中药材传统商品等级的科学性——以金银花为例

以金银花为例,采用"不同地域专家共识法"进行代表性样品遴选和商品等级评定,对"商品等级-外观性状-成分含量"进行相关性分析、系统聚类分析和PLS-DA分析,以阐述中药材传统商品等级的科学性。参考现有文献资料以及样品收集地的等级调研情况,从收集的118份金银花样品中遴选出"初始等级"样本78份;分别组织山东临沂、安徽亳州、河北安国和北京等4个地区(n=4)的权威专家进行等级评定,基于等级一致率(R_i≥70%),从"初始等级"样本中遴选出"地方等级"样本69份;基于平均等级一致率■,从"地方等级"样本中遴选出"权威等级"样本52份,其中一等品15份,二等品9份,三等品11份,四等品17份。以"权威等级"样本为对象,量化表征其主要外观性状,UPLC测定13种成分含量,并分别计算6种酚酸、4种黄酮以及3种环烯醚萜的总含量。相关性分析发现,与等级相关的外观性状指标有4项:色泽、黄条(含开放花)率、黑头(含黑条)率和枝叶(含花蕾碎屑)率;与等级相关的成分含量指标有5项:绿原酸、异绿原酸C、当药苷、马钱苷和6种酚酸总含量。同时,绿原酸、马钱苷和6种酚酸总含量与主要外观性状呈显著性负相关,说明金银花的外观性状可反映其内在质量,绿原酸、马钱苷和6种酚酸总含量可作为质量标志物(Q-markers)。系统聚类分析发现,4个等级的样品归为4个类别,相同等级归为同一类别的样品数占总样品数的80.8%,不同等级的样品分类明显;PLS-DA分析发现,不同等级的样品呈现出明显的组内聚集,组间离散现象。上述结果表明,"不同地域专家共识法"评定金银花的传统商品等级是可行的。中药材传统商品等级的评定,样品应有代表性,专家结论应有足够的共识性,等级确定应有权威性。传统商品等级作为临床经验的结晶,是能够反映中药材内在质量的,具有科学性。

关于《中国药典》2020年版穿心莲药材和饮片质量标准的修订建议

针对《中国药典》2015年版中穿心莲药材和饮片标准存在的问题和局限性,对其质量标准进行改进和完善,为《中国药典》2020年版穿心莲药材和饮片质量标准的修订提出建议。采用硅胶G薄层板,三氯甲烷-甲苯-甲醇(8∶1∶1)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,建立以穿心莲内酯和穿心莲对照药材为对照的薄层鉴别方法。该法重现性好,专属性强,灵敏度高,与原标准的薄层鉴别项比较,该法展开效果好,斑点清晰。结合前期研究,建立以穿心莲内酯为内参物,同步测定穿心莲内酯(S)、新穿心莲内酯(A)、14-去氧穿心莲内酯(B)和脱水穿心莲内酯(C)等4种二萜内酯含量的一测多评法(QAMS),确定相对校正因子分别为fS/A=1.12,fS/B=0.79,fS/C=0.63,相对保留时间分别为tA/S=1.95,tB/S=2.18,tC/S=2.25。根据46批药材和38批饮片中4种二萜内酯的测定结果,规定药材中4种二萜内酯总量不得少于1.5%,饮片中4种二萜内酯总量不得少于1.2%。与原标准的含量测定项比较,QAMS不仅可以降低检测成本,提高工作效率,而且可以更加全面而又客观的评价穿心莲药材和饮片的质量。二萜内酯是穿心莲公认的有效成分且在叶中的含量远高于茎,然而,当前市售饮片几乎均为茎,质量普遍较差,难以保障药效。因此,在饮片的检查项中新增含叶量,并规定不得少于25%。

吴茱萸UPLC指纹图谱的建立及质量评价

目的:建立吴茱萸超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱分析方法,对不同品种、不同产地吴茱萸药材的质量进行较全面的评价。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,检测波长300,215 nm,流速0.4 m L·min^(-1),柱温35℃。采用相似度评价、聚类分析及偏最小二乘法判别分析对37批样品的指纹图谱进行分析。结果:建立了吴茱萸药材的UPLC指纹图谱及共有模式,标定了34个共有峰,采用对照品比对,指认出17个共有峰。37批样品的相似度在0.703~0.973。不同来源的吴茱萸药材指纹图谱轮廓基本一致,化学成分的相对含量在较大范围内波动。聚类分析和偏最小二乘判别分析结果表明,化学成分的相对含量与药材品种、产地没有明显的相关性,而与药材的千粒重在一定程度上相关;吴茱萸次碱、吴茱萸碱、新绿原酸、绿原酸、吴茱萸卡品碱、柠檬苦素是差异较大的6个成分。结论:该方法简便、快速,可有效、全面地用于吴茱萸药材的质量评价;控制吴茱萸药材质量的关键是把握"近成熟"这一采收时间环节。

茶藨子叶状层菌中核苷类成分的UPLC-Q-TOF-MS定性分析和HPLC含量测定

茶藨子叶状层菌为锈革孔菌科真菌茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis寄生在忍冬科植物忍冬Lonicera japonica茎基部的干燥子实体,具有多方面的活性,但其药效物质基础迄今尚不完全明确,质量控制和评价鲜有报道。该文采用UPLC-Q-TOF-MS定性分析茶藨子叶状层菌中的核苷类成分,并建立HPLC同步测定10种核苷类成分的含量。在正离子模式下,采集一级和二级质谱数据,通过与对照品进行比对,并结合相关文献和ChemSpider,PubChem等化合物数据库,首次从茶藨子叶状层菌水提物中定性鉴别出18种核苷类成分。通过HPLC条件优化,确定以Welch Ultimate AQ C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长260 nm,柱温30℃。通过提取方法、提取溶剂和提取时间的考察,确定供试品溶液的制备方法为以水为溶媒冷浸提取18 h。在当前HPLC条件下,尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、肌苷、鸟苷、2′-脱氧肌苷、2′-脱氧鸟苷和胸苷等10种成分的分离度良好(R>1.5),分别在质量浓度0.24724.7、0.28328.3、0.27327.3、0.25625.6、0.25725.7、0.31831.8、0.24524.5、0.26726.7、0.25025.0、0.26726.7 mg·L^(-1)呈良好的线性关系(r>0.9999),平均回收率为95.78%104.5%,RSD为2.2%5.2%(n=6)。茶藨子叶状层菌不同样品中10种核苷类成分的含量差别较大,尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、肌苷、鸟苷、2′-脱氧肌苷、2′-脱氧鸟苷、胸苷和10种核苷总质量分数分别为0.0210.122、0.0040.029、0.0140.226、0.0090.442、0.0030.014、0.0020.146、0.0070.098、00.054、0.0050.069、0.0040.081、0.0721.28 mg·g^(-1),说明其内在质量存在较大差异,需要良好的质量控制才能保障其功效。该研究为茶藨子叶状层菌的药效物质发现、质量控制和评价提供科学依据。

对美国FDA最新版《工业界植物药研发指南》的评述

2016年12月美国FDA发布了《工业界植物药研发指南》最新定稿版,通过对美国FDA植物药指南新旧版本的对比发现,尽管FDA认同植物药传统应用经验的历史事实,并在早期临床研究中给予了"宽进"政策,但随着研发的深入,强调了全程质量控制、临床受试样品和原料与上市产品及其原料在质量和疗效上的一致性,保障终产品的"严出"。指南推荐了一批新的方法和思路,如从药材到成品质量控制的"证据链完整性法"、生物测定法、质量平衡法、多批次临床研究设计、剂量-响应效应等技术要求,以确保临床研究用原料、受试样品与拟上市用原料、成品的质量一致性,进而保障疗效的一致性;在监管上同时要求药材的GACP和中间体与成品的cGMP。

UHPLC-QTOF-MS法分析鉴定吴茱萸水提物在大鼠血浆、尿液和粪便中的原形成分及其代谢产物

采用UHPLC-QTOF-MS技术,对吴茱萸水提物的主要成分及给药后大鼠体内的原形成分及其代谢产物进行定性分析。通过分析各成分的保留时间、精确分子质量、一级、二级质谱信息并与相应的对照品比对,从吴茱萸水提物中鉴定了27个成分,其中25个成分经对照品确证;从灌胃给予吴茱萸水提物的大鼠血浆、尿液和粪便中鉴定、推测出16个原形成分和35个代谢产物,16个原形成分均经对照品确证。吴茱萸水提物的主要成分有酚酸、黄酮苷、柠檬苦素和生物碱。生物碱、黄酮和酚酸存在于血浆、尿液和粪便中,柠檬苦素主要存在于尿液和粪便中。这些成分在大鼠体内代谢的主要途径有羟基化、氢化、甲基化、硫酸化、葡糖醛酸化等。该研究基本明确了吴茱萸水提物中各类成分在大鼠体内的主要存在形式,为吴茱萸体内药效物质的阐明提供了参考。