基于OBE理念与双一流学科建设的民族药学一体化实验教学改革

指出了民族医药作为我国传统医学的重要组成部分,为保障我国少数民族地区人民群众健康作出了重要贡献;民族高校是我国培养民族药学人才的重要阵地,近年来中南民族大学校依托民族药学国家级实验教学示范中心与双一流学科建设,深入推进教学-科研-产业与人才培养的联动机制,开展了民族药学实验教学方法改革,建立了基于OBE理念和面向一流学科建设的民族药学一体化实验教学模式,取得了良好的教学效果,为此,总结了民族药学一体化实验教学改革的一些做法,可为新时期民族药学学科建设与人才培养提供参考。

鞣花酸调控Nrf2和NLRP3通路影响TGF-β所致AML-12细胞EMT的作用

研究了鞣花酸(EA)对TGF-β所致小鼠AML-12正常肝细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其可能机制.通过细胞活力评价、细胞形态观察和细胞内ROS水平检测,评价了EA对TGF-β所致AML-12细胞EMT的作用.通过免疫荧光和免疫印迹检测了细胞内EMT标志蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达;免疫印迹检测了细胞内Nrf2和NLRP3通路相关因子的表达水平.结果显示:EA显著抑制了TGF-β所致AML-12细胞EMT.进一步研究表明,EA可以诱导Nrf2入核并上调其下游抗氧化基因的表达.EA还可以下调NLRP3炎症通路相关蛋白的表达.综上所述,EA对TGF-β诱导的AML-12小鼠肝细胞EMT具有抑制作用,其机制可能与调控Nrf2抗氧化通路与NLRP3炎症通路有关.

鞣花酸对马兜铃酸I所致肾小管上皮细胞毒性的保护作用

探究了鞣花酸(ellagic acid,EA)对马兜铃酸I(aristolochic acids I,AAI)诱导的HK-2人肾小管上皮细胞毒性的保护作用和潜在机制.用噻唑蓝(MTT)比色法,乳酸脱氢酶(LDH)活性检测法评价了细胞活力;用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞分析法(FITC-Annexin V/PI双染)检测了细胞凋亡;用免疫印迹和实时荧光定量PCR检测了细胞内NF-κB和NLRP3通路相关因子的表达水平.结果显示:EA显著改善了AAI所致的HK-2细胞活力下降与凋亡增加的现象.进一步研究表明,AAI通过激活NF-κB上调HK-2细胞内NLRP3炎症小体组分编码基因的转录.EA则能明显阻断AAI对NF-κB/NLRP3通路的激活作用.综上所述,EA能明显缓解AAI诱导的HK-2细胞的毒性,其作用机制可能与阻断AAI对细胞内NF-κB/NLRP3级联的激活作用紧密相关.

一测多评法在四神丸中9种成分含量的测定及质量评价中的应用

在高效液相色谱法(HPLC)基础上,采用一测多评法(QAMS)测定复方四神丸中分别来源于君、臣、佐药中的9种代表性有效成分的含量,并将方法应用于8个不同厂家的复方四神丸进行质量评价.采用HPLC法以水(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱;采用多点校正法以补骨脂素为内参物建立9种有效成分的相对校正因子;计算8个厂家四神丸中9种有效成分的含量,通过评估有效成分的含量进而评估8个厂家的四神丸质量.结果表明:9种成分测定结果与外标法(ESM)测定结果的含量差异百分比均不超过3%.结论:一测多评法高效准确,能有效地测定四神丸中9种有效成分的含量,可以快速地对复方四神丸整体的质量进行评价.

石榴籽油在D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内的抗氧化作用

研究了石榴籽油(PGSO)在D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内的抗氧化作用。将60只昆明小鼠随机分为6组:健康组、模型组、维生素E(V_E)阳性对照组以及PGSO低、中、高剂量组,持续给药45 d后,测定各组小鼠的体重,分析PGSO对小鼠肝、肾、脑与血清中抗氧化系统的作用;检测各组小鼠肝、肾中G6PD的活性和NADPH含量。结果表明:与模型组比较,PGSO可拮抗小鼠体重的减轻,降低肝、肾、脑及血清中MDA含量,增加GSH含量,提高T-AOC活性以及抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性;且PGSO各剂量组小鼠肝和肾中G6PD的活性均增强,NADPH含量均增加。研究表明PGSO对D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内的氧化应激具有明显的拮抗作用。

桑葚总多糖对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究桑葚总多糖(MFP)对APAP引起的HepG2肝细胞毒性的缓解效应,探讨MFP对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制.方法:采用MTT法检测MFP对细胞活力的影响,将32只小鼠随机分为正常组、模型组、MFP低、高剂量组(50,150 mg·kg^-1),腹腔注射300 mg·kg^-1 APAP建立小鼠急性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,肝组织中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)水平;用ELISA测定肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色法观察肝脏组织的病理学变化;用Western blot检测小鼠肝组织中核因子-κB(NF-κB)p65、血红素加氧酶(HO-1)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的表达水平.结果:MFP可剂量依赖性地缓解APAP诱导的HepG2细胞死亡(P<0.01).与模型组相比,MFP能显著地降低肝损伤小鼠血清中ALT,AST,LDH水平(P<0.05或P<0.01),下调肝组织中MDA,TNF-α,IL-1β,IL-6的含量(P<0.05或P<0.01),改善APAP诱导的小鼠肝组织病变.此外,MFP还能明显上调模型小鼠肝组织中GSH,T-SOD,T-AOC水平(P<0.05或P<0.01),明显下调NF-κB p65蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01),上调HO-1和G6PD蛋白的表达水平(P<0.05或P<0.01).结论:MFP能保护APAP诱导的小鼠急性肝损伤,这与增强肝脏抗氧化能力,抑制肝脏炎症反应有关.

荷叶总生物碱激活肝脏AMPK/Nrf2通路缓解对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

为探讨荷叶总生物碱(TAL)对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制,小鼠被随机分为正常组,模型组和TAL低、高剂量组(30、100 mg/kg),连续灌胃给药七天后,除正常组外,其余各组腹腔注射300 mg/kg的APAP诱导急性肝损伤。12小时后,收集各组小鼠的血清与肝脏样本,进行后续实验。结果显示,与模型组相比,TAL可显著降低血清中的ALT和AST活性,下调肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA含量,上调肝组织中SOD、CAT、GSH-Px和GSH的水平。此外,TAL还明显改善了APAP诱导的小鼠肝组织病变。在TAL的作用下,肝内AMPK磷酸化水平提高,Nrf2蛋白入核,HO-1和GCLC基因表达上调。综上所述,TAL对APAP诱导的急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与激活AMPK/Nrf2通路相关。

竹节参皂苷成分对对乙酰氨基酚诱导急性肝损伤的保护作用

目的:观察竹节参总皂苷提取物(PJST)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导急性肝损伤的预防保护作用.方法:构建APAP诱导HepG2细胞损伤的体外模型,采用MTT法评价PJST对APAP诱导HepG2细胞死亡的预保护作用,并观察细胞形态变化,采用Hoechst 33258荧光染色法研究PJST对细胞凋亡形态的影响.取40只昆明种小鼠构建体内模型,小鼠随机分为空白组、模型组和PJST低、高剂量组(50、100 mg·kg^(−1)),腹腔单次注射APAP溶液(400 mg·kg^(−1))以构建肝损伤模型.给药造模结束后,处死小鼠并收集血清及肝脏组织.采取生化试剂盒检测血清中ALT、AST和LDH水平,ELISA法检测肝脏组织TNF-α、IL^(-1)β和IL-6水平,HE染色法观察肝脏组织显微结构变化情况,免疫组化法检测肝组织Bax和Bcl-2蛋白的表达差异,免疫印迹检测肝组织Bax、Bcl-2、P-NF-κB p65和核内NF-κB p65的蛋白表达水平.结果:PJST可以有效干预APAP诱导的HepG2细胞凋亡;体内实验中PJST组小鼠血清ALT、AST和LDH水平均显著低于模型组,且肝脏显微结构变化也较模型组有所恢复.进一步研究结果显示:PJST可以显著改善由APAP诱导的肝脏细胞凋亡,Bax和Bcl-2蛋白表达的异常,NF-κF p65的异常磷酸化和入核,以及抑制肝脏内炎症因子TNF-α、IL^(-1)β和IL-6的过量产生与释放.结论:PJST可以明显缓解APAP诱导的急性肝损伤,其机制可能与抑制肝细胞凋亡和炎症反应有关.

莲心总碱对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的缓解作用

目的:观察莲心总碱(total alkaloids from the seed embryo of Nelumbo nucifera,TAENN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,Gal N)诱导急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响。方法:将昆明小鼠40只随机分为4组(正常对照组、模型组和TAENN高、低剂量组),每组10只。TAENN高、低剂量组的给药剂量分别为100、30 mg/kg,给药途径为灌胃,每日给药1次。正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。给药结束后,模型组和TAENN高、低剂量组小鼠腹腔注射LPS/Gal N建立小鼠急性肝衰竭模型。用酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和前列腺素E2(prostaglandine E2,PGE2)水平。用Griess法检测肝组织中一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量。用实时聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测小鼠肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的mRNA的表达水平。用免疫印迹法检测小鼠肝组织中iNOS、COX-2蛋白表达和核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)p65亚基磷酸化水平。结果:与模型组相比,TAENN组小鼠血清与肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低(P<0.01)。肝脏中炎症介质NO和PGE2水平亦有极显著下降(P<0.01)。经TAENN处理后,模型小鼠肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6、i NOS、COX-2等的m RNA表达水平明显下降(P<0.01)。此外,iNOS和COX-2的蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p65蛋白本身的表达水平不变,但其536位丝氨酸的磷酸化水平亦极显著下降(P<0.01)。结论:TAENN对LPS/Gal N诱导小鼠急性肝衰竭相关的炎症反应具有明显的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路并减少炎症因子和炎症介质相关基因的表达有关。

维吾尔药复方待比地力对顺铂所致小鼠肾损伤的保护作用

目的:观察维吾尔药复方待比地力(DBD)对顺铂所致小鼠肾损伤的影响.方法:昆明小鼠40只随机分为正常组、肾损伤模型组、DBD低和高剂量干预组共4组.检测小鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量以及肾脏MDA、GSH、SOD和CAT、TNF-α、IL-1β和IL-6水平;观察肾脏显微结构;并检测肾内NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)和IL-1β的蛋白表达水平.结果:DBD能显著下调肾损伤小鼠血清中BUN和Cr的含量并改善顺铂诱导的肾脏显微结构变化.与肾损伤模型组比较,DBD组小鼠肾内MDA水平明显降低,GSH、SOD和CAT水平则明显增加.顺铂诱导了NLRP3、ASC和caspase-1蛋白的表达并上调肾内炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量.DBD剂量依赖性地改善了小鼠肾损伤.结论:DBD能明显缓解顺铂诱导的小鼠肾损伤,其机制可能与通过抑制肾内NLRP3炎症小体各组分的表达来减轻顺铂诱导的肾脏炎症反应有关.

鞣花酸对马兜铃酸Ⅰ诱导小鼠急性肾损伤的保护作用

目的:研究鞣花酸(ellagic acid,EA)对马兜铃酸I(aristolochic acids I,AAI)诱导的急性肾损伤的保护作用。方法:40只昆明小鼠(雌雄各半)随机分为健康组、模型组(10 mg/kg m_(b) AAI)、EA低剂量组(10 mg/kg m_(b) AAI+10 mg/kg m_(b) EA)和EA高剂量组(10 mg/kg m_(b) AAI+30 mg/kg m_(b) EA),EA不同剂量组小鼠每天灌胃不同剂量的EA,从第7天开始,腹腔注射AAI建立急性肾损伤模型,然后灌胃给予不同剂量的EA,12 d后处死小鼠;检测肾脏指数、尿蛋白、尿素氮和肌酐水平等肾功能指标;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)和Masson染色检测肾脏组织病理学变化;检测肾脏内氧化应激指标(包括还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平),检测小鼠体内炎症因子水平;通过免疫印迹和定量聚合酶链式反应检测肾脏中核因子(nuclear factor,NF)-κB和NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)通路相关因子的表达。结果:与模型组相比,EA能显著改善肾损伤模型小鼠的各项肾功能指标以及肾脏组织病理学变化,恢复肾组织中氧化应激指标到接近正常水平;此外,与模型组相比,在EA的作用下小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素(interleukin,IL)-1β水平下降,肾脏中TNF-α和IL-1β编码基因的转录水平亦有明显下降;进一步研究发现,与模型组相比,EA能显著下调小鼠肾脏内NF-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)α和NF-κB p65蛋白的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),抑制NLRP3炎性小体各组分(包括NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1和IL-1β的转录和翻译。结论:EA对AAI诱导的小鼠急性肾损伤具有保护作用,其机制可能与通过干预NF-κB/NLRP3通路阻断AAI所致的肾脏内炎症反应紧密相关。

熊胆粉通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路产生对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用

目的观察研究熊胆粉(Pulvis Fellis Ursi,PFU)对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用及其可能的机理。方法取昆明种小鼠50只,随机分为正常组、模型组、PFU低、中、高剂量组(剂量分别为150、300、600 mg·kg^(-1),溶于生理盐水),每组10只。正常组和模型组小鼠每天灌胃生理盐水(10 mL·kg^(-1)),PFU组每天灌胃相应剂量溶液,连续8天。末次给药结束后,模型组以灌胃的方法给予50%乙醇溶液(10 mL·kg^(-1)),每12 h一次,共6次,末次给予50%乙醇溶液4 h后,处死小鼠并收集血清及肝脏组织。分别用生化试剂盒检测血清中ALT、AST、TG、TC和肝脏组织中GSH、T-SOD和MDA水平;用酶联免疫法检测肝脏组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平;用HE染色法观察肝脏组织显微结构变化情况;用免疫印迹法检测肝组织总Keap1的表达和肝组织核内Nrf2的表达,用免疫印迹和免疫组化法分别检测肝组织总HO-1和GCLC蛋白的表达。结果PFU能显著下调乙醇所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TG和TC的异常升高,并改善乙醇诱导的肝脏显微结构变化。与肝损伤模型组比较,PFU组小鼠肝组织内MDA水平明显降低,GSH和T-SOD水平则明显增加。进一步研究表明,乙醇能诱导小鼠肝脏内炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的上调,PFU可以剂量依赖性地缓解了上述病变。并且PFU预处理组下调了Nrf2的抑制因子Keap1的表达,从而促进了Nrf2蛋白的入核并上调了乙醇抑制的下游蛋白HO-1和GCLC的表达,从而发挥肝保护的作用。结论熊胆粉对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预保护作用,其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路,恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关。

植物内生真菌来源的倍半萜对LPS诱导细胞炎症反应的抑制作用

目的:探究马铃薯内生真菌次生代谢产物中新型倍半萜类化合物TA的抗炎作用.方法:脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,通过测定细胞存活率、细胞NO的产生量、细胞内活性氧(ROS)水平,细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的释放量、一氧化氮合成酶(iNOS),环氧合酶(COX-2)蛋白表达量,从而评价化合物TA的抗炎活性.结果:化合物TA对细胞无毒性,可剂量依赖性地抑制LPS刺激产生的NO,降低ROS水平,减少细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的产生及下调iNOS,COX-2蛋白的表达量.结论:马铃薯内生真菌次生代谢产物中新型倍半萜类化合物TA具有显著的抗炎活性.

马铃薯内生真菌中丁烯内酯类化合物诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制

探究马铃薯内生真菌Aspergillus carneus提取物中丁烯内酯类化合物Asperteretal D对乳腺癌细胞(MCF-7)的凋亡诱导作用及其分子机制.结果表明:化合物Asperteretal D剂量依赖性地促进MCF-7细胞凋亡,分子对接实验表明其能够与PARP、Caspase-9、P53、Bcl-2、Bax等凋亡相关蛋白结合.化合物Asperteretal D能显著下调pro Caspase-9、pro Caspase-3、PARP蛋白的表达,同时上调P53蛋白的表达.因此,化合物Asperteretal D通过诱导乳腺癌细胞凋亡,从而显著抑制其增殖.

白玉蜗牛糖胺聚糖的分离纯化及结构表征

为了研究白玉蜗牛中糖胺聚糖(AFG)理化性质和化学结构,采用酶解-碱解处理法提取白玉蜗牛粗多糖,以季铵盐沉淀法和离子交换柱层析法纯化获得AFG,得率为0.88%.理化性质分析显示,AFG为均一性的酸性粘多糖(Mw为23840 Da);单糖组成分析及1 H NMR谱图显示,AFG是由等摩尔的D-乙酰氨基葡萄糖(D-N-acetyl glucosamine,GlcNAc)和L-艾杜糖醛酸硫酸酯(2-sulfated L-iduronic acid,IdoA2S)组成的糖胺聚糖;采用β-消除解法获得其解聚产物(dAFG),UV及1H/13C NMR显示其非还原端为不饱和己糖醛酸,此与β-消除解聚法的糖苷键选择性解聚特点相符.结论:白玉蜗牛所含AFG由等摩尔的GlcNAc和IdoA2S交替连接形成,其具有类似于肝素的结构特点;β-消除解聚可用于制备低分子量的AFG解聚产物.

荷叶总碱对酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的探讨荷叶总碱(TAL)对酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用及可能机理。方法将40只小鼠随机分为正常组、肝损伤模型组、TAL低剂量组(30 mg/kg)和TAL高剂量组(100 mg/kg)。每组10只小鼠。造模给药结束后,检测各组小鼠相关生理生化指标(ALT、AST、TG),氧化应激指标(GSH、MDA)和炎症因子指标(TNF-α、IL-1β、IL-6)。采用HE染色法观察各组小鼠肝脏的显微形态。采用免疫印迹与荧光定量PCR法检测各组小鼠肝脏细胞核内的Nrf2蛋白水平与肝脏中Nrf2下游基因的表达水平。结果与正常组相比,模型组小鼠发生肝损伤和肝脏TG积累(P <0.01),肝脏内发生氧化应激和炎症反应(P <0.01),肝脏显微结构明显改变。TAL有效地缓解了这些病变。进一步研究发现,TAL对模型小鼠肝脏中的Nrf2通路具有明显的激活作用。结论 TAL对酒精诱导的小鼠肝损伤具有明显的保护作用。其机制与激活肝脏中Nrf2通路有关。

脊椎动物GSDM基因家族的生物信息学分析

多数脊椎动物的基因组中都存在gasdermin(GSDM)基因家族成员。该家族中的gasdermin D(GSDMD)和gasdermin E(GSDME)与高等动物体内的细胞焦亡紧密相关。然而,目前关于GSDM家族其它成员的研究还比较缺乏,对其系统演化的模式也知之甚少。本研究首先对人GSDM家族基因的基因结构、染色体定位、表达的组织特异性、编码蛋白的理化性质与二级结构进行了生物信息学分析。随后,对18个物种中的GSDM基因家族成员进行系统进化树的构建和选择压力分析。结果表明,人GSDM家族各成员的基因结构和表达的组织分布均存在较大差异。其编码蛋白多为酸性,亲水性高,二级结构则以α-螺旋与无规则卷曲为主。系统发育分析表明,Pejvakin(PJVK)和GSDME存在于脊椎动物的所有类群中,是GSDM基因家族中的原始成员。GSDMB、GSDMC和GSDMD存在于哺乳动物中,可能是由鸟类GSDMA演化而来。选择压力分析表明,GSDMB、GSDMC、GSDME和PJVK均受负选择作用,且以PJVK所受的负选择最强。GSDMD则受到明显的正选择作用。以上结果既可为理解GSDM基因家族的功能提供新线索,又可为进一步针对该家族开展实验研究提供新的参考依据。