琼脂糖电泳凝胶中回收微量DNA片段的新方法

对现有的 DNA片段回收方法进行了改进 .琼脂糖凝胶中目的 DNA片段条带切割后 ,浸入适量的 TE溶液 (0 .2～ 0 .4 m L/ g琼脂糖胶 ) ,在 37℃水浴保温 1 5 min,以溶出凝胶中的 DNA,利用相应的引物对浸出的微量DNA样品进行与原 PCR反应相同条件下的 PCR扩增 ,直接用 75 %乙醇沉淀后 ,适量 TE溶解得到回收的目的DNA样品 .此法回收的 DNA片段可用于分子克隆 ,特别是适用于 TA载体的克隆与测序 ,适合大批量微量样品的准确回收 ,防止了因试剂盒回收造成的微量

红莲型细胞质雄性不育性与线粒体渗透性转换

以水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)的不育系粤泰A(YTA)、保持系粤泰B(YTB)以及杂种F1代红莲2号(HL2)的黄化苗为材料,研究了在不同pH及离子强度下线粒体渗透性转换(MPT)的发生及其差异。结果表明,YTA、YTB和HL2间MPT的发生均存在差别,不育系YTA线粒体渗透性转换孔(PTP)的开启与关闭对pH及离子强度的变化较保持系YTB和HL2敏感。HL2与YTA虽然具有相同的细胞质来源,但两者之间PTP及MPT的特性明显不同,前者MPT的变化与具有正常生理功能的YTB线粒体的PTP和MPT的发生特点与特性相似。这些说明红莲型水稻细胞质雄性不育的发生可能与其MPT的发生有关。

线粒体丙二醛含量对膜流动性的影响

以水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)的不育系粤泰A(YTA)、保持系粤泰B(YTB)以及杂种F1代红莲2号(HL2)的黄化苗提取的线粒体为材料,对其线粒体膜的流动性及线粒体膜的丙二醛(MDA)含量进行分析,结果表明杂种F1代HL2线粒体膜的流动性最强,而且线粒体膜MDA的含量最低,不育系YTA线粒体膜的流动性相对最弱,同时线粒体膜MDA的含量最高。HL-CMS的不育性可能与HL-CMS水稻线粒体膜的流动性及线粒体膜的MDA含量有关。

RAPD标记鉴定水稻3种不同细胞质雄性不育类型的杂交种及其亲本

利用RAPD引物对3种不同细胞质雄性不育类型的杂交水稻组合及其亲本共21个材料进行了DNA多态性分析。从264个随机引物中筛选出具有非常明显多态性的引物25个,对25个引物在3种不同细胞质不育类型的杂交组合及其亲本间的DNA扩增多态性差异进行比较,最终选出具有不同类型间特异性扩增带的引物7个,利用这些特异性扩增带能有效地区分和鉴定目前在生产上大面积种植和推广,或者是具有应用潜力的3种不同细胞质雄性不育类型———野败型(WA)、红莲型(HL)和包台型(BT)———的6种杂交水稻组合及其亲本。

野生稻资源的研究与利用

由于栽培稻的许多改良品种具有相同或相似的遗传来源 ,造成了遗传上的单一性。而野生稻在漫长的进化过程中 ,由于复杂的地理环境和各种生态因素的作用 ,形成了具有抗性强、抗谱广的基因 ,对野生稻资源的研究、开发与利用已成为植物育种的重要领域。

La(Ⅲ)的抑菌作用研究

进行了La(Ⅲ)抑菌实验,采用比浊法、平板计数法、滤纸片法对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphulococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)进行了测定. 结果表明:所用抑菌物对供试菌均有不同程度的抑制作用,当La(Ⅲ)的浓度为1.0×10-6～1.0×10-4mol/L时抑制作用最明显,且随着La(Ⅲ)离子浓度增大,抑菌作用趋势增强.

分子标记鉴定红莲型细胞质雄性不育杂交水稻组合及其亲本

利用 RAPD分子标记对红莲型细胞质雄性不育 (HL- CMS)杂交水稻组合及其亲本进行了 DNA多态性分析 .从 1 2 4个随机引物中筛选出具有非常明显的多态性 ,且只能扩增出 1～ 5个片段的 4个引物能有效地区分和鉴定红莲型 (HL) 2个杂交水稻组合 (粤泰系列 ,从广系列 )

利用BAC-ISH对抗性基因Bph3物理定位及水稻第四染色体着丝粒识别的研究

用水稻BAC克隆21K19作探针进行了ISH。这个克隆是由第4染色体着丝粒连锁的RFLP标记RZ69筛选得到。在Cot-Ⅰ DNA封阻条件下,DAB均获得第4染色体着丝粒区和间期染色质上的一对信号。这一方法不仅可用于特定染色体识别,而且可区分其长臂和短臂。因此,还获得了第四染色体的臂比值以作为它的形态识别依据。由于RFLP标记RZ69与抗性基因Bph3紧密连锁,从而确定抗性基因Bph3位于水稻第4染色体着丝粒处。相对于常规的RFLP-FISH,BAC-ISH可以提高5倍以上的检出率。

湖北省桑萎缩病研究初报

通过对症状和病原的形态观察,证明了2003年湖北省远安县发生的桑萎缩病为黄化型,发病率多在10%～60%,个别田块高达90%以上;根据远安县桑种植和桑萎缩病发生的历史及其分布现状推断病源属本地原有病源,非1998年调运桑苗所致;桑萎缩病的发生与桑树品种、病源积累、媒介昆虫的密度、采伐有关;对桑萎缩病的桑叶进行超薄切片的电镜观察发现,细胞内有少量的MLO病原体,病原体为圆形,50～160nm.

水杨酸对HL-CMS同核异质系水稻叶片蛋白质及细胞壁成分的影响

分别用3种不同浓度的水杨酸(SA,3.25×10-5,7.5×10-5,1.5×10-4mol/L)处理水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)型不育系粤泰A(YTA)和同核异质的保持系粤泰B(YTB)的三叶期幼苗,研究了幼苗叶片蛋白质含量及细胞壁纤维素和木质素含量的变化。结果表明,外源SA对水稻HL-CMS不育系和保持系的作用效果明显不同。3种浓度的SA均对YTA叶片蛋白质含量的增加起一定的促进作用,其中高浓度SA (1.5×10-4mol/L)的促进作用最为显著,但高浓度的SA对YTB则表现出抑制作用。与对照组(木村B培养液处理)相比,3.25×10-5mol/L和7.5×10-5mol/L的SA均能增加YTA三叶期幼苗叶片中细胞壁纤维素含量,而较高浓度(1.5×10-4mol/L)SA处理的作用不明显。对于YTB,只有较高浓度(1.5×10-4mol/L)的SA 对幼苗叶片细胞壁纤维素含量表现出明显的增加作用,3.25×10-5和7.5×10-5mol/L的SA处理没有明显的影响。YTA和YTB幼苗叶片细胞壁木质素含量的变化对SA的响应浓度有所不同,在较高浓度范围的SA能增加YTB幼苗叶片细胞壁木质素含量,而较高浓度范围的SA对YTA幼苗叶片细胞壁木质素则表现为抑制效应,SA仅在较低浓度范围有促进作用。同核异质系YTA和YTB间叶片蛋白质、纤维素和木质素含量的变化对外源SA处理的响应不同,可能只与YTA和YTB细胞质之间的差异有关。