胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对氯化钴(CoCl_2)诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的作用及机制。方法取对数生长期的PC12细胞,分别以10、20、40、80μmol/L的CoCl_2溶液和100、200、400μg/L的IGF-1溶液处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,得出CoCl_2和IGF-1最佳干预浓度。根据选定的实验条件,应用CoCl_2处理PC12细胞建立HIE细胞模型,实验分为对照组、CoCl_2处理组、IGF-1+CoCl_2处理组。分组处理24 h后采用CCK-8法检测细胞存活率;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白的表达水平。最后在上述实验的基础上,设CoCl_2处理组、CoCl_2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2-MeOE2)+CoCl_2组和CoCl_2+2-MeOE2+IGF-1组,Western blot观察IGF-1、2-MeOE2及两者共用对PC12细胞HIF-1α及Bax的表达水平的影响。结果 CCK-8检测结果显示,40μmol/L CoCl_2和200μg/L IGF-1为最佳干预浓度。利用以上浓度分组干预细胞24 h后,与CoCl_2组相比,IGF-1+CoCl_2处理组细胞存活率明显提升,TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3,HIF-1α表达下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。应用2-MeOE2对细胞进行预处理后,CoCl_2+2-MeOE2组与2-MeOE2+IFG-1组HIF-1α和Bax蛋白表达差异无统计学意义,但均较CoCl_2+IGF-1组明显下调(P<0.01)。结论 IGF-1可抑制CoCl_2诱导的PC12细胞凋亡,其保护作用可能与HIF-1α表达下调有关。

人脐带间充质干细胞源外泌体对氧糖剥夺复氧静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

目的探究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC)源外泌体对氧糖剥夺复氧人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)凋亡的抑制作用,阐明其可能的机制。方法培养HUCMSC,将收集的细胞上清液使用超速离心法提取HUCMSC分泌的外泌体(HUCMSC-exosomes,HUCMSC-EXO)并对其进行鉴定,将HUVEC随机分为正常对照组、模型组(氧糖剥夺/复氧组)和分别添加不同浓度的HUCMSC-EXO(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml)处理组(在模型组的基础上加入HUCMSC-EXO)。倒置相差显微镜形态学观察各组HUVEC细胞的表观变化,使用CCK8试剂测算各组HUVEC增殖抑制率,Western blot检测相关凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达水平。另设模型组、HUCMSC-EXO+模型组、抑制剂+模型组和HUCMSC-EXO+抑制剂+模型组,Western blot观察HUCMSC-EXO、抑制剂及两者共用对HUVEC细胞HIF-1α及Bax的表达水平的影响。结果成功提取和鉴定HUCMSC-EXO,在倒置相差显微镜下,与正常对照组比较,模型组和不同浓度HUCMSC-EXO处理组的HUVEC体积缩小,变圆,连接疏散,生长状态较差;CCK8检测,HUCMSC-EXO处理组较模型组的细胞活力显著上升,差异有统计学意义(t=9.23,P<0.05),并与剂量呈正相关。Western blot检测,与对照组比较,模型组HUVEC的Caspase-3[(0.296±0.038),(0.879±0.088);t=14.92,P<0.05]、Bax[(0.234±0.034),(0.762±0.084);t=14.36,P<0.05]表达水平上调,Bcl-2的表达水平下调[(0.863±0.103),(0.387±0.059);t=9.85,P<0.05],均差异有统计学意义;与模型组比较,HUCMSC-EXO处理组HUVEC的Caspase-3(0.586±0.075)、Bax(0.311±0.055)水平下调(t=6.24,11.01,均P<0.05),Bcl-2(0.665±0.071)水平上调,均差异有统计学意义(t=7.45,P<0.05)。抑制剂干预实验显示,与HUCMSC-EXO+抑制剂+模型组比较,抑制剂+模型组HIF-1α蛋白[(0.348±0.055),(0.388±0.077);t=1.04,P>0.05]和Bax蛋白[(0.363±0.069),(0.370±0.064);t=0.18,P>0.05]表达差异无统计学意义(均P>0.05),但均较模型组[HIF-1α蛋白(0.919±0.064),Bax蛋白(0.902±0.071)]明显下调,差异有统计学意义(t=13.03,13.56,均P<0.05)。结论HUCMSC-EXO对HUVEC的氧糖剥夺/复氧模型具有保护作用,其机制可能与下调HIF-1α有关。