结直肠癌化疗联合自体多种免疫细胞治疗疗效观察

目的比较结直肠癌患者自体多种免疫细胞联合化疗与单纯化疗后细胞免疫功能变化和生存期差异。方法83例结直肠癌患者分为化疗组43例，化疗联合自身多种免疫细胞治疗组（联合组）40例；用血细胞分离机采集患者自身外周血单个核细胞（PBMC），将PBMC按常规方法分别诱导培养CD3AK细胞、CIK细胞、树突状细胞（DC）、7gT细胞和NK细胞；用流式细胞仪检测治疗前后患者外周血的CD3（＋）、CD4（＋）、CD8（＋）、CD19（＋）、CD16（＋）CD56（＋）、CD4／CD8和3,gT细胞比值及PBMC中穿孑L素、颗粒酶B和CD107a阳性表达率。2组患者化疗方案都采用草酸铂＋亚叶酸钙＋5-氟脲嘧啶静脉输注；联合组在化疗基础上接受免疫细胞治疗。结果联合组治疗后的免疫细胞亚群比值和绝对值显著高于化疗组。联合组与化疗组Karnofsky评分差异有统计学意义。联合组患者治疗后PBMC的穿孔素、颗粒酶B及CDl07a均高于治疗前，并且治疗后这3种指标数值均皿著高于化疗组。联合组患者1午、2年和5年生存率分别为70．o％、20．0％和10．0％，高于化疗组（分别为23．2％、7．0％和4．6％）；其中Ⅱ期、Ⅲ期患者的1年、2年和5年生存率及Ⅳ期患者的1午生存率2组间比较差异有统计学意义，而Ⅳ期患者的2年、5年生存率2组间比较差异无统计学意义。结论化疗联合自身综合性免疫细胞治疗进展期结直肠癌能提高患者的免疫功能，延长生存期。

骨髓间充质干细胞接种小鼠肝癌组织对小鼠生存期的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（MSC）接种于原发性肝癌Heps荷瘤小鼠对其生存期的影响。方法体外贴壁培养法制备昆明小鼠骨髓MSC，分离培养传代扩增，流式细胞仪鉴定MSC表型。4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（4’，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）对MSC进行标记备用。随机取54只8周龄昆明小鼠，建立Heps肝癌移植瘤模型。移植瘤长径达0．5～0．8cm时，随机分为MSC组、DAPI标记MSC组（DAPI组）、生理盐水（NS）对照组（NS对照组），每组18只。MSC组及DAPI组分别在小鼠Heps肝癌移植瘤内注射2×10^6 MSC及DAPI标记的MSC，NS对照组注射同体积的NS。每组各有6只荷瘤小鼠用于观察生存期。①自注射日起，隔日测量各组小鼠肿瘤长、短径，计算注射后3、7、14及28天的肿瘤体积；②记录注射当天开始至小鼠死亡的时间，计算各组小鼠平均生存时间；③于注射后3、7、14及28天，各组分批处死3只小鼠。取肿瘤组织，石蜡包埋并切片，苏木精-伊红染色后光学显微镜观察。结果①体外贴壁法成功制备MSC，流式细胞仪对第3代MSC进行鉴定，高表达CD29（97．84％），低表达CD34（5．56％）、CIM5（7．66％）。②小鼠Heps肝癌腹水瘤细胞成功制备小鼠Heps肝癌移植瘤模型，成瘤率100％。③注射MSC后1周，MSC组及DAPI组肿瘤体积增大明显，与NS对照组差异有显著性（P〈0．05）。④MSC组平均生存期为45天（95％可信区间：33～56天），DAPI组平均生存期为34天（95％可信区间：31～37天），NS对照组平均生存期为33天（95％可信区间：28～37天）；MSC组与NS对照组差异有显著性（P〈0．05），其余组间生存期差异无显著性（P〉0．05）。⑤各组小鼠肿瘤苏木精-伊红染色：28天时，MSC组及DAPI组肿瘤组织坏死明显，范围较NS对照组更大。结论MSC可在原发性肝癌Heps荷瘤小鼠肿瘤组织内定植，MSC接种后1周内肿瘤增长迅速，小鼠生存期延长。

PACAP对创伤性脑损伤大鼠CD4＋／CD8＋T细胞水平的影响

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽（pituitaryadenylatecyclaseactivitingpolypeptide，PACAP）对大鼠刨伤性脑损伤（traumaticbraininjury，TBI）的影响及对血液和脾脏CD4＋、CD8＋T细胞数量的影响。方法所有实验均在在江苏省麻醉学重点实验室内完成。将雄性sD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组（n=6）、生理盐水＋TBI组（rt=6）、PACAP＋TBI组（n=6），采用大鼠创伤性脑损伤模型，于创伤前20min侧脑室微量注射PACAP1μg／5μl，创伤后24h取材，采用HE染色方法观察脑组织损伤程度，采用流式细胞术检测各组大鼠血液及脾脏中CD4＋、CD8＋T细胞的数量。实验结果采用完全随机设计方差分析法。结果与假手术组比较，TBI大鼠创伤周围皮层神经元水肿、坏死，海马神经元排列紊乱，血液和脾脏CD4＋T细胞的数量减少（P=0．000，P=0．005），CD8＋T细胞的数量增加（P=0．01）；侧脑室内微量注射PACAP后，能明显减轻TBI大鼠皮层和海马的神经元损伤，增加血液和脾脏CD4＋T细胞的数量（P=0．019，P=0．839），降低CD8＋T细胞的数量。结论侧脑室微量注射PACAP能减轻大鼠创伤性脑损伤，可能与其对T细胞影响有关。