大鼠原代肝细胞药物相互作用模型的建立

目的建立并考察适用于药物相互作用研究的体外大鼠原代肝细胞模型。方法用改良Seglen两步灌流法分离肝细胞,以高糖DMEM为基础培养基培养细胞。通过检测细胞上清液中白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)水平、用底物探针法检测大鼠原代肝细胞中5种细胞色素P450(rCYP450)和葡萄糖醛酸转移酶(rUGT)代谢活性,考察培养时长对肝细胞功能和代谢酶活性水平的影响。原代肝细胞与利福平(RIF)、奥美拉唑(OMP)、β-萘黄酮(BNF)、苯巴比妥钠(PB)和地塞米松(DMS)共培养60 h,通过底物探针法检测代谢物的变化,用实时荧光聚合酶链反应法检测各组细胞代谢酶mRNA的表达水平,筛选多种代谢酶的阳性诱导剂。结果改良后的分离方法可得到活率大于90%,能正常分泌ALB和BUN的原代肝细胞,培养至第9天仍可维持基本功能和正常形态。rCYP1A2、rCYP2B1和rCYP3A1随培养时长活性下降迅速,48和72 h下降至20.54%~23.15%和0~7.80%。rCYP2D2和rUGT酶活性下降较缓,48和72 h可维持在57.41%~76.77%和25.25%~35.24%。诱导剂筛选结果显示:人代谢酶hCYP1A2的诱导剂OMP不能诱导rCYP1A2;hCYP2C和hCYP3A4诱导剂RIF不能诱导rCYP2C11和rCYP3A1。不同代谢酶可被一种或多种诱导剂诱导,DMS显著诱导除rCYP2B1外的其他6种代谢酶。结论本实验建立的大鼠原代肝细胞模型适用于体外药物相互作用研究。人和大鼠对代谢酶诱导剂的反应存在种属差异,DMS可作为大鼠肝细胞多种代谢酶的通用阳性诱导剂用于体外药物代谢和相互作用研究。