含Apoptin基因重组腺病毒的构建及鉴定

目的:构建携凋亡素(Apoptin)基因重组腺病毒,为进一步研究Apoptin基因抗肿瘤作用分子机制建立基础.方法:利用BamHⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pVAX1-Apoptin,获得Apoptin片段并连接入pacAd5 CMV K-N pA,构建含Apoptin基因的穿梭质粒pacAd5-Apoptin.利用PacⅠ单酶切对pacAd5-Apoptin和腺病毒基因组质粒(pAd5)进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞,分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定,并测定所获得重组病毒的滴度.结果:所构建重组腺病毒中的Apoptin基因得到了正确转录,表达产物的相对分子质量约为13kDa,与CVA阳性对照一致;所获得重组腺病毒可有效表达Apoptin蛋白,该蛋白与CAV阳性血清具有反应原性,重组病毒滴度为1011PFU/L.结论:成功构建含Apoptin基因的重组腺病毒,所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求.

口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗免疫原性研究

目的对本室已经筛选到的共表达O型、A型和Asia1型FMDV复合多表位免疫原基因OAAT与猪IL-18基因的重组鸡痘病毒vUTA-IL18-OAAT的免疫原性进行研究。方法分别用重组病毒毒vUTA-IL18-OAAT、FPV疫苗株和PBS溶液进行小鼠免免疫,每间隔14d加强免疫1次,第3次免疫后10d杀鼠取血清和脾淋巴细胞检测抗体、T淋巴细胞亚群的数量及CTL活性。结果小鼠免疫试验结果表明,与阴性对照组相比,vUTA-IL18-OAAT免疫组的T细胞亚类数量、CTL杀伤活性,抗O型、A型和Asia1型FMDV的特异性抗体水平差异显著。结论vUTA-IL18-OAAT能有效激发机体的细胞和体液免疫反应。