趋化因子受体CXCR4在肾癌组织中的表达及其调控机制研究

目的研究趋化因子受体CXCR4在肾癌患者肿瘤组织中的表达水平,探讨CXCR4表达调控的可能机制。方法收集肾癌患者(未接受放化疗)的肿瘤组织和癌旁组织,将组织研磨后提取RNA,采用实时定量RT-PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中CXCR4的表达水平;采用实时定量RT-PCR检测肾小管细胞HKC以及肾癌细胞系769P和786O中TGF-β的表达水平。复制缺陷型腺病毒Ad(E1-).s T和对照病毒感染786O细胞后24 h,采用2 ng/ml的重组人TGF-β刺激24 h,收集细胞,采用实时定量RT-PCR检测目的基因CXCR4的表达水平。同时,病毒感染后24 h,采用划痕法检测786O细胞的迁移能力。结果在肾癌患者中,肿瘤组织的CXCR4表达显著高于癌旁组织:12例患者中,有8例表达上调。与正常肾小管细胞相比,肾癌细胞系769P和786O中,CXCR4的上游分子TGF-β表达上调。在786O细胞中,TGF-β刺激可以显著提升CXCR4的表达水平;而Ad(E1-).s T可以在786O细胞中高效介导sT GF-βRIIFc的高效表达,并抑制CXCR4的表达和细胞的迁移能力。结论 CXCR4在肾癌组织中普遍表达上调,并受到TGF-β的调控,有望成为肾癌治疗的重要靶标。

单倍体相合造血干细胞移植后早期T细胞数量及功能初步分析

为探讨单倍体相合造血干细胞移植(haploidentical-HSCT,hiHSCT)后早期T细胞免疫重建特点,采集22例患者移植后6个月内不同时间点的外周血,应用流式细胞术检测其T细胞亚群,以评价胸腺输出功能和T细胞数量的变化规律,使用Immuknow方法测定CD4+T细胞内ATP含量,以评估重建T细胞的功能。结果表明:移植前CD3+细胞数为833.75±359.84/μl,移植后1个月为318.87±266.71/μl,3个月为1006.76±512.32/μl,6个月升至1296.38±958.77/μl。移植前CD4+细胞数为336.99±211.12/μl,移植后1个月为45.89±44.21/μl,3个月时平均值为142.97±114.85/μl,6个月为181.78±120.61/μl;移植前CD8+细胞平均值为430.21±159.48/μl,移植后1个月230.44±195.89/μl,3个月为621.64±318.83/μl,6个月为823.077±633.55/μl;移植前CD4+CD45RO+记忆T细胞平均值为227.44±73.34/μl,移植后1个月为43.47±43.40/μl,3个月为138.69±110.17/μl,6个月为147.73±82.94/μl;移植前CD8+CD45RO+记忆T细胞数为212.70±98.48/μl,移植后1个月为184.76±168.65/μl,3个月为445.90±252.50/μl,6个月为519.80±475.53/μl;移植前CD4+CD45RA+CD62L+初始T细胞数为68.94±59.74/μl,移植后1个月为2.44±2.93/μl,3个月为3.14±3.48/μl,6个月为23.22±38.38/μl;移植前CD8+CD45RA+CD62L+初始T细胞为124.82±60.95/μl,移植后1个月为19.37±17.71/μl,3个月为76.63±50.85/μl,6个月为114.49±174.29/μl。Immuknow结果显示,hiHSCT后1个月CD4+T细胞内ATP含量降至210.19±119.37 ng/ml,其后逐渐恢复,在移植后3个月左右恢复至280.62±110.03 ng/ml,在移植后6个月左右升至357.28±76.18 ng/ml。结论:hiHSCT后早期T淋巴细胞重建以CD8阳性的记忆T细胞扩增为主,胸腺输出功能较差,但受者T细胞功能在移植后3个月时达到正常水平。

PKC-ε、cIAP在CD44介导的髓系白血病细胞转移和增殖中的作用及可能机制

目的 探讨PKC-ε在调节cIAP、CD44及P-gp介导的髓系白血病细胞转移、增殖及耐药中的作用及可能机制.方法 采用MTT法检测白血病细胞亲本株及耐药株K562、K562R、HL60和HL60R的耐药特性;Western blot和免疫组化检测各细胞株中PKC-ε表达水平;免疫荧光和流式细胞术检测各细胞株CD44表达;软琼脂克隆形成实验检测细胞株增殖能力;免疫荧光检测PKC-ε与P-gp、cIAP和CD44共定位.结果 髓系白血病耐药株较亲本细胞株高表达PKC-ε,采用化疗药物处理可上调亲本株PKC-ε的表达.通过添加PKC激动剂或抑制剂证实:髓系白血病细胞的转移及耐药与PKC-ε的高表达有关,增殖与PKC-ε的低表达有关.细胞及转移灶中,cIAP及P-gp的表达与PKC-ε的表达变化一致,CD44的表达与PKC-ε的表达变化相反.免疫荧光结果显示PKC-ε与P-gp、cIAP及CD44分别共定位于髓系白血病细胞膜上.结论 PKC-ε通过调节P-gp和cIAP介导白血病细胞转移,同时参与调节CD44介导的白血病细胞增殖.