2008-2012年中国中医科学院西苑医院中标科研课题分析及建议

目的：通过分析中国中医科学院西苑医院（以下简称“西苑医院”）2008-2012年科研课题的中标情况，为医院科研管理提供合理化建议。方法应用Excel统计软件，采用规范研究法统计西苑医院2008-2012年5年间的科研课题中标情况。结果西苑医院各年度的科研课题中标数与经费资助金额整体呈现增长态势；中标课题数和对应的课题资助均以科技部课题和国家自然科学基金课题为主；中标课题主要集中在基础室、心血管科、脾胃病科及血液科；科研课题负责人年龄主要集中在46～50岁；科研负责人的职称普遍为副高级以上。结论基于近年中标课题分析，建议建立系统、动态的科研课题管理机制，注重青年科研人员的培养。

不同缺血时间对中国小型猪心肌缺血再灌注损伤的影响研究

目的探讨不同缺血时间对中国小型猪急性心肌缺血再灌注损伤的影响,为建立适合的小型猪心肌缺血再灌注模型提供依据。方法中国小型猪29只,随机分为假手术组(6只)、缺血30 min组(7只)、缺血60 min组(7只)及缺血90 min组(9只)。各组戊巴比妥钠麻醉后行左冠状动脉造影,后将球囊经导丝交换入冠脉左前降支中部,术中连续心电监护记录ST段改变情况、室颤及除颤次数,再灌注3 h后处死。于缺血前、再灌即刻、再灌后1 h、2 h及3 h采集超声心动图,描记心脏收缩功能左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,EF)及左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,FS);检测血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CKMB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。TTC/伊文思蓝双重染色观察心肌梗死面积,硫磺素S染色法观察再灌后无复流面积。结果缺血90 min组动物死亡率较缺血30 min组、缺血60 min组高;随缺血时间增长,室颤及除颤次数明显增加(P<0.05,P<0.01);缺血90 min组再灌注3 h时EF值、FS值较其他组明显降低(P<0.05,P<0.01);模型组动物在心电图缺血性改变、心肌梗死及无复流面积、心肌组织染色及血清CK-MB、LDH、SOD、MDA含量方面无显著性差异。结论心肌缺血90 min再灌注小型猪模型的恶性心律失常及死亡率高,缺血30 min再灌注3 h条件建立的模型能复制临床疾病的特征性病变且死亡率低,适合于发病机制及药物作用研究。

医学研究中动物实验样本量的确定方法

在开始人体临床药物试验之前,研究人员需要在动物实验中进行广泛的临床前研究,以初步明确药物的作用、毒性和药代动力学特征。在实验研究中,除了与研究设计有关的一般考虑因素外,动物样本量计算也是核心要素。目前研究人员在动物样本量的选择方面具有很大的随意性,不仅导致实验结果的可复制性和代表性降低,而且造成了大量资金的浪费。因此,本文将医学实验研究分为探索性研究和验证性研究,并且探讨了基于文献与经验的样本量确定法、精度分析确定法、两样本均数确定法、资源方程式确定法和KISS确定法,旨在为实验中样本量的选择提供计算方案,进而降低对动物伤害与提高实验的准确性。随着医学统计学与医学实验结合的发展和传播,动物实验样本量确定方面的研究将愈加完善,将为研究过程的严谨性及研究结论的可靠性提供坚定的理论基础和实验依据。

心肌成纤维细胞对心肌损伤后的修复和再生作用及中药调节

心肌细胞是一种高度分化的终末细胞,自我更新能力差,因而心梗发生后,坏死的心肌细胞不能得到有效的补充,梗死区域很快被纤维组织所取代,严重影响心功能。心肌细胞数量的减少和心脏结构完整性的破坏,造成了心肌梗死及心力衰竭等心血管疾病,持续性的危害人类生命健康。目前,冠心病的治疗已取得较大进步,针对心梗后的心肌修复常用治疗方案主要为干细胞移植、外泌体介导和微环境构建等3方面,但是均有不同程度的问题难以解决。心肌成纤维细胞在心脏细胞中占据大部分数量,成纤维细胞的分布特性及其在心肌梗死过程中的作用,使它成为心肌梗死后的重要效应细胞。因此,该文从心肌成纤维细胞的来源、分布、梗死后状态和成纤维细胞对心肌细胞的作用等方面作一综述,以期为成纤维细胞在心肌梗死后心肌细胞的修复和再生治疗方面提供新的治疗思路和方案。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路探索小鼠急性肺损伤动态时间模型的建立

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路,建立随时间变化的脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,观察不同时间点小鼠肺损伤情况,根据不同时间伤情的变化和焦亡通路相关蛋白的表达,综合筛选出最佳造模时间点,为后续实验奠定动物模型基础。方法 54只6~8周龄SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为9组,空白对照组(Con组)和造模时间组(1、3、6、12、18、24、48和72 h组),分别检测体重、肺组织大体、病理观察及半定量评分、肺指数、肺含水量及湿干重比;取肺泡灌洗液检测白细胞计数,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及BCA蛋白浓度;使用Western Blot检测肺组织中经典焦亡通路相关NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达。结果 根据体重统计,各组均有下降,24及48 h组下降最为明显;通过肺组织大体、病理观察及评分发现,24~72 h肺组织损伤严重,每组与Con组比较均有统计学意义;肺指数、肺含水量及湿干重比在24~72 h明显升高;肺泡灌洗液中白细胞从造模后6 h开始升高,48 h可达峰值,至72 h均维持上升状态;灌洗液中IL-18在24 h开始升高,72 h仍然持续升高;TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子在6 h时均保持最高水平状态,在48 h明显降低;灌洗液中蛋白浓度在24、48及72 h与Con组相比均有明显升高;通过Western Blot检测发现,ALI模型各个时间组焦亡通路蛋白NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1与GSDMD蛋白表达均有上调,24~72 h组的通路蛋白表达与Con组相比明显增强。结论综合分析不同时间组中各项实验指标、炎症因子及Western Blot中通路蛋白的表达,发现焦亡机制与ALI的发生与进展密切相关,并随时间迁移。从实验结果得知24~48 h肺损伤程度严重,肺损伤相关指标及通路蛋白具有研究意义,可作为造模时间参考。也为后续研究ALI的具体机制及干预靶点提供了模型参考与实验基础。

澳大利亚中药监管与审批现状及我国中药产品注册分析

中药在澳大利亚归属于补充药物范畴。《澳大利亚补充药品监管指南8.0》和《评册药物证据指南1.1》出台后,澳大利亚形成了完整的以风险管理为核心原则的风险评估机制,根据补充药品应用的风险程度划分为低风险、中等风险和高风险3类。根据审批途径和申请类别,按照国际协调人用药品技术要求理事会(ICH)的通用技术文件(CTD)的5个模块提交申请资料,包括药品质量报告、安全性的非临床研究报告、疗效的临床研究报告、处方信息等,并以列册药物(AUSTL)、评册药物[AUSTL(A)]和注册补充药物(AUSTR)3种途径申请审批上市。只有被列入澳大利亚治疗用品登记注册目录(ARTG)的治疗性产品才能在澳大利亚进行合法的上市销售。通过对澳大利亚补充药物监管现状的分析可以看到澳大利亚新药注册制度经过多年的发展已经比较完善,对中药产品的注册管理值得我们深入了解和借鉴。这对于开拓我国中药企业海外市场、提高中药的技术研发能力、扩大中医药的影响力都有参考意义。

冠状动脉微血管疾病气虚血瘀证大鼠模型的建立及评价

目的冠状动脉微血管疾病(coronary microvascular disease,CMVD)发病率逐年增高,中医认为CMVD属中医学“络脉”的范畴,气虚血瘀证是CMVD主要证型,然而目前尚无气虚血瘀证CMVD动物模型的报道,因此本研究探索建立冠状动脉微血管疾病气虚血瘀证大鼠模型并进行评价。方法雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、冠脉微血管疾病组和冠脉微血管疾病气虚血瘀证组,每组15只。冠脉微血管疾病气虚血瘀证组动物每天随机14~16 h睡眠剥夺,持续6周,复制气虚证大鼠模型;假手术组及冠脉微血管疾病组动物正常饲养6周。实验6周后,冠脉微血管疾病组和冠脉微血管疾病气虚血瘀证组大鼠麻醉后开胸,向左心室内注射栓塞微球(40~120μm),假手术组动物行开胸手术但不注射栓塞微球。术后7 d,各组测定相关检测指标。结果冠脉微血管疾病组与假手术组相比,左室射血分数、左室缩短率明显降低,肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)以及乳酸脱氢酶(LDH)活性明显增加。冠脉微血管疾病气虚血瘀证组与假手术组相比,心功能下降、心肌损伤标志物活性显著升高、血浆及全血粘度明显升高。结论睡眠剥夺复合心室内注射栓塞微球可成功建立冠脉微血管疾病气虚血瘀证大鼠模型,比较符合临床发病特征适合于发病与中药作用机制研究。

心肌细胞铁死亡的机制及中药的保护作用

铁死亡是一种新型的细胞程序性死亡方式,典型特征为铁超载和脂质过氧化。心血管疾病是多种因素所导致的心脏发生的缺血性或出血性疾病,主要包括心肌梗死、心力衰竭等。铁死亡参与心肌细胞的损伤过程,并在多种心血管疾病的病程中起着推动作用;其主要作用机制包括铁稳态的破坏、活性氧的产生、抗氧化体系的紊乱,线粒体膜损伤、内质网应激及抑癌基因p53、核因子E2相关因子2(Nrf2)途径等。心肌损伤是众多心病患者的死亡原因之一而中药单体或是复方都在治疗铁死亡导致的心肌细胞损伤中表现出了良好的效果,包括黄芩苷通过胞内磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)通路保护心肌缺血再灌注(I/R)大鼠的心脏微血管内皮细胞、龙牙楤木皂苷通过核受体亚家族3C组成员1/p53/溶质载体家族7成员11(NR3C1/p53/SLC7A11)通路抑制心肌细胞铁死亡、心阳片通过调节磷酸化混合谱系酶3/c-Jun氨基末端激酶/p53(MLK3/JNK/p53)信号通路改善氧化应激等。探索铁死亡的机制和挖掘相关中药在心肌细胞损伤后发挥的保护作用具有重要意义。该文对铁死亡的机制及其与心肌细胞的关系、通过铁死亡通路治疗心血管疾病的中药单体和复方进行了综述;重点介绍了中药治疗的通路和发挥的效果,以期为中药对心血管疾病的治疗提供参。

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱（DHC）对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞（CFs）增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖（25 mmol/L）培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加（P〈0.05,P〈0.01）,48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加（P〈0.01）,细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高（P〈0.01）;DHC干预后可显著抑制CFs增殖（P〈0.01）,降低S＋G2＋M期细胞百分率（P〈0.01）,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌（P〈0.05,P〈0.01）。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。

基于功能代谢学分析血液环境异常情况下血小板变化及中医药治疗现状

血液循环系统环境易受内外因素影响,引发缺氧、缺血或炎症等异常情况,导致血液循环障碍。血小板是由骨髓中巨核细胞细胞质脱落而成,在维持血管完整性和调节止血方面具有关键作用,是血液系统中的重要组成。血小板形态功能的正常是其进行代谢的基础,而正常的代谢是维持形态功能的必然要求,两者相辅相成。血液环境的改变会导致血小板的功能障碍和代谢紊乱,中医药对于血小板功能和代谢的异常变化均具有显著治疗作用,通过抑制血小板活化和聚集、降低血小板黏附性和影响血小板释放等途径,使异常状态的血小板回归正常,从而减轻患者症状、优化治疗效果和提高生活质量。文章以功能学和代谢学为切入点分析血液环境异常情况下血小板变化的机制,整理和阐述中医药治疗研究现状,以期为血小板研究和中医药抗血小板治疗提供理论基础和参考依据。

中药来源多肽类活性成分治疗缺血性心脑血管疾病的研究进展

缺血性心脑血管疾病包括缺血性心脏病和缺血性脑血管病,有着高发病率和高病死率,是威胁人类健康与生存的主要疾病之一。缺血性心脏病和缺血性脑血管病的共同病因是血管狭窄、粥样硬化及梗死造成的局部供血减少,而其复杂的病理过程涉及氧化应激、钙超载、炎症、凋亡、自噬等多种机制。因此相关药物的研发备受重视,其中蛋白类药物如重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)、尿激酶等作为主要溶栓用药,在临床药物治疗及介入治疗中展现了较好治疗效果和较好的社会经济效益。除了溶栓蛋白,多肽类药物因其生物活性强、靶向专一性、化学生物学多样性及毒副作用低等特点,也显示出独特的研发优势和潜力。中药具有多成分、多靶点治疗的特点,对病理机制复杂的缺血性心脑血管疾病同样展现出卓越的临床疗效,但目前对于相关的中药多肽类成分的研发尚在起步阶段。该文以作用机制与靶点为切入点,综述了近年多种中药来源的多肽类成分对缺血性心脑血管病活性的预防治疗活性,为中药多肽的深入研究提供支持,进一步为其临床开发与应用提供参考。

冠心病痰瘀互结证动物模型研究现状与展望

冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)是威胁人类健康的常见临床疾病,冠心病痰瘀互结证是冠心病的主要证候类型。文章通过归纳总结冠心病痰瘀互结证的临床研究及病证结合动物模型的研究概况,分析冠心病痰瘀互结证各动物模型的区别,并以冠心病痰瘀互结证小型猪模型为例简述其构建进程与拟临床研究思路。对冠心病病证结合动物模型研究的问题进行探讨,有利于冠心病痰瘀互结证病理变化多层次、多角度阐述,对临床前研究具有重要意义。笔者浅析冠心病痰瘀互结证动物模型研究现状,以期为冠心病动物模型研究提供新的研究思路。

脑梗死气虚血瘀证大鼠模型表征及病理生理变化研究

观察多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠模型表征及病理生理指标的变化。将大鼠随机分为4组（每组30只）：正常组、假手术组、模型组、益气活血方组。模型组和益气活血方组大鼠均采用水环境小平台法进行睡眠剥夺1周后行多发性脑梗死手术，术后继续睡眠剥夺4周；同时益气活血方组大鼠术后每天灌胃给药26g·kg^-1，连续4周。于术后48h,2周及4周每组随机选取lO只大鼠，检测反映大鼠表征及病理生理动态变化的指标。结果显示，正常组和假手术组大鼠一般状况良好，行为和脑组织形态结构正常，模型组大鼠毛发枯黄，精神萎靡，静卧懒动，便溏，行为出现障碍，脑组织形态结构出现明显的病理性改变，且随造模时间的延长情况愈加严重，益气活血方组大鼠一般状态、行为障碍及脑组织形态结构病变程度均较模型组明显减轻；模型组3个时间点体质量、负重力竭游泳时间、舌面图像色彩饱和度R，G，B值均减少，切变率5，60，150S^-1下的全血黏度均增加，脑皮层Na＋-K＋．ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性均降低，5-HT含量减少，血清TXB：含量增加，6-keto-PGFl。含量减少，与假手术组比较均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）；益气活血方组大鼠术后2周、4周上述指标的变化较模型组有明显改善（P〈0．05或P〈0．01）。以上结果表明，多发性脑梗死气虚血瘀证大鼠表征及病理生理指标变化明显异常，益气活血方对其有明显改善作用，说明该模型具有较好的稳定性和可靠性，模型演化的病理生理机制及生物学基础可能与能量代谢障碍、血管活性物质异常及神经递质变化等有关。

基于HPLC-Q-TOF-MS研究6种乌头生物碱类成分的裂解途径

目的研究6种乌头类生物碱(乌头碱、次乌头碱、中乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱)的质谱裂解途径。方法采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)对该类化合物进行分析。结果在正离子模式下,乌头类生物碱的主要裂解途径是连续丢失CH3OH与H2O。双酯型生物碱也可以在C-8位置断裂,失去CH3COOH分子形成明显的特征碎片离子,从而实现与单酯型生物碱的区分。结论此质谱裂解途径可为乌头类生物碱的结构鉴定提供依据,采用HPLC-Q-TOF-MS技术可以高效地分析中药中乌头类生物碱类化学成分,有利于化合物的分析和鉴定。

乳结消颗粒对肝郁气滞型乳腺增生模型大鼠的影响

目的观察乳结消颗粒对肝郁气滞型乳腺增生模型大鼠的药理作用及机制。方法采用慢性不可预知刺激+孤养复合前腋下注射苯甲酸雌二醇和黄体酮的方法,复制肝郁气滞证乳腺增生病大鼠模型。模型复制成功后,将大鼠随机分为7组(每组10只):正常对照组,模型组,乳结消颗粒大、中、小剂量组(12、6、3 g生药·kg^-1),乳疾灵颗粒组(8 g·kg^-1),三苯氧胺组(3.6 mg·kg^-1)。并按所述剂量灌胃给药,每日1次,连续给药30 d,正常对照组和模型组大鼠每日灌胃等体积蒸馏水(12 mL·kg^-1)。于模型复制前、模型复制30 d、给药15 d及给药30 d(实验结束),检测相关指标。结果乳结消颗粒明显减小模型大鼠乳头直径及乳腺体积(P <0.05,P <0.01),减轻乳腺质量(P <0.05,P <0.01),减少乳腺小叶数和小叶内腺泡数(P <0.05,P <0.01),减小腺泡腔直径和导管腔直径(P <0.05,P <0.01);显著降低血清雌二醇(E2)和催乳素(PRL)水平(P <0.05,P <0.01),升高血清超氧化物歧化酶(SOD)活性(P <0.05,P <0.01),减少血清丙二醛(MDA)含量(P <0.01);抑制子宫肿大和胸腺萎缩(P <0.05,P <0.01);显著降低雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、细胞增殖核抗原(ki67)的表达(P <0.05,P <0.01);此外,明显改善模型大鼠外观体征、行为活动及情绪变化,促进体质量增长(P <0.05),明显提高模型大鼠蔗糖水偏嗜度(P <0.05,P <0.01),增加开野实验的活动次数(P <0.05,P <0.01)。上述作用以乳结消颗粒大、中剂量为显著。结论乳结消颗粒具有改善模型大鼠肝郁气滞状态,调节性激素水平,减轻乳房肿大,减轻乳腺组织增生性病变等作用;其作用机制可能与调节内分泌,增强清除氧自由基的能力,抑制脂质过氧化,降低ER、PR、ki67高表达水平等有关,这为该药在临床上的应用提供了实验依据。

乳结消颗粒对家兔乳腺增生的影响

目的:观察乳结消颗粒对乳腺增生病家兔模型的药理作用。方法:通过给健康雌性未孕家兔臀部交替肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮,建立乳腺增生模型。模型建立成功后,将家兔随机分为7组(每组8只):正常对照组,模型组,乳结消高、中、低剂量(6、3、1.5g生药/kg)组,乳疾灵组(4g/kg),三苯氧胺组(1.8mg/kg),各组灌胃给药,每日1次,连续给药30d,正常对照组和模型组家兔每日灌胃等体积蒸馏水。于造模前、造模30d、给药15d及给药30d,采用卡尺测量乳头直径和高度,天平称量乳腺、子宫、脾脏及胸腺重量,容积法测量乳腺体积,ELISA法测定性激素水平,化学法测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA),乳腺组织进行病理形态观察等。结果:乳结消颗粒明显减少模型家兔乳头直径、高度及乳腺体积,减轻乳腺重量,减少乳腺小叶数和小叶内腺泡数,减小腺泡腔直径和导管腔直径;降低血清雌二醇(E2)水平,增加血清孕酮(P)含量;增加SOD活性;抑制子宫肿大和胸腺萎缩。结论:乳结消颗粒具有调节性激素水平,增强清除氧自由基的能力,减轻乳房肿大,减轻乳腺组织增生性病变等作用,这为临床应用该药治疗乳腺增生病提供了实验依据。

芪术颗粒对阿霉素肾病大鼠肝功能减退的影响

目的:观察芪术颗粒对阿霉素肾病大鼠肝功能的影响。方法:SD大鼠随机分为6组:空白组,模型组,泼尼松(10 mg·kg-1)组和芪术颗粒(按生药量计,5,10,20 g·kg-1)剂量组;除空白组外,其他各组采用阿霉素静脉注射的方法制备大鼠阿霉素肾病模型;连续给药4周,进行血清蛋白、血脂、肝、肾功能的检测以及HE染色病理观察和免疫组化分析肾脏纤维连接蛋白(FN)表达。结果:与空白组比较,模型组动物总胆固醇(TCH)和甘油三酯(TG)水平均明显升高(P<0.01),血清白蛋白以及肝、肾功能下降,肝、肾组织病理形态明显异常,肾脏FN表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,芪术颗粒可明显降低模型动物血清TCH和TG水平(P<0.05,P<0.01),提高血清白蛋白水平,改善肝、肾功能,减轻肝、肾的组织病理性损伤,同时降低肾脏FN表达。结论:芪术颗粒长期给药对阿霉素肾病大鼠肝功能具有明显的保护作用。

3种银杏内酯成分的质谱裂解途径研究

该文利用高分辨的四极杆串联飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)的高分辨率及高质量准确度特点,在负离子模式下,对3种银杏内酯(银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C)的质谱裂解规律进行研究。结果表明,3种银杏内酯有相似的裂解途径,包括4条共同的裂解途径和1个共同的特征性离子。在高质量区,三种银杏内酯的主要裂解途径是内酯环开环并连续丢失CO,CO2,以及母核不断失去H2O。在低质量区,碎片离子m/z 72. 993 6是3种银杏内酯共有的特征性碎片离子,推测可能是C环开裂形成的碎片离子。碎片离子m/z 141. 018 8,125. 023 8,113. 024 0,97. 029 1是银杏内酯B、银杏内酯C的共有的特征性碎片离子,推测可能是母核A环开环或连续碎裂形成的碎片离子。上述质谱裂解途径可为银杏内酯类化合物的结构鉴定提供依据。