膜小动脉重构的指标:内径、中膜、中膜/内径、中膜横截面积。结果与正常对照组相比,模型组大鼠收缩压、空腹血糖和血清胰岛素显著性升高,胰岛素敏感指数显著性降低,肠系膜小动脉内径减小,中膜和中膜/内径比值增加,而主动脉未见明显改变;17-β-雌二醇替代逆转上述改变。结论17-β-雌二醇能抑制高果糖诱导的去卵巢大鼠胰岛素抵抗和肠系膜小动脉重构的产生。

银杏内酯上调CGRP对大鼠脑缺血再灌注损伤产生保护作用

目的 研究银杏内酯对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用与降钙素基因相关肽 (CGRP)的关系。方法 大脑中动脉线栓法 (MCAO)制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。 6 0只SD♂大鼠随机分为假手术组 (sham)、脑缺血再灌注模型组 (MCAO)、溶媒对照组 (MCAO +vehicle)、银杏内酯低剂量 (MCAO +ginkgolide 10mg·kg-1)、中剂量(MCAO +ginkgolide 2 0mg·kg-1)和高剂量 (MCAO +ginkgolide 4 0mg·kg-1)治疗组 ,每组 10只大鼠。术后对大鼠进行神经缺陷评分 ,并取脑组织测量梗死体积。另 6 0只大鼠 ,分组、实验方法及步骤同上 ,术后取梗死侧脑组织制成匀浆 ,放射免疫法测量脑组织降钙素基因相关肽和内皮素(ET)含量。结果 银杏内酯能明显改善缺血再灌注损伤大鼠神经缺陷症状 ,缩小脑梗死体积 ,剂量依赖性升高缺血脑组织中已降低的CGRP含量和CGRP/ET值。结论 银杏内酯升高缺血脑组织中CGRP含量 ,使缺血脑组织中比例失衡的CGRP/ET值向正常恢复 。

普伐他汀对非对称性二甲基精氨酸促血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)对血管平滑肌细胞增殖的作用和普伐他汀对ADMA促平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法 用[3H]TdR掺入法和MTT比色法检测ADMA对培养的牛胸主动脉平滑肌细胞增殖作用的量效关系和时效关系 ,以及普伐他汀等药物对ADMA刺激平滑肌细胞增殖的影响。结果 用 30～ 30 0 μmol·L- 1ADMA分别孵育平滑肌细胞后 ,都明显增加血管平滑肌细胞DNA的合成 ,表现在 [3H]TdR掺入量由对照组的(6 38± 134)cpm增加到大剂量ADMA组的 (12 79±111)cpm。用 30 0 μmol·L- 1ADMA孵育细胞 2 4～ 96h呈时间依赖性地促进血管平滑肌细胞增殖 ,表现为 [3H]TdR掺入量随着时间的延长分别增加为对照组的 1.5 ,2 .7,4 .3和 5 .6倍。普伐他汀 (10 0 μmol·L- 1)可逆转ADMA所致的细胞DNA合成的增加 ,[3H]TdR掺入量由ADMA单独孵育组的 (6 10± 2 0 2 )cpm降低至普伐他汀处理组的 (35 6± 12 6 )cpm。此外 ,一氧化氮供体硝普钠和抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐处理后也可逆转这种增加。MTT法测定细胞数也证明 ,30～ 30 0 μmol·L- 1普伐他汀呈剂量依赖性地对抗ADMA所致的平滑肌细胞增殖。结论ADMA可促进血管平滑肌细胞的增殖 ;普伐他汀对ADMA所诱导的平滑肌细胞增殖具有抑制作用 ;这两者均可能与细?

降钙素基因相关肽介导硝酸甘油的心血管作用

硝酸甘油通过舒张血管 ,降低心脏前后负荷及扩张冠状动脉而成为治疗心绞痛的经典药物 ,其作用机制为释放NO ,激活鸟苷酸环化酶升高环鸟苷酸水平而发挥作用。降钙素基因相关肽 (CGRP)为辣椒素敏感感觉神经的主要递质 ,广泛分布于心血管组织。CGRP具有强效舒张血管、强心、保护血管内皮和心肌细胞等复杂的心血管作用 ,其释放受多种内源性活性物质 (包括NO)所调节。最近研究表明 。

普伐他汀对同型半胱氨酸损伤兔胸主动脉内皮依赖性舒张功能的影响

目的 探讨普伐他汀 (pravastatin ,PT)对同型半胱氨酸 (homocysteine ,Hcy)损伤家兔离体胸主动脉内皮依赖性舒张功能的影响。方法 采用离体胸主动脉环方法检测乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应来评价Hcy对血管内皮功能的损害和PT的保护作用。结果 分别用 1～ 10mmol/LHcy孵育血管环 3 0min ,呈浓度依赖性地抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应。用 0 3～ 3mmol/LPT分别预孵育血管环 15min ,再与 3mmol/LHcy共孵育 3 0min ,则显著改善Hcy所致的血管舒张功能的损害 ,并有剂量依赖性。结论 这些结果提示 ,PT对Hcy所致血管内皮依赖性舒张功能的损伤具有明显的保护作用。