千里光石油醚提取物舒张气道平滑肌的作用机制研究

目的:为研究千里光石油醚提取物(PEESS)对小鼠气管平滑肌(ASM)的舒张作用及机理.方法:使用80 mmol·L^(-1)KCl或100μmol·L^(-1)Ach刺激小鼠离体气管环、小鼠气管平滑肌细胞(ASMCs)、肺部支气管以及在体小鼠气管,进行了气管环张力、细胞内Ca^(2+)浓度、气管环面积及小鼠呼吸系统阻力检测.结果:PEESS可剂量依赖性地抑制高钾和ACh诱导的气管环预收缩,同时扩张气管环面积,降低小鼠呼吸系统阻力,这种作用是通过抑制LVDCC及NSCCs等离子通道,阻断细胞外Ca^(2+)内流,从而舒张ASM.结论:千里光中的有效成分是作为气管扩张剂治疗哮喘的潜在药物.

萝芙木乙醇提取物舒张小鼠气管平滑肌的作用机理

为探究萝芙木乙醇提取物(EERV)舒张小鼠气管平滑肌的作用机理,使用80 mmol·L^(-1) KCl或100μmol·L^(-1)乙酰胆碱(ACh)作为激动剂预刺激小鼠离体气管环,用生物机能实验系统检测了EERV对气管环张力的影响.用肺功能仪在活体水平上检测了EERV对小鼠呼吸系统阻力(Rrs)的影响.结果表明:EERV可通过影响VDCCs、NSCCs、NCX等离子通道来抑制外钙内流和内钙释放,降低胞内钙离子浓度,从而舒张由高钾或ACh诱导预收缩的气管平滑肌.EERV还可抑制ACh引起的Rrs升高.提示EERV有望成为用于治疗哮喘的新药.

马棘根乙醇提取物舒张小鼠气道平滑肌

为研究马棘根乙醇提取物(EEIP)逆转小鼠气道平滑肌(ASM)的收缩及其机制,利用张力测量系统测量小鼠气管环张力,MTT法检测EEIP对16HBE细胞存活率的影响,肺切片技术测量肺内支气管的收缩与舒张,钙成像系统测量ASM细胞内Ca^(2+)水平,动物肺功能仪测量活体小鼠呼吸系统阻力(Rrs).结果表明:EEIP能够完全逆转ACh诱发的小鼠离体气管环和肺内支气管的收缩,且呈剂量依赖性,但不影响静息状态气管环张力;EEIP还能阻断ACh引起的稳态细胞内Ca^(2+)升高.此外,ACh诱发的收缩能够被L型电压依赖性钙通道(LVDCC)和钙库操纵性钙通道(SOCC)两种通透Ca^(2+)通道的选择性阻断剂部分抑制,剩余部分被EEIP所阻断.在活体小鼠,EEIP能够降低ACh引起的Rrs升高.引起最大舒张浓度的EEIP对16HBE细胞活性无影响.因此,EEIP可抑制LVDCC和SOCC,并介导Ca^(2+)内流停止,细胞内Ca^(2+)降低,这是EEIP逆转ASM收缩的机制,这种机制也存在于活体状态.故马棘和EEIP可用于开发新的气管扩张剂.

凤尾草乙醇提取物舒张小鼠气管平滑肌作用机理

为探究凤尾草乙醇提取物(ethanol extract of Pteris multifda Poir,EEPM)舒张高钾与乙酰胆碱(ACh)预收缩的小鼠气管平滑肌的作用机理,利用张力换能器探究了EEPM对高钾和ACh预收缩的离体小鼠气管环中相关离子通道的影响,并利用肺功能仪检测了活体水平上EEPM对小鼠呼吸气道阻力(respiratory airway resistance,Rrs)的影响.结果表明:EEPM能够完全舒张由高钾和ACh引起的气管平滑肌收缩,其原因在于EEPM能够抑制电压依赖性钙离子通道(voltage dependent calcium channels,VDCCs)和非选择性阳离子通道(nonselective cation current,NSCCs)以及Na^(+)/Ca^(2^(+))交换通道(Na^(+)/Ca^(2^(+))exchanger,NCX),阻止胞内钙库钙离子的释放和胞外钙离子的内流;且EEPM能够降低ACh引起的Rrs上升.故EEPM有望成为一种治疗哮喘的新药.

miR-185-5p抑制支气管上皮细胞16HBE增殖的作用机制

目的:研究miR-185-5p抑制支气管上皮细胞16HBE增殖的调控作用及其机制.方法:用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了A549和16HBE细胞内miR-185-5p和PLAC8 mRNA的表达量,用Lipofectamine 3000转染miR-185-5p mimics到16HBE细胞中,用双荧光素酶活性实验检测了miR-185-5p对PLAC8的靶向性.用MTT检测了miR-185-5p对16HBE细胞增殖的影响,用流式细胞术检测了细胞周期分布,用Western blotting检测了细胞内蛋白表达水平.结果:miR-185-5p在正常人肺支气管上皮细胞16HBE中的表达水平低于肺癌细胞A549(P<0.05);将16HBE细胞转染不同浓度的miR-185-5p mimics,16HBE细胞的增殖活性随着miR-185-5p mimics浓度升高而下降(P<0.05).通过生物信息学预测PLAC8可能是miR-185-5p的一个靶基因.16HBE细胞中PLAC8的表达量高于A549(P<0.05).与转染NC对照组比较,转染不同浓度梯度的miR-185-5p mimics到16HBE细胞后48 h,细胞内PLAC8 mRNA含量和蛋白表达量明显降低(P<0.05).双荧光素酶活性结果表明miR-185-5p与PLAC83′UTR结合后抑制其表达.miR-185-5p使细胞周期阻滞在S期,抑制了细胞内c-Myc、CDK2、CyclinA2、P21、p-Cdc2蛋白的表达.结论:miR-185-5p可能通过抑制PLAC8基因表达,抑制16HBE细胞的增殖活性.