具有抗稻瘟病菌活性的ⅡW1菌株的分离鉴定及其接合转移方法的建立

从湖北省神农架地区土壤中筛选出一株具有抗稻瘟病菌活性的ⅡW1菌株,采用菌块法测定了ⅡW1菌株对稻瘟病菌的抑菌活性,通过形态结构、生理生化和16S rDNA基因序列同源性比对对ⅡW1菌株进行鉴定,同时对链霉菌ⅡW1菌株attB序列进行克隆,并建立接合转移的方法.结果表明:ⅡW1菌株属假灰色链霉菌,链霉菌ⅡW1菌株对稻瘟病NO-1菌株和168菌株的抑菌圈直径分别为29.7 mm和27.4 mm;链霉菌ⅡW1菌株attB序列具有位点特异性重组所必须的核心位点5′-TT-3′.含ΦC31attP位点的整合型质粒pSET152通过两亲接合转移导入链霉菌ⅡW1菌株.

中间苍白杆菌SCUEC4菌株中尼古丁降解相关ocnC基因的克隆与表达

对中间苍白杆菌SCUEC4菌株中与尼古丁降解相关的ocnC基因进行克隆和表达,并对OcnC蛋白的表达条件进行优化,通过PCR扩增获得ocnC基因,构建重组质粒pET28a(+)-ocnC,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行异源表达,采用不同的IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对OcnC蛋白进行诱导表达.结果表明:ocnC基因大小为1344 bp,编码蛋白分子量为48.0 kDa,重组表达菌株在IPTG浓度为1.0 mmol·L^-1、诱导温度在37℃及诱导表达时间在20 h的优化表达条件时,OcnC蛋白的表达量较高.