白喉毒素-(Gly_4 Ser)_2-α促黑素重组蛋白的研究

白喉毒素(DT)是由白喉棒状杆菌所产生的分子量为58 kD的外毒素,它在胰蛋白酶的作用下可降解为A和B两个片段, B片段能与敏感宿主细胞的特异受体结合并能将A片段转位到胞浆,A片段具有核糖体依赖的酶活性,它通过灭活真核细胞的肽链延长因子Ⅱ来阻断细胞蛋白合成.

布鲁菌分子分型方法应用研究进展

布鲁菌属细菌是布病的病原菌。当前,用于布鲁菌属细菌分型的方法有多种,而布鲁菌分子分型方法在布病的分子流行病学调查、病原菌的快速分型鉴定、病原菌的溯源分析和菌株之间差异关系的分析过程中被广泛应用并具有十分重要的作用。本文就常用的布鲁菌的核酸探针技术(DNA probes)、聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)、16SrDNA鉴定、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、单核苷酸多态性分析(SNP)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)、多位点串联重复序列分析(VNTR/MLVA)等分子分型方法的应用研究进展予以综述。

小反刍兽疫研究进展

小反刍兽疫病毒(PPRV)是副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)的成员,主要感染山羊、绵羊等小反刍动物,引起一种高度接触性病毒性传染病。小反刍兽疫为一种重大的外来性疾病,2007年在中国西藏自治区日土县首次发生。自2013年末以来中国新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙、湖南、辽宁等地频繁暴发小反兽疫疫情,给中国的畜牧业带来了巨大的损失,引起极大的重视。为更好的分析小反刍兽疫的病原特性及采取有效的防控措施,文章对小反刍兽疫的病原学及疫苗研究进展进行论述。

微血管内皮细胞功能的研究进展

文章回顾了微血管内皮细胞功能的研究概况。微血管内皮细胞是位于循环血液与组织液之间的单层扁平上皮细胞,不但构成了微血管通透性的主要物理屏障,保证微血管内、外正常的物质交换,而且是一种多功能的分泌细胞,通过合成并释放多种舒张因子和收缩因子以维持正常的血管紧张度;通过合成、释放多种促凝血因子和抗凝血因子,维持血液的正常状态和动态平衡。还通过其屏障和分泌功能,影响着炎症反应的发生、发展,并通过多种途径参与调节机体的免疫应答。微血管内皮细胞结构的完整性被破坏,分泌功能失调,势必导致相应组织器官的功能障碍而引发多种病理过程,从而会引发内皮细胞机能障碍和休克、感染、肿瘤、创伤、水肿、急性炎症等多种疾病。

载基因壳聚糖纳米粒的制备及免疫增强作用的初步研究

目的:制备壳聚糖载基因纳米粒,并对其体外转染效率及其在小鼠体内的免疫增强效果进行初步研究。方法:以构建的口蹄疫DNA疫苗为模型药物,采用复凝聚法制备纳米粒;用透射电镜观察形态;用纳米粒度分析仪测定粒径、多分散度和zeta电位;凝胶阻滞分析测定基因在纳米粒中的位置;用体外基因转染实验评价纳米粒的转染活性。用载基因壳聚糖纳米粒免疫雌性Balb/c小鼠,检测免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫水平。结果:所制备的载基因纳米粒形态规则、大多成球形,平均粒径约为150nm,多分散度<0.26,zeta电位约为21mV;凝胶分析结果表明质粒DNA与壳聚糖分子间可以通过电性结合作用而完全结合,基因几乎全部被包裹在纳米粒内部;体外基因转染实验表明壳聚糖作为一种新型的非病毒基因递送载体能够高效传递DNA进入BHK-21细胞,基因能够在该细胞中高效表达;小鼠免疫实验表明纳米粒不仅能诱导机体产生较高的细胞免疫水平,而且体液免疫水平也显著提高。结论:壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内并且能够表达,小鼠免疫实验显示其具有良好的免疫增强效果。

A型流感病毒跨种传播和致病性相关蛋白研究进展

A型流感病毒是重要的人和动物病原体,每年都会在人群中引发季节性流感流行,偶尔还会引发全球流感大流行,对公共卫生安全构成严重威胁。研究发现,A型流感病毒的跨种传播与该病毒的多个蛋白有关,其中血凝素是该病毒宿主范围的主要限制因素,但聚合酶蛋白和非结构蛋白1(NS1)的作用也不容忽视。A型流感病毒通过不断地适应各类宿主和长期地进化,每年都能够产生大量致病性未知且具有潜在流行性的新毒株,人们经过长期地研究发现,A型流感病毒的致病性主要受该病毒的聚合酶蛋白、血凝素蛋白和非结构蛋白1(NS1)上某些特定氨基酸的影响。论文从以上几方面对A型流感病毒跨种传播和致病性分子机制的研究进展进行综述。

犬冠状病毒基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究

以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒。首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN。将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞,通过RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况。结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36 h后就可检测到目的基因的转录;在转染72 h后可检测到3种目的蛋白的表达。动物免疫试验表明,3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答,这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础。

植物乳杆菌melA基因的克隆及其作为食品级筛选标记的初步研究

以L.plantarum1.557的基因组DNA为模板,通过PCR技术成功克隆α-半乳糖苷酶基因(melA基因),与报道的melA基因序列同源性达到99%以上。再以大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e为基本骨架,将melA基因插入该载体,构建melA基因标记的穿梭表达载体pMG36e-melA。重组表达质粒pMG36e-melA经Sac I和Sph I双酶切和PCR鉴定与预期片段大小相符。结果表明已初步构建了以melA基因为食品级筛选标记的重组载体。

乙型脑炎病毒分子生物学特性及检测方法研究进展

日本乙型脑炎是一种由乙脑病毒引起的人畜共患的病毒性传染病,人和多种动物都可感染。主要引起人的神经系统疾病,猪的繁殖障碍,对人类的健康有极大的威胁,对养殖业带来重大经济损失。本文对乙型脑炎病毒的基因组结构、结构蛋白、非结构蛋白的分子生物学特性和检测方法的研究进展进行了综述。

piggyBac转座子应用研究进展

piggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的DNA型转座子。目前piggyBac转座子已成为在昆虫中应用最广泛的转座子之一。近年来国内外研究者更将其应用领域拓宽到了鱼类,寄生虫和哺乳动物等转基因研究中。随着对piggyBac转座子功能和分布的深入认识,piggyBac转座子将更多应用于基因功能研究,基因治疗,转座子介导的细胞系基因诱变及基因工程蛋白表达等基础研究和应用研究中。

抗口蹄疫病毒策略研究进展

口蹄疫是偶蹄动物的一种烈性传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失。该病的防控方法主要包括扑杀、销毁病畜及其同群动物,对疫区内其它易感畜群和受威胁区的易感动物立即紧急接种对应型号的口蹄疫疫苗,除此之外,还需要有一些新的紧急抗病毒策略来弥补疫苗的不足,从而为易感动物及未感染动物提供及时的保护,作者着重综述了抗口蹄疫病毒策略的研究进展,主要包括IFN的应用、反义技术的应用、RNA干扰技术的应用三方面内容。

中药活性成分皂苷免疫作用的研究进展

皂苷一种从中药中提取出来的三萜类化合物,具有广泛的生理活性。本文从皂苷对机体非特异性免疫、特异性免疫的增强作用以及抗肿瘤活性、作为佐剂等的研究进展方面进行了综述。

李斯特菌毒力因子及其调控机制的研究进展

李斯特菌是一种重要的人兽共患病病原菌,其致病性与毒力因子密切相关,作者对其毒力基因及调控机制的研究进展做一简要综述。

人β防御素2重组蛋白体外抑菌实验及抗肿瘤细胞毒性研究

目的检测重组人β-防御素2蛋白的生物活性,为今后重组人β-防御素2蛋白应用临床提供实验支持。方法将纯化和肠激酶酶切获得的HBD-2,对不同菌株和培养的口腔癌KB细胞进行活力测定,观察基因工程表达纯化获得的HBD-2对不同菌株和口腔癌KB细胞的抑制作用。结果抑菌实验结果表明,HBD-2对不同菌株有不同程度的生长抑制作用,并且抑菌环的大小与剂量有关。HBD-2对人口腔癌KB细胞的生长有明显的抑制作用。结论 HBD-2对大肠杆菌BL21、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌均能形成抑菌环,并且抑菌作用与浓度相关。HBD-2对体外培养的口腔癌KB细胞有抑制作用。

犬冠状病毒S糖蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及其免疫原性研究

首次构建了能表达犬冠状病毒纤突糖蛋白(CCVS1)的重组犬2型腺病毒(CAV-2)。用RT-PCR方法从CCVDXMV株细胞培养物中扩增出编码S糖蛋白A、B、C和D4个抗原位点的基因片段S1,将其克隆到pVAX1中,然后将含有CCVS1基因的完整表达盒(CMV-S1-PolyA)进一步定向克隆到含有CAV-2E3区的穿梭质粒pVAXE3中,构建出pVAX△E3S1。通过SalⅠ+NruⅠ双酶切pVAX△E3S1回收含有目的基因的表达盒,将其克隆入含有CAV-2全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV-2中,获得重组质粒pCAV-2-CCV-S1。ClaⅠ+AscⅠ酶切pCAV-2-CCV-S1释放重组基因组,转染MDCK细胞,获得了重组病毒CAV-2-S1。该重组病毒在MDCK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变。通过mRNA水平和Westernblot检测,证实重组病毒能表达CCVS1蛋白。动物免疫试验表明,该重组病毒可以有效地诱导免疫犬产生抗CCV和CAV-2抗体。

PrP蛋白与Shadoo蛋白研究进展

朊蛋白(PrP蛋白)在传染性海绵状脑病中具有重要作用,但其生物学功能至今没有明确。Shadoo蛋白是一种与朊蛋白在N端结构上极为相似的新蛋白,SPRN是Shadoo蛋白的结构基因。由于Shadoo蛋白与PrP蛋白具有相同的生物学性质,且它们在脑组织中重叠表达,因此也被认为是研究朊蛋白的关键因素。文章主要探讨PrP蛋白与Shadoo蛋白在基因结构、蛋白功能、朊病毒感染方面的关系。

抗ICAM-1单克隆抗体的生物学功能研究

本研究通过体外细胞试验和体内动物试验,对已制备的抗细胞间粘附分子1(ICAM-1)单克隆抗体(MAb)4F1和2C5的生物学活性进行检测。间接免疫荧光试验表明:这两株ICAM-1 MAb可以与人血管内皮细胞ECV304细胞中的ICAM-1结合。以乳酸脱氢酶释放法检测ICAM-1 MAb抑制单核细胞与血管内皮细胞的黏附作用。4F1和2C5 MAb分别可以使细胞黏附降低34.4%和26.9%。二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验和毛细血管通透性试验表明:ICAM-1 MAb能够抑制小鼠耳廓肿胀度,使伊文思蓝渗出量降低。本研究证明所制备的MAb均具有阻断ICAM-1及抑制炎症反应的功能,其中4F1生物学活性高于2C5。

白喉毒素免疫毒素的研究进展

文章主要论述白喉毒素免疫毒素、白喉毒素免疫毒素的构造和效应、白喉毒素免疫毒素的不足、白喉毒素免疫毒素的开发应用、白喉毒素免疫毒素的发展前景。

腺病毒载体狂犬病疫苗研究进展

狂犬病是一种古老的人兽共患传染病。世界上已有部分国家和地区成功地消灭了狂犬病。在我国,每年有约3 000人死于狂犬病。腺病毒作为载体的优点包括高效的入核机制、优良的转染性、较低的病原性、较高的基因表达量及清楚的基因背景。目前,腺病毒已广泛应用于基础研究、基因治疗和疫苗研发。20世纪末,以腺病毒为载体的表达狂犬病病毒糖蛋白的疫苗就已诞生,一直发展至今。以腺病毒载体狂犬病疫苗作为口服疫苗,可望在控制和消除狂犬病中发挥着巨大的作用。