血小板微囊泡对人微血管内皮细胞功能的影响

目的探讨血小板微囊泡(platelet microvesicles,PMVs)对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMECs)功能的影响。方法取柠檬酸钠抗凝的健康人全血分离血小板,采用二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)激活血小板产生PMVs,然后以不同浓度(10、20、50μg/mL)的PMVs作用于HMECs,并设立台式液作为空白对照组(control,Con组)和不含PMVs的上清组(supernatants,Sup组)。ELISA检测HMECs培养上清中血栓素A2(thromboxane A2,TXA2)和前列腺素I2(prostaglandin I2,PGI2)的稳定代谢产物TXB2和6-keto-PGF1α、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和E-选择素(E-selectin)的水平。Western blot检测HMECs中内皮素-1(endothelin-1,ET-1)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的磷酸化水平。荧光探针检测HMECs中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。采用流式细胞仪定量检测HMECs培养上清中内皮微囊泡(endothelial microvesicles,EMVs)的含量。结果与Con组和Sup组比较,PMVs可使HMECs培养上清TXB2的水平升高(P<0.05),6-keto-PGF1α的水平降低(P<0.05),均呈时间和剂量依赖性;PMVs可使HMECs中eNOS的磷酸化水平和NO含量显著下降,ET-1水平升高;经PMVs作用后,HMECs培养上清中ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达水平亦显著升高(P<0.05)。与Con组和Sup组比较,50μg/mL PMVs作用于HMECs 24 h后,培养上清中EMVs的水平显著增加(P<0.05)。结论PMVs可导致微血管内皮细胞的功能紊乱和损伤。这可能是血小板参与微循环功能障碍发生的重要机制之一。

新冠疫情背景下平原部队官兵高原驻训的健康教育需求调查

目的了解新冠疫情背景下平原进驻高原地区驻训官兵对卫生健康知识的掌握情况及需求,帮助开展针对性的健康教育活动。方法采用整群抽样的方法,对参加高原驻训任务的1700名某平原部队官兵,采用自制《高原驻训官兵健康教育需求调查问卷》进行健康教育需求调查。结果1621名官兵完成有效调查,有效回收率95.4%。。官兵对卫生知识掌握情况总体较好,尤其是新冠肺炎防治、高原训练伤防治以及心理基本常识等内容。在新冠疫情大流行背景下,官兵对新冠疫情防控、训练伤防治及野外饮食饮水卫生等健康知识需求最为迫切。官兵最喜爱的获取健康知识的方式为网络平台、电视、报刊杂志及录像和健康知识讲座。结论在新冠疫情背景下,对平原进驻高原驻训部队采取官兵喜闻乐见的方式加强训练伤防治、疫情防控、野外饮食饮水安全、战伤救护等卫生知识的教育培训,对减少官兵非战伤减员,提高部队战斗力大有裨益。

血小板微粒对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及稳定性的影响

目的探讨C57BL/6小鼠来源血小板微粒(platelet microparticles,PMPs)对载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块形成及稳定性的影响。方法选取8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠40只,采用高脂饲料饲养4周后,按随机数字表分为4组(每组10只),分别给予PBS(PBS组)、不含PMPs的上清液(supernatants,SUP组)、低剂量1×10~7个PMPs (low-dose PMPs,LDP组)、高剂量3×10~7个PMPs(high-dose PMPs,HDP组),均由尾静脉注射,每周1次,共8周。实验结束时,检测小鼠血常规、血脂、肝肾功能和血清炎症因子(CRP、IL-1β、TNF-α)水平,并留取ApoE^(-/-)小鼠主动脉和头臂干动脉用于AS方面的病理检测,包括油红O染色、HE染色、Masson染色及免疫组化检测(CD68、MMP-9、α-SMA),对AS斑块的形成及稳定性进行评估。结果 4组小鼠体质量差异无统计学意义,血常规(WBC、RBC、PLT、HGB)、血脂(TG、TCH、LDL、HDL)、肝功(ALT、AST)、肾功能(UN、Cr)等指标差异均无统计学意义。LDP组和HDP组的血清CRP、IL-1β、TNF-α水平显著高于PBS组或SUP组(P<0.05)。LDP组和HDP组主动脉AS斑块的总面积显著高于PBS组或SUP组(P<0.05)。与PBS组相比较,其他3组的斑块内脂质核心占斑块总面积的比例均显著增加(P<0.05);斑块部位的胶原含量和平滑肌细胞在HDP组均显著低于PBS组(P<0.05),而巨噬细胞则显著增加(P<0.05)。结论 PMPs可促进高脂饲养ApoE^(-/-)小鼠AS斑块的形成以及斑块局部的巨噬细胞浸润和炎症反应,减少其中胶原和平滑肌细胞的含量,从而进一步降低斑块的稳定性。

实时三维超声联合斑点追踪技术评价终末期慢性肾脏病患者右室收缩功能

目的应用实时三维超声联合三维斑点追踪技术评估左室射血分数(LVEF)保留的终末期慢性肾脏病(ESRD)患者的右室收缩功能。方法选取我院血液净化中心规律血液透析的LVEF保留的ESRD患者43例,根据是否合并肺动脉高压分为ESRD组23例和ESRD合并肺动脉高压组20例;另选25例健康志愿者为对照组。应用常规超声测量各组右房横径(RAD)、右室基底部横径(RVD1)、右室中部横径(RVD2)、右室长径(RVD3)、主肺动脉内径(PAD)、LVEF及右室心肌做功指数(RIMP);实时三维超声测量右室舒张末容积(EDV)、右室收缩末容积(ESV)、每搏输出量(SV)、右室每分输出量(RVCO)、右室射血分数(3DRVEF)、面积变化分数(FAC)及三尖瓣环收缩期位移(TAPSE);三维斑点追踪技术获取右室游离壁整体纵向应变(3DGLS);比较各组上述各参数差异;分析3DGLS与右室收缩功能参数的相关性。结果与对照组比较,ESRD组及ESRD合并肺动脉高压组EDV、ESV、RVCO、RIMP均增大,3DRVEF、TAPSE、FAC均减低(均P<0.05);ESRD组RVD1、RVD2、RVD3差异均无统计学意义;ESRD合并肺动脉高压组RAD、RVD1、RVD2、PAD、SV均增大(均P<0.05)。与ESRD组比较,ESRD合并肺动脉高压组EDV、ESV、RVCO均增大,3DRVEF、TAPSE、FAC均减低(均P<0.05)。3DGLS绝对值在对照组、ESRD组、ESRD合并肺动脉高压组依次显著减低(P<0.01)。相关性分析显示,3DGLS的绝对值与3DRVEF、TAPSE、FAC均呈正相关(r=0.77、0.62、0.59,均P<0.01),与RIMP呈负相关(r=-0.55,P<0.01)。结论实时三维超声联合三维斑点追踪技术可定量评估LVEF保留的ESRD患者右室收缩功能。

抑制自噬对缺氧复氧后H9c2心肌细胞损伤及线粒体Cx43变化的影响

目的研究缺氧复氧(HR)后,抑制自噬对H9c2心肌细胞损伤的影响,同时观察线粒体Cx43含量及磷酸化水平的变化,探讨抑制自噬对HR心肌损伤的影响及可能机制。方法通过缺氧12h、复氧12h建立H9c2心肌细胞HR模型。随机将H9c2心肌细胞分为5组:对照组、HR组、格尔德霉素(GA)组、3甲基腺嘌呤(3-MA)组、GA+3-MA组。分别测定各组细胞活力、线粒体膜电位以及人卷曲螺旋-肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、线粒体Cx43、线粒体磷酸化Cx43蛋白水平和自噬体含量。结果与对照组比较,HR组漂浮的死亡细胞增多、存活心肌细胞密度减少,细胞存活率和活力、线粒体膜电位下降,乳酸脱氢酶水平升高(P<0.05)。与HR组比较,GA组、3-MA组和GA+3-MA组线粒体膜电位、细胞活力均下降(P<0.05);GA+3-MA组线粒体膜电位、细胞活力均分别低于GA组和3-MA组(P<0.05)。与对照组相比,HR组自噬体增多、自噬相关蛋白Beclin-1水平和LC3BⅡ/LC3BⅠ均升高(P<0.05);与HR组比较,GA组、3-MA组和GA+3-MA组自噬体减少、Beclin-1水平GA、LC3BⅡ/LC3BⅠ均下降(P<0.05);GA+3-MA组Beclin-1水平、LC3BⅡ/LC3BⅠ均分别低于GA组和3-MA组(P<0.05)。与对照组比较,HR组线粒体Cx43及磷酸化Cx43蛋白均下降(P<0.05);GA组和GA+3-MA组线粒体Cx43蛋白低于HR组(P<0.05);GA组、3-MA组和GA+3-MA组线粒体磷酸化Cx43蛋白低于HR组(P<0.05);GA+3-MA组线粒体磷酸化Cx43蛋白分别低于GA组和3-MA组(0.18±0.04 vs 0.27±0.06,0.33±0.05,P<0.05)。结论 HR导致线粒体Cx43含量及磷酸化水平下降,心肌细胞出现缺血再灌注损伤,同时自噬激活。而抑制自噬,使HR后线粒体Cx43脱磷酸化加剧,进一步加重HR心肌细胞损伤。

缺氧-复氧对H9c2心肌细胞自噬和线粒体缝隙连接蛋白43的影响及其相互作用

目的探究心肌细胞系H9c2在缺氧-复氧(H/R)后自噬与线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)的变化,以及两者间的相互关系。方法通过缺氧处理12 h、复氧处理12 h建立H9c2细胞H/R模型。将H9c2细胞随机分为5组:对照组、H/R组、格尔德霉素(GA)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、GA+3-MA组。应用线粒体膜电位检测试剂盒检测各组线粒体膜电位,细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测各组细胞活力,采用Western印迹法检测各组Beclin-1、LC3B、线粒体Cx43和磷酸化Cx43(p-Cx43)的蛋白质水平;应用电子显微镜观察各组自噬体情况。结果 H/R组的细胞活力显著低于对照组(P<0.01),乳酸脱氢酶(LDH)水平显著高于对照组(P<0.01),H-R模型建立成功。H/R组的线粒体膜电位、细胞活力均显著低于对照组(P值均<0.05);GA组、3-MA组和GA+3-MA组的线粒体膜电位、细胞活力为均显著低于H/R组(P值均<0.05);GA+3-MA组线粒体膜电位、细胞活力均分别显著低于GA组和3-MA组(P值均<0.05)。H/R组自噬相关蛋白质Beclin-1水平和LC3BⅡ/LC3BⅠ分别为0.89±0.05和4.37±0.50,均显著高于对照组的0.26±0.03和0.77±0.09(P值均<0.05);与H/R组相比,GA组、3-MA组和GA+3-MA组的Beclin-1水平(0.75±0.06、0.47±0.03、0.31±0.02)、LC3BⅡ/LC3BⅠ(3.29±0.18、1.37±0.09、0.85±0.14)均显著降低(P值均<0.05);GA+3-MA组的Beclin-1水平、LC3BⅡ/LC3BⅠ又显著低于GA组和3-MA组(P值均<0.05)。H/R组线粒体Cx43和p-Cx43蛋白质水平分别为0.75±0.03和0.41±0.03,均显著低于对照组的0.86±0.02和0.58±0.01(P值均<0.05);GA组、3-MA组和GA+3-MA组的线粒体p-Cx43蛋白质水平分别为0.27±0.06、0.33±0.05、0.18±0.04,均显著低于H/R组(P值均<0.05);GA组和GA+3-MA组的线粒体Cx43蛋白质水平(0.62±0.09、0.59±0.07)均显著低于H/R组(P值均<0.05);GA+3-MA组的线粒体p-Cx43蛋白质水平显著低于GA组和3-MA组(P值均<0.05)。结论 H/R引起的线粒体Cx43含量下降和脱磷酸化增加可能是缺血-再灌注损伤发生的重要机制。自噬参与线粒体Cx43磷酸化状态的维持,线粒体Cx43特别是p-Cx43也参与了自噬的激活过程,对H/R心肌起保护作用。

益气复脉注射液联合倍他乐克对肥厚性心肌病的影响

目的探究益气复脉注射液联合倍他乐克治疗肥厚性心肌病的临床疗效及安全性。方法将85例肥厚性心肌病患者分为2组,对照组患者(42例)采取倍他乐克治疗,观察组患者(43例)采取益气复脉注射液联合倍他乐克治疗,比较2组患者的治疗效果、治疗前后患者自觉症状积分、心功能指标、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平、6 min步行距离、生活质量(SF-36)评分及不良反应发生情况。结果观察组治疗总有效率(90.70%)高于对照组(71.43%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,2组患者自觉症状积分、左心室舒张末期压力(LVEDP)、左室流出道压力阶差(LVOTG)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)等心功能指标、NT-proBNP水平、6 min步行距离和SF-36评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后2组患者以上各指标均改善,且观察组患者治疗后以上各指标均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗过程中出现1例恶心,1例头痛,对照组出现1例呕吐,不良反应发生率分别为4.65%、2.62%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气复脉注射液联合倍他乐克治疗肥厚性心肌病临床疗效显著,且不良反应发生率低。