重视中药多组分整合作用的研究

中药及其方剂由活性物质群构成,它们按一定要求配伍组合,通过多靶点、多途径经整合发挥作用;其特定的终末效应是其相应活性物质群作用于多个靶点的优势、放大、选择、嵌合、适应等作用的综合、聚类、协调、反馈、平衡,亦即“整合”的结果,其中,适应起着重要作用。

2型糖尿病动物模型的研究进展

目的综述近年来2型糖尿病动物模型的几种建立方法。方法主要对2型糖尿病动物模型建立的方法与技术进行综述和评价。结果2型糖尿病动物模型主要可分为自发性2型糖尿病动物模型、实验性2型糖尿病动物模型、基因敲除复制2型糖尿病模型和胰岛素抵抗的细胞模型等四种。结论上述四种动物模型的建立方法各有优缺点,实验性2型糖尿病动物模型价格低廉,可操作性强,并且在一定程度上符合人类糖尿病形成的病理过程,成为目前研究2型糖尿病的最主要动物模型。

内皮细胞功能及其异质性研究的进展

血管内皮细胞具有广泛的生理功能，本文从血管形成、凝血及血小板和内皮细胞的相互作用、炎症和免疫反应、合成基质成分、调节血管张力和脂质代谢等方面，综述了内皮细胞的功能。重点介绍了各类组织和动物内皮细胞之间的区别，主要体现在形态、功能、表面抗原及对内皮损伤后的反应等方面。

蜂胶环糊精包合最佳工艺优选及对小鼠辐射损伤的保护作用研究

目的:优选出蜂胶环糊精最佳包合工艺并考察其对小鼠辐射损伤的保护作用。方法:以总黄酮含量为指标,选用L9(34)正交实验表进行实验,优选β-环糊精包合蜂胶的最佳工艺;以该蜂胶环糊精包合物为实验药物,以60Coγ射线照射造成小鼠辐射损伤,观察小鼠30天内存活时间、并进行常规白细胞计数及硫代巴比妥酸法测定肝脏中脂质过氧化物含量。结果:β-环糊精包合蜂胶的最佳工艺条件是:蜂胶:-βCD比例为1∶2,乙醇浓度为95%,水浴温度为50℃;与模型组比较,蜂胶能显著延长小鼠辐射后30d内存活时间(P<0.01)、提高小鼠外周血白细胞数(P<0.01)、降低肝脏脂质过氧化物含量(P<0.01)。结论:蜂胶对辐射损伤具有保护作用。

15种中西药物含药血清对大鼠成骨细胞增殖成熟的影响

目的 用含药血清体外观察 1 5种中、西药物对大鼠新生鼠颅骨成骨细胞增殖成熟的影响 ,比较它们的作用。方法 将所试药物口饲大鼠 ,每日 2次 ,连续 5次 ,于末次给药后 1h采血 ,分离获得含药血清 ,加入成骨细胞培养液中 ,培养 3d,以MTT法和金氏法测定光密度值 ,探讨对成骨细胞增殖和细胞外液中碱性磷酸酶活性的影响。结果 所试 1 5种药物的含药血清对成骨细胞增殖均无显著作用 ;3种西药、4种中成药能显著增强碱性磷酸酶活性 ,其作用强度分别依次为安雄、特乐定、福善美以及泰格、骨疏康、鹿茸健骨、仙灵骨葆。 6种中医古方对碱性磷酸酶活性无显著增强作用。结论 安雄胶囊 (雄激素制剂 )、特乐定片 (氟制剂 )、福善美片 (双膦酸盐制剂 )和中药泰格胶囊、骨疏康颗粒、鹿茸健骨胶囊。

桂皮醛对IL-1刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX-2活性及释放PGE_2的影响

目的观察从桂枝汤中分离出的单体桂皮醛对白细胞介素1(IL-1)刺激大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs)与发热有关的信号转导通路上关键信号元件环氧酶(COX)和前列腺素E2(PGE2)的影响。方法建立rCMECs培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。待细胞生长至融合状态后加入不同浓度的桂皮醛(12.5、25、50、100及200mg/L)孵育3h,随后以30ng/ml的IL-1刺激12h。ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量及细胞内COX-1、COX-2的活性。结果Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见95%以上为阳性细胞,证实为rCMECs。暴露于浓度为30ng/ml IL-1后,rCMECs内COX-2活性及释放的PGE2量显著增加(P<0.01),COX-1活性无明显变化(P>0.05)。加入不同浓度的桂皮醛后,随浓度增加而下调IL-1升高的COX-1、COX-2活性及PGE2量,且呈一定的浓度依赖关系;至浓度为100mg/L时,COX-2活性及释放的PGE2与IL-1单独作用组比较差异均有显著性差异(P<0.05),COX-1活性无明显变化(P>0.05)。结论桂皮醛能下调IL-1刺激下rCMECs释放的PGE2,作用机制可能与抑制COX-2活性有关。

桂枝汤有效部位A对IL-1刺激的大鼠脑微血管内皮细胞前列腺素E_2及其主要信号转导元件的影响

目的:探讨桂枝汤解热有效部位A(Fr.A)对IL-1刺激的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)PGE2信号转导通路主要元件的影响。方法:制备大鼠含药血清,通过放射免疫法测定PGE2含量,酶反应底物法测定PLA2活性,ELISA法测定COX活性,比色法测定NO含量。结果:Fr.A含药血清处理rCMEC后,在IL-1刺激下,孵育液中PGE2和NO含量、总COX和COX-2活性均显著减低,对升高的sPLA2活性无明显影响。结论:Fr.A可通过影响PGE2信号转导通路主要元件COX及NO,进而影响PGE2水平。

桂皮醛对发热大鼠下丘脑蛋白质组双向凝胶电泳分析

目的 :观察桂皮醛对酵母致热大鼠的解热作用及其对下丘脑蛋白质组的影响。方法 :采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析方法 ,对蛋白质进行分离 ,以模型组作为参考胶进行匹配。结果 :口服给予桂皮醛后对发热大鼠有解热作用 ,双向电泳图像分析显示桂皮醛组与模型组匹配率为 86% ,多个蛋白质点表达量有不同程度的改变。结论 :桂皮醛对酵母致热大鼠有解热作用 ,其差异表达的蛋白质点可能参与了解热过程。

发热大鼠脑组织15-羟基前列腺素脱氢酶活性的时相变化及桂枝汤的影响

目的 :研究发热大鼠下丘脑和其他脑组织 15 PGDH活性的时相变化及桂枝汤的影响。方法 :利用Radio TLC法测定发热大鼠及桂枝汤治疗组脑组织不同时间的 15 PGDH活性。结果 :皮下注射酵母后 ,伴随体温的升高 ,大鼠下丘脑PGDH活性先降低后逐渐恢复 ,桂枝汤可阻止该酶早期的活性降低并升高至正常值以上 ;其他脑组织PGDH活性也有类似变化 ,但桂枝汤可抑制后期的PGDH活性向正常恢复。结论 :下丘脑PGDH活性降低 ,参与了酵母性发热的早期机制 ,升高该部位PGDH活性可能是桂枝汤解热机理之一。

桂枝汤对发热大鼠下丘脑蛋白质组影响初探

目的 :初步观察桂枝汤对发热大鼠下丘脑组织中蛋白质的差异表达 ,为进一步探讨桂枝汤的解热分子机制奠定基础。方法 :应用蛋白质组技术 ,对酵母发热大鼠模型和桂枝汤治疗组下丘脑组织中蛋白质表达进行比较 ,观察其差异点。结果 :发现模型和治疗大鼠下丘脑蛋白表达有明显差异 ,主要是蛋白表达量的增加和减少以及个别蛋白等电点的改变 ,其中在给予桂枝汤后有 8种蛋白 (Mr pI:2 8 9kD 4 4 7,2 4 4kD 6 2 8,2 5 4kD 6 39,2 5 9kD 6 39,17 6kD 7 38,17 2kD 7 4 3,2 4 9kD 7 39,2 6 9kD 7 5 9)表达增强 ,6种蛋白 (Mr pI:14 3kD 4 83,2 8 5kD 4 39,16 2kD 4 11,15 3kD 6 7,30 5kD 7 0 9,30 5kD 7 13)表达降低 ,1种蛋白 (Mr pI:14 8kD 5 4 )等电点发生了改变 ,差异蛋白数量约占可分辨蛋白点的 2 3% ,本次实验未发现新的差异蛋白点。结论 :桂枝汤的解热作用可能与改变下丘脑组织中某些蛋白质的表达及修饰有关。

桂枝汤有效部位A对致热大鼠下丘脑蛋白质组双向电泳分析

目的 :观察桂枝汤有效部位A对酵母致热大鼠下丘脑组织蛋白质组的影响。方法 :采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助的图像分析方法 ,对蛋白质进行分离 ,以模型组作为参考胶进行匹配。结果 :口服给予桂枝汤有效部位A后对发热大鼠有解热作用 ;双向电泳图像分析显示桂枝汤有效部位A与模型组匹配率为 85 % ,多个蛋白质点表达量有不同程度的改变。结论 :差异表达的蛋白质点可能与桂枝汤有效部位A解热作用有关。

白细胞介素1β刺激对脑微血管内皮细胞COX活性、mRNA表达和PGE_2释放的影响

目的:探讨白细胞介素1β(IL-1β)刺激不同时间对大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)的环氧合酶(COX)活性及其mRNA表达和PGE2释放的影响。方法:建立rCMEC培养,进行Ⅷ因子相关抗原鉴定。细胞长至融合状态后加入IL-1β(30μg/L),分别刺激0.5、1、2、4、8、12、24 h,ELISA测定细胞内COX-1、COX-2的活性及细胞外液PGE2含量,荧光实时定量PCR检测COX-1、COX-2的mRNA表达量,扩增产物进行熔解曲线图及琼脂糖电泳分析,并与未刺激的rCMEC作比较。结果:①Ⅷ因子抗体免疫组化染色可见90%以上的培养细胞呈阳性,确认为rCMEC。②IL-1β刺激4 h时细胞培养液PGE2含量已明显高于未刺激组(P<0.05);12 h时PGE2含量达到最大值(P<0.01);24 h时PGE2含量有所回降,但与未刺激组比较仍有显著差异(P<0.05)。③IL-1β刺激不同时间rCMEC内COX-1活性与未刺激组相比无统计学差异(P>0.05);COX-2活性在第8 h时已明显高于未刺激组(P<0.05),12 h活性达峰值(P<0.01),24 h活性有所回降,但仍具显著差异(P<0.05)。④IL-1β刺激不同时间COX-1 mRNA表达与未刺激组比较无明显差异(P>0.05);未刺激组在本实验条件下未检测到COX-2 mRNA表达,IL-1β刺激1h时可见COX-2 mRNA表达,4 h时COX-2 mRNA表达至峰值,而后开始回降,第12 h时已未见表达。熔解曲线图显示无非特异性扩增;琼脂糖电泳可见扩增基因与目的基因长度相符,结果与荧光定量PCR一致。结论:IL-1β作用下,rCMEC释放的PGE2持续增加并于12h达峰值,这一过程主要与COX-2 mRNA表达激活及COX-2活性增加有关。

白细胞介素1β刺激脑微血管内皮细胞释放前列腺素E_2的经时变化

目的:探讨白细胞介素1β(IL1β)刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞释放前列腺素E2(PGE2)的经时变化。方法:30ng/ml浓度的IL1β刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞,分别于刺激后0.5、1、2、4、8、12和24h收集细胞外液,用酶联免疫法(ELISA)测定各时间点细胞外液PGE2含量,并对各相应时间点的内皮细胞进行细胞计数。结果:①空白组内皮细胞计数值随时间延长而持续性增加,12h趋于稳定;IL1β刺激组细胞计数值随时间延长也相应增加,12h基本趋于稳定,虽各时间点细胞数绝对值略少于空白组,但两者无统计学差异(P>0.05)。②由于细胞的不断生长,空白组PGE2含量也在不断地增加,12h为(10.80±1.46)pg/ml,达最大值,24h为(9.72±2.78)pg/ml,有所下降。加入IL1β刺激后8h,细胞外液PGE2含量已开始明显增加,12h为(16.93±2.98)pg/ml,达最大值,与空白组比较,有显著性差异(P<0.01);24h为(16.82±1.54)pg/ml,虽有所降低,但与空白组比较,仍具显著性差异(P<0.01)。结论:大鼠脑微血管内皮细胞经IL1β刺激后,细胞释放的PGE2在12h达峰值,以后缓慢下降。

发热大鼠下丘脑组织中蛋白质组双向电泳图谱初步分析

目的 :初步观察酵母性发热大鼠下丘脑组织中蛋白质的差异表达 ,为进一步探讨发热的分子机制提供依据。方法 :应用双向电泳技术 ,对正常大鼠和酵母发热大鼠下丘脑组织中蛋白质表达进行比较 ,观察其差异表达。结果 :发热模型大鼠与正常大鼠比较 ,下丘脑蛋白表达有明显差异 ,差异蛋白数量约占可分辨蛋白点的3 8%。其中 9种蛋白表达强于对照 ,4种蛋白表达低于对照 ,1种蛋白等电点发生了改变 ,1种蛋白仅见于酵母发热大鼠。结论 :发热与正常大鼠下丘脑组织中所表达的差异蛋白 ,是否是酵母介导大鼠体温升高的相关蛋白或特异蛋白 。

脑心通胶囊对局灶栓塞性脑缺血大鼠内皮素及降钙素基因相关肽含量的影响

目的 :在大鼠局灶栓塞性脑缺血模型上观察脑心通胶囊对神经肽的影响 ,探讨其治疗脑缺血的可能机制。方法 :采用FeCl3致大脑中动脉栓塞模型 ,应用放免法测定SD和自发性高血压大鼠 (HSR)血浆、下丘脑中ET和CGRP含量。结果 :脑心通可明显拮抗缺血 2 4h以内的血浆CGRP降低及ET的升高 ,提高SHR脑缺血时脑组织CGRP含量。结论 :脑心通主要对缺血早期ET及CGRP的异常变化有改善作用 ,而对缺血后期神经肽尚无明显影响 ,且以升高血浆及下丘脑中CGRP含量为主 ,对血浆ET的升高也有一定影响。

脑心通胶囊对局灶性脑缺血大鼠血管活性肠肽的影响

目的:研究步长脑心通对中动脉局灶性栓塞模型大鼠血浆及下丘脑组织血管活性肠肽的影响。方法:采用放射免疫法测定VIP浓度。结果:脑心通可以升高缺血早期血浆VIP水平,但降低缺血晚期下丘脑组织VIP浓度。结论:在中风早期和晚期,脑心通调节VIP的机制不同。

蛋白质组检测技术进展

“蛋白质组学”概念自 1 994年提出之后 ,其研究技术得到了突飞猛进的发展 ,主要采用的是双向凝胶电泳 ,但该方法存在很多不足 ,尤其在蛋白质的检测手段和定量分析上还不尽如人意。目前广泛使用的染色技术是银染和考马斯亮蓝染色 ,荧光染色等更准确和灵敏的检测技术也为蛋白质组学技术提供了不可比拟的技术支持。差异凝胶电泳和同位素代码标记的出现 ,对以双向电泳为核心的传统方法提出了创新和改进 ,新产生的多元化的分析方法将大大加强目前双向凝胶电泳的应用能力 。