基于网络药理学及动物实验探究安宫牛黄丸治疗缺血性脑卒中的作用

目的基于网络药理学及动物实验探究安宫牛黄丸对缺血性脑卒中的治疗作用。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台、中医药综合数据库、中国天然产物化学成分库及文献检索获取活性成分,SwissTargetPrediction数据库预测药物的作用靶点,GeneCards、PubMed-Gene数据库获取缺血性卒中相关靶点。药物与疾病靶点相交集后,导入STRING数据库进行蛋白互作关系分析,筛选关键作用靶点,DAVID数据库进行GO功能富集、KEGG通路富集分析,Schrodinger软件对活性分子与潜在关键靶点进行分子对接。采用大脑中动脉栓塞(MCAO)法构建大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,给予安宫牛黄丸干预5 d,对神经功能、脑梗死率和脑组织病理学改变进行评估,RT-qPCR、Western blot法验证安宫牛黄丸对脑组织中部分关键靶点的调控作用。结果筛选出16种活性成分及940个与缺血性卒中相关的靶点,并得到交集靶点318个。富集分析表明,安宫牛黄丸主要与MAPK、cAMP、PI3K/Akt、细胞凋亡等信号通路的调控相关。分子对接显示,安宫牛黄丸活性成分与核心靶点CDC42、SIRT1、PARP1和MAPK3均有较好的结合活性。动物实验显示,安宫牛黄丸能够降低MCAO大鼠脑梗死率,改善神经功能缺损和脑组织病理损伤状态,上调MAPK3、SIRT1表达,下调CDC42、PARP1表达。结论安宫牛黄丸对缺血性卒中的改善作用具有多成分、多靶点的特征,本研究为其临床应用提供了科学的实验依据。

基于蛋白质沉淀的药物靶点筛选方法的研究进展

药物靶点是体内与药物分子结合的生物大分子。因此药物靶点的系统鉴定对于充分认识药物作用机制、疗效以及可能的副作用至关重要;同时全面的靶点识别可以加速药物发现及候选药物筛选的进程。生物质谱具有采集速度快、分辨率和灵敏度高等特点,是蛋白质组深度鉴定和准确定量的关键工具;基于质谱的蛋白质组学技术有助于系统性鉴定与小分子药物结合的蛋白质,阐述蛋白质-药物相互作用,在药物靶点筛选领域大显身手。常用的先进行标记再结合亲和富集的药物靶点表征方法需要对药物分子化学衍生,这既耗时也可能会改变药物的亲和力,同时衍生基团产生的空间效应可能会阻断药物和靶点相互作用,加大了靶点鉴定的难度。因此,无需衍生的药物靶点鉴定方法受到广泛关注。蛋白质受到温度、pH、变性剂以及机械力等条件的影响会发生变性、展开和沉淀。小分子药物与蛋白质结合可能改变蛋白质折叠平衡,稳定靶蛋白的构象,与游离蛋白相比,更能抵抗不同条件诱导的蛋白质沉淀。基于以上原理,联合蛋白质组学和生物质谱技术,目前已经发展了多种基于蛋白质沉淀的药物靶点规模化鉴定方法,包括热蛋白质组分析方法、溶剂诱导蛋白质沉淀方法、机械应力诱导蛋白质沉淀方法、pH依赖性蛋白质沉淀方法等,用于蛋白质组范围内的药物靶点筛选。本综述介绍了该领域近十年报道的药物靶点发现和药物-蛋白质相互作用研究方法,总结了这些方法的特点及其在药物疗效评价、药物发现等方面的发展前景。

代谢综合征患者脏腑红外热成像特征研究

目的:应用红外热成像(IRTI)技术探究代谢综合征(MS)患者脏腑功能反射区红外热成像特征。方法:研究对象为2021年8月至2022年4月在中国中医科学院广安门医院南区内分泌门诊及病房就诊的MS患者和健康受试者,经严格筛查,符合纳入排除标准且实验室指标完整者共120例,其中MS组96例,健康对照组24名。分析受试者躯干部位感兴趣区域(ROI)体表平均温度。结果:MS组患者红外热图呈现明显凉偏离,且分布不均匀、不连续、不对称;与健康对照组比较,MS组青年患者胃脘、大腹、任脉、右腰、左腰及督脉等ROI体表平均温度降低(P<0.01或P<0.05),MS组中年患者ROI体表平均温度降低(P<0.01或P<0.05);不同年龄受试者ROI体表平均温度呈现随代谢异常指标增多而降低的趋势,大腹、右腰明显凉偏离;MS组11例患者ROI体表平均温度与代谢指标腰围负相关(P<0.01或P<0.05)。结论:腰围是MS重要特异指标;MS患者躯干部位脏腑功能反射区红外热图存在凉偏离的特征性表现,尤其在大腹及右腰,提示脾肾阳气不足,脏腑功能低下,代谢障碍是MS红外特征形成的重要原因。

虾青素抗炎及免疫调节作用的研究述评

虾青素(3,3′-二羟基-β,β′-胡萝卜素-4,4′-二酮)是一种叶黄素类胡萝卜素,作为一种营养补充剂和抗氧化剂,广泛存在于雨生红球藻、带状小球藻、绿球藻等植物中。虾青素可用于食品、饲料和保健品。根据现有文献,我们调研综述了虾青素在免疫调节和抗炎方面具有潜在的生物学活性。

毛蚶抗癌蛋白主要组分的分离纯化及作用研究

目的:对毛蚶抗癌蛋白(ASAP)进行了分离纯化,并研究分离后毛蚶抗癌蛋白主要组分的抗癌作用。方法:依次利用阴离子交换层析、疏水作用层析、凝胶过滤层析对ASAP进行分离;联合p53基因表达激活及CCK-8细胞活力测定检测分离组分的抗癌活性;CCK-8细胞活力测定法检测毛蚶抗癌蛋白主要组分对人结直肠癌Colo205、HT-29、人肺癌A549、人慢性髓性白血病K562细胞活力的影响;Annexin-V/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白:Mcl-1、Bcl-2、Bax、procaspase-3的表达情况。结果:从ASAP中分离得到的毛蚶抗癌活性蛋白主要组分C6在24~72 h内对Colo205、HT-29、A549、K562的细胞活力均有不同程度的抑制作用,其中对Colo205细胞的抑制作用最明显,作用72 h时IC50为5.7μg/mL;C6可以诱导Colo205细胞凋亡且呈一定剂量依赖性;C6可以抑制抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达,上调凋亡蛋白Bax的表达,引起凋亡蛋白caspase-3前体procaspase-3下降。结论:毛蚶抗癌蛋白主要组分C6对人多种癌细胞活力具有抑制作用,可诱导人结直肠癌Colo205细胞发生caspase通路依赖的细胞凋亡。

蛋白质修饰组学-中药作用机制研究的新途径

中医药作为我国宝贵的科学遗产与文化瑰宝,承载着中华民族数千年智慧的结晶,其深厚的医学理论和丰富的实践经验在我国卫生保健事业中占据着不可替代的核心地位。面对现代医学挑战与健康需求,深入探究中药作用机制显得尤为迫切和必要。蛋白质翻译后修饰(PTM),作为调控蛋白质功能复杂性和多样性的核心机制,是连接内外环境刺激与机体内在生理反应的关键桥梁。同时,不同类型PTM之间可相互作用形成复杂的调控网络,符合中药多成分、多靶点的作用特点。尽管蛋白质修饰组学作为探究PTM的有效工具,近些年已经被应用于一些中药作用机制研究,但总体而言,这一领域的研究在中药学领域尚处于初步发展阶段。为此,该文首先概述了PTM的基础理论和蛋白质修饰组学的基本研究流程,继而系统回顾了蛋白质修饰组学在中药作用机制研究领域的应用现状,并针对现存研究局限性进行了深入剖析。该文旨在探寻一种基于PTM视角解析中药作用机制的创新研究范式,为未来深化理解中药作用机理提供理论依据与实践指导。

关注口腔-肠道菌群互作:糖尿病冠心病机制研究的新视角

近年心血管代谢医学(Cardiometabolic Medicine)已成为备受关注的亚专业.糖尿病对心脏损伤的不良影响是由遗传易感性与环境因素共同决定的.其中,菌群是环境因素中与人体最密切的因素之一.口腔与胃肠黏膜物理上相连,也已有大量研究提出不同定植部位之间(如口腔和肠道)的菌群可相互影响,但遗憾的是多数为关联性研究[1].

基于代谢组学和生物信息学的西洋参三七丹参颗粒抗衰老作用及分子机制研究

该研究基于代谢组学、网络药理学和分子对接技术探讨西洋参三七丹参颗粒抗衰老的作用机制。采用腹腔注射D-半乳糖(D-gal)诱导衰老小鼠模型,将小鼠随机分为对照组(control组),模型组(model组),阳性药组(褪黑素组,MT组),西洋参三七丹参颗粒低、中、高剂量组(XSD-L、XSD-M、XSD-H组)。进行旷场实验,免疫荧光检测细胞周期阻滞蛋白(p16)和磷酸化组蛋白H2A变异体(phosphorylated histone family 2A variant,γH2AX)在脑组织中的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠脑组织中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平。对control组、model组、XSD-H组的小鼠血清进行代谢组学分析得到代谢过程及代谢物;通过网络药理学预测西洋参三七丹参颗粒有效化学成分和潜在靶点,构建“药物-有效化学成分-关键靶点”网络图,进行基因本体论(Gene Ontology,GO)分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析以及蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络构建,阐明西洋参三七丹参颗粒抗衰老的作用机制。结果表明,西洋参三七丹参颗粒能明显改善D-gal小鼠衰老程度,显著改善D-gal小鼠总运动距离和平均运动速度,减少休息时间;显著降低D-gal小鼠IL-6和IL-1β的蛋白水平;明显降低p16和γH2AX的表达;与model组相比,XSD-H组显著上调了66个差异代谢物(differential metabolites,DMs),下调了91个DMs;筛选出4条关键代谢途径(色氨酸代谢、甘油磷脂代谢、嘧啶代谢、赖氨酸降解)和16种潜在生物标志物(赖氨酸、色氨酸、吲哚乙醛、磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、3-羟基邻氨基苯甲酸、褪黑素等);网络药理学方法筛选出西洋参三七丹参颗粒的主要活性成分58个,关键靶点62个;GO功能富集分析发现与基因表达的正向调控、药物反应等;KEGG通路富集筛选到涉及糖尿病并发症相关的AGE-RAGE信号通路、缺氧诱导因子-1信号通路等;并通过PPI网络以及分子对接筛选出STAT3、MAPK1、MAPK14、EGFR、FOS、STAT1等6个潜在核心靶点。

秦皮对去卵巢所致大鼠骨质疏松症的治疗作用及机理探讨

目的:初步探讨秦皮治疗骨质疏松症的作用机理。方法:健康雌性SD大鼠40只按随机数字表法分为空白对照组、假手术组各10只、造模组20只,造模组大鼠行双侧卵巢切除术制作骨质疏松症模型,造模结束后再将造模组大鼠按随机数字表法分为模型组和秦皮组各10只,开始给予相应药物。给药3个月后取左侧胫骨检测骨组织形态计量学指标,取右侧胫骨检测大鼠胫骨骨髓中OPG和RANKL的蛋白表达。结果:模型组大鼠胫骨TBV%、胫骨骨髓中OPG蛋白表达显著低于假手术组,而RANKL蛋白表达及TRS%、TFS%、OSW和MAR均明显高于假手术组。与模型组比较,秦皮组大鼠胫骨TBV%、OPG蛋白表达明显增高,但仍显著低于假手术组;而RANKL蛋白表达、TRS%、TFS%、OSW和MAR均明显降低。结论:秦皮对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症具有一定的治疗作用,其作用途径是对OPG/RANKL通路进行调节,促进OPG蛋白表达而抑制RANKL蛋白表达,从而抑制过度增强的破骨细胞活性,防止骨量的快速丢失。

Metridia荧光素酶检测条件的优化

目的:探讨培养基p H、血清对Metridia荧光素酶(MLuc)检测的影响并尝试找到一种优化的检测条件。方法:构建表达MLuc的逆转录病毒载体,瞬时转染人宫颈癌细胞系He La,制备收获MLuc;利用化学发光仪检测不同条件下的培养基对MLuc发光性能的影响,并尝试通过不同缓冲液与试剂的组合代替培养基来获得最佳条件。结果:培养基p H变化导致MLuc发光值产生较大波动,血清的存在会导致检测背景;添加0.02%(V/V)NP-40的磷酸盐缓冲液(PBS)(p H=7.4)作为MLuc检测的缓冲体系代替培养基,其发光值大小相当,检测背景值由原来的600左右降低到20左右。结论:以添加0.02%NP-40的PBS作为MLuc检测的缓冲体系可消除培养基p H、血清的影响,使检测结果更加准确和灵敏。

基于肠道菌群探讨“脾肾相关”在骨质疏松症发生中的作用

骨质疏松症是一种以全身骨密度、骨质量降低以及骨组织微观结构破坏为特征的代谢性骨病,患者骨脆性增加且易发生骨折。该病属于中医学“骨痿”“骨痹”“骨枯”范畴,肾虚是其发病的根本原因,而脾虚是其发病的关键因素之一。“脾肾相关”理论是“五脏相关”学说的重要子系统之一,脾肾俱虚可共同导致骨质疏松症的发生,但其具体机制目前尚未明确。肠道菌群是影响多种疾病发生的重要环境因素之一,近年来研究表明脾肾虚亏可引起肠道菌群失调,而且肠道菌群改变与骨质疏松症的发生也有着密切关系。因此本文从肠道菌群的角度,探讨脾肾相关在骨质疏松症发生中的作用,提出肠道菌群可能是维系脾肾相关的重要纽带之一,以期为中医防治骨质疏松症提供参考。

质谱成像技术在冠心病研究中的应用进展

质谱成像(mass spectrometry imaging,MSI)是组织学背景下分子信息可视化的有力工具。作为一种无标记的多重成像技术,MSI能直接从组织切片同时获取100~1 000种生物分子成像记录[1],可用来研究代谢物、脂质、多糖、肽和蛋白质等,具备辅助临床组织表征的能力。

三种TRACP染色法检测CIA大鼠关节切片中破骨细胞的比较

破骨细胞属于组织特异性的多核巨噬细胞,来源于骨髓造血单核巨噬细胞系,在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)及其继发的骨质疏松症的发生、发展中起重要作用。抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)是破骨细胞分化成熟的标志物,也与破骨细胞骨吸收功能密切相关[1-2]。应用TRACP染色检测破骨细胞分化及观察破骨细胞活性是实验室常用技术之一,TRACP染色方法较多,多采用酸性磷酸酶试剂盒检测。

经典名方大秦艽汤的HPLC指纹图谱研究及多指标成分定量分析

目的:建立大秦艽汤(Daqinjiao Decoction,DQJD)HPLC指纹图谱及其9种成分的定量分析方法,为DQJD的质量控制标准的建立提供科学依据。方法:制备15批DQJD样品,以Venusil XBP C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,柱温30℃,进样体积5μL,检测波长237 nm,建立HPLC指纹图谱,采用“指纹图谱相似度评价系统软件(2012A版)”进行相似度分析,以马钱苷酸(loganic acid),龙胆苦苷(gentiopicroside)、芍药苷(paeoniflorin)、升麻素苷(cimicifugin)、阿魏酸(ferulic acid)、甘草苷(glycyrrhizin)、5-O-甲基维斯阿莱醇苷(5-O-methylvisalaitol glycoside)、黄芩苷(baicalin)、甘草酸铵(ammonium glycyrrhizinate)为指标性成分建立含量分析方法。结果:15批DQJD的指纹图谱相似度良好,确认了22个共有峰,9个指标成分分离度、精密度和重复性均良好,供试品溶液稳定性良好,9个指标成分具有良好的线性关系。结论:所建立的DQJD指纹图谱和含量测定方法简单可行、灵敏度高、重复性好,可用于DQJD的质量评价。

汉黄芩素减轻LPS诱导BV-2细胞炎症并保护SH-SY5Y细胞的机制

目的:探讨汉黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞条件培养基培养SH-SY5Y细胞的保护机制。方法:将BV-2细胞分为空白组、LPS组、汉黄芩素低、中、高浓度组(4、8、16μmol·L^(-1)),其中LPS组给予1 mg·L^(-1)的LPS,汉黄芩素组分别用相应浓度的汉黄芩素预处理4 h后,给予1 mg·L^(-1)的LPS并使用以上各组的条件培养基培养SH-SY5Y细胞。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒检测以上各组BV-2细胞的细胞活力;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组BV-2细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组织化学法(IHC)检测SH-SY5Y细胞的酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-Syn)的表达情况;免疫荧光法(IF)检测SH-SY5Y细胞核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白核转移和荧光表达强度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SH-SY5Y细胞Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/NF-κB通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组比较,LPS组BV-2细胞上清IL-6、TNF-α含量均显著升高(P<0.01);与LPS组比较,汉黄芩素低浓度组BV-2细胞上清IL-6含量降低(P<0.05),汉黄芩素中高浓度组IL-6和TNF-α含量均降低(P<0.05,P<0.01),其中汉黄芩素高浓度组IL-6和TNF-α含量降低最显著(P<0.01),干预效果最佳。与空白组比较,LPS组条件培养基培养的SH-SY5Y细胞α-Syn蛋白表达显著升高、TH蛋白表达显著降低(P<0.01);与LPS组比较,汉黄芩素中高浓度组α-Syn蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),汉黄芩素低、中、高浓度组TH蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,LPS组NF-κB p65蛋白逐渐向核内聚集、荧光表达强度显著增强(P<0.01);与LPS组比较,汉黄芩素各浓度组NF-κB p65蛋白逐渐向核外分散、荧光表达强度逐渐减弱,汉黄芩素高浓度组荧光强度显著减弱(P<0.01)。与空白组比较,LPS组TLR4、磷酸化(p)-NF-κB p65、MyD88蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与LPS组比较,汉黄芩素中浓度组TLR4、MyD88蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01);汉黄芩素高浓度组TLR4、p-NF-κB p65、MyD88蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:汉黄芩素可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制由LPS诱导的BV-2小胶质细胞炎症因子的释放,保护SH-SY5Y细胞,从而达到减轻炎症和神经保护作用。

基于单细胞测序技术分析安宫牛黄丸减轻创伤性颅脑损伤的分子机制

目的:基于单细胞测序技术揭示安宫牛黄丸(AGNH)改善创伤性颅脑损伤(TBI)的分子作用机制。方法:将75只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡拉西坦组(3.6 g·kg^(-1))、AGNH低、高剂量组(0.09、0.27 g·kg^(-1)),每组15只。除假手术组外,其余4组采用改良Feeney自由落体撞击法制备TBI模型,造模后立刻灌胃给药,24 h后进行改良神经功能缺损评分(mNSS),并分离脑组织,测定脑水肿程度。苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织皮层、CA1区、CA3区的损伤程度;免疫荧光(IF)染色观察损伤部位环氧合酶-2(COX-2)、干扰素调节因子1(IRF1)、Janus激酶2(JAK2)和细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)的表达情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定脑组织白细胞介素(IL)-6、IL-18、IL-1β、IL-17A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体含量。单细胞测序分析AGNH对各细胞群的调控情况,并对差异表达基因进行基因本体论(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,进而构建小胶质细胞差异表达基因网络,寻找关键靶点,并通过ELISA与IF进行验证。结果:与假手术组比较,模型组mNSS与脑含水量均显著增加(P<0.01),与模型组比较,AGNH低、高剂量组均可降低mNSS与脑含水量(P<0.05);HE染色结果表明,与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮层和海马部位的细胞丢失严重,细胞排列较为松散(P<0.01),与模型组比较,给药AGNH可明显提高大脑皮层及海马CA1和CA3区的神经元细胞密度,使排列更紧凑,同时改善细胞形态(P<0.05,P<0.01)。ELISA与IF染色结果表明,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织Caspase-1、IL-17A、TNF-α、NLRP3及COX-2水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,AGNH组各炎症因子水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。单细胞测序共鉴定到13个细胞亚群,其中小胶质细胞在神经免疫中发挥重要作用;对小胶质细胞差异表达基因的GO富集分析结果显示,AGNH改善TBI涉及细胞对炎症反应和TNF-α的反应等;KEGG富集到IL-17信号通路、TNF信号通路、Toll样受体信号通路等;网络分析结果显示,AGNH调控TBI的关键靶点可能为IL-6、IL-1β、JAK2、SOCS3、IRF1。IF与ELISA验证结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中IL-6、IL-1β含量升高,小胶质细胞中SOCS3表达减少,JAK2、IRF1的表达增加(P<0.01);与模型组比较,AGNH组大鼠脑组织中IL-6、IL-1β含量降低,小胶质细胞中SOCS3表达增加,JAK2、IRF1的表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论:AGNH可减轻TBI大鼠的脑水肿与脑损伤程度,减少炎症因子表达,抑制NLRP3及其下游Caspase-1的表达,可能通过作用于小胶质细胞中的IL-6、IL-1β、JAK2、IRF1、SOCS3等靶点发挥作用。

从阴火理论论治帕金森病

阴火在帕金森病的发生发展中有重要意义,阴火生于五脏,暗耗气血津液,不能奉养周身血脉筋骨以及头部清窍,致使筋脉失养、神明生变,从而出现运动迟缓、肢体僵硬、面具脸、睡眠及精神障碍等症状,并因风助火势,而有震颤麻痹、肢体抖动等表现。因为五脏不足而现相火、湿郁化火、心火、伏逆之火、风火等诸火皆为阴火之变。肝肾亏虚、脾胃虚弱、心肾不交以及肺主治节的功能失调等病机在帕金森病的产生中具有重要意义;风气内动、风助火势是阴火导致帕金森病的关键因素。临证时应从补肾养肝、培土荣木、交通心肾、调金安木等方面治疗帕金森病。

基于网络药理学探讨川芎清脑颗粒改善偏头痛作用机制及验证研究

本研究采用网络药理学分析与动物实验验证相整合的研究策略,探讨川芎清脑颗粒(Chuanxiong Qingnao Granules,CXQN)改善偏头痛(migraine headache,MH)的分子作用机制。动物实验过程均遵循中国中医科学院实验动物伦理委员会的规定。基于网络药理学,获取27个CXQN的活性成分及对应的940个作用靶点,交集得到99个CXQN治疗MH的共同靶点,并筛选出肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、IL-1β、脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)等关键靶点,富集分析表明CXQN治疗MH的靶点主要参与环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)等信号通路。进一步通过在硝酸甘油诱导的MH大鼠模型中验证发现,CXQN给药组可显著改善模型大鼠的行为学症状及调节血管活性物质水平,并显著降低TNF-α、IL-6、VEGFA、IL-1β和BDNF的基因和蛋白表达水平。本研究揭示了CXQN治疗MH的多成分、多靶点、多通路的作用特征,且阐明CXQN治疗MH潜在的作用机制,为其临床治疗MH疾病应用奠定理论基础和科学依据。

黄芩素抑制小胶质细胞活化及保护SH-SY5Y神经细胞的机制

目的:探讨黄芩素(BAI)对脂多糖(LPS)激活的BV-2细胞条件培养基下SH-SY5Y细胞损伤的干预作用及机制。方法:用LPS 1 mg·L^(-1)激活BV-2细胞建立LPS组条件培养基,同时设置空白组、BAI低、中、高浓度组(4、8、16μmol·L^(-1)),使用各组条件培养基培养SH-SY5Y细胞。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒测定干预后各组BV-2细胞的细胞活力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组BV-2细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;采用免疫组化(IHC)观察SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白(α-syn)、酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达情况,免疫荧光(IF)法观察SH-SY5Y细胞中核转录因子-κB p65蛋白(NF-κB p65,以下简称p65)核转移情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SH-SY5Y细胞Toll样受体4(TLR4)、p65、磷酸化(p)-p65、髓样分化因子88(My D88)蛋白表达情况。结果:与空白组比较,LPS组中BV-2细胞活力显著降低(P<0.01),细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著升高(P<0.01);与LPS组比较,BAI低、中、高浓度组细胞活力显著升高(P<0.01),细胞上清液中TNF-α均显著降低(P<0.01),BAI高浓度(16μmol·L^(-1))组细胞上清液中IL-6含量明显降低(P<0.05),BAI中、高浓度组细胞上清液中IL-1β含量显著降低(P<0.01)。条件培养基处理SH-SY5Y细胞的结果显示,与空白组比较,LPS组SH-SY5Y细胞中p65蛋白表达向核内聚集,TH蛋白表达显著下降(P<0.01),α-syn、TLR4、My D88、p-p65蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与LPS组比较,BAI低、中、高浓度组SH-SY5Y细胞中p65蛋白表达逐渐分散至细胞质中,TH蛋白表达均显著升高(P<0.01),α-syn蛋白表达均显著降低(P<0.01),BAI高浓度组TLR4、My D88、p-p65蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),BAI中浓度组p-p65和My D88蛋白表达均明显降低(P<0.05),BAI低浓度组My D88蛋白表达明显降低(P<0.05)。各组p65蛋白表达差异无统计学意义。结论:BAI能够抑制BV-2细胞激活,从而抑制LPS造成的炎症反应,进而进一步抑制炎症对SH-SY5Y细胞的损伤,其作用机制可能在于调节TLR4/My D88/NF-κB信号通路,减轻炎症反应,发挥神经保护作用。

我国枸杞的国际贸易情况及问题分析

枸杞是我国的名贵中药材,也是大宗的出口中药材,2008—2017年,我国枸杞主要以出口为主,伴有少量进口。10年间出口总量和出口金额分别为82 182. 08 t和69 662. 20万美元,年出口总量稳中有增。出口枸杞来自于31个省市(自治区),通过35个海关口岸流向全球105个国家和地区。亚洲和欧美为主要的出口地区,宁夏自治区是最主要的输出省,天津关口是枸杞最大的输出口岸。相较于出口量,进口几乎可以忽略不计,主要来自朝鲜,存在国货复进口的情况,绝大部分进口是通过吉林省长春海关进入国内市场。未来需要加大对枸杞基础研究的投入,加快标准化的进程,提高枸杞产品的科技含量和附加值,进一步提升枸杞产业的国际竞争力。