基于质谱检测转基因生物外源蛋白质的消化稳定性

基于无标记定量质谱检测技术建立了一种新的转基因生物外源蛋白质消化稳定性评价方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂为标准蛋白质,经模拟人体胃/肠消化液消化后进行凝胶电泳分离,切取目标蛋白质条带进行酶切,提取肽段进行纳升液相色谱-电喷雾串联质谱分析。基于Mascot数据库检索鉴定目标蛋白质。计算各消化时间点蛋白质匹配肽段数与消化前蛋白质匹配肽段数的比值,当比值≤0.50时判断为目标蛋白质在该时间段内已消化。将此方法应用于转基因抗虫水稻"华恢1号"外源蛋白Cry1Ab/1Ac的消化稳定性分析,结果显示在模拟胃液中消化2 min时,比值下降到0.50以下,在模拟肠液中消化15 s后比值下降到0.50以下,表明该蛋白在胃/肠消化液中具有消化不稳定性。

锚蛋白重复序列通过NF-κB信号通路参与肠炎相关肿瘤的调控

目的:探讨锚蛋白重复序列(gann ankyrin repeats,Gankyrin)在炎症相关肿瘤进展中的作用机制.方法:将36只同系C57BL/6♂鼠随机分为3组,其中12只服用2.5%葡聚糖硫酸钠盐(dextransodium sulfate,DSS)饮水建立溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型,其中12只首日腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM),10 d后开始服用2%DSS 7 d,恢复正常饮水2 wk后再次口服2%DSS共3个循环,建立结肠炎相关肿瘤(colitis-associated cancer,CAC)模型,另有12只同种系小鼠口服普通饮水饲养作为对照组.分别采用病理组织学苏木精-伊红(hematoxylin&eosin,HE)染色观察结肠组织;并用实时荧光定量PCR方法检测3组结肠组织中Gankyrin的m RNA水平;采用双荧光报告系统检测Gankyrin对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白介素(interleukin,I L)-1β刺激下核因子-κB(nuclear factor-κB,N F-κB)转录活性的影响,同时用免疫印迹方法检测转染效率.结果:病理组织学HE染色证实了UC和CAC小鼠模型的建立;3组小鼠结肠组织中Gankyrin mRNA表达明显不同,在肿瘤组织中Gankyrin mR N A水平明显高于炎症组织;在H C T116细胞中过表达Gankyrin能够明显抑制TNF-α和IL-1β刺激引起的NF-κB转录活性,而干涉Gankyrin后得到的结果则相反.结论:在肠炎进展至肠癌过程中Gankyrin的表达明显上调,可能通过NF-κB信号通路参与肠炎相关肿瘤的调控.

心衰合剂对冠心病心力衰竭患者代谢组学的影响

目的:观察心衰合剂对冠心病心力衰竭患者代谢组学的影响。方法:采用随机对照的研究方法,将59例冠心病心力衰竭患者随机分为两组,治疗组采用西医规范治疗+心衰合剂方案、对照组采用西医规范治疗方案。治疗后,对所有患者与11名健康者的血清进行弛豫编辑实验和扩散编辑实验,分析各组代谢组学特点。结果:弛豫编辑实验显示,治疗后治疗组与健康组相关代谢物浓度接近,其相关代谢物浓度与对照组比较均有差异。其中治疗组与健康组的脂蛋白、乳酸、丙氨酸浓度均比对照组含量高,治疗组与健康组的氧化三甲胺、糖类、甘氨酸浓度均比对照组含量低。结论:在西医治疗基础上联合使用心衰合剂治疗后的冠心病心力衰竭患者的代谢产物更接近健康人群。

参元益气活血胶囊对不稳定型心绞痛患者代谢组学的影响

目的观察参元益气活血胶囊对不稳定型心绞痛患者代谢组学的影响。方法采用随机对照的研究方法,将100例不稳定型心绞痛患者随机分为对照组和治疗组,每组50例。对照组采用西医常规治疗,治疗组在西医常规治疗基础上联合参元益气活血胶囊,疗程均为4周。观察两组中医症状量化积分、心绞痛发作次数和持续时间,评价临床疗效。对各组患者血清进行弛豫编辑实验和扩散编辑实验,分析各组代谢组学特点。结果与本组治疗前比较,治疗后两组患者中医症状积分降低,心绞痛发作次数和持续时间降低(P<0.05);与对照组比较,治疗组中医症状积分、心绞痛发作次数和持续时间降低更明显(P<0.05)。代谢组学研究显示:治疗后治疗组患者代谢产物更接近健康人群。其中驰豫编辑实验筛选出标志性的代谢产物有:不同化学位移的脂蛋白、乳酸、丙氨酸和糖类;扩散编辑实验筛选出标志性的代谢产物有:不同化学位移的极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、多不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸及脂质。结论西医治疗基础上联合参元益气活血胶囊治疗不稳定型心绞痛,其代谢产物更接近健康人群。

基于1H-NMR早产儿呼吸窘迫综合征的代谢组学研究

【目的】通过基于1H-NMR的代谢组学方法检测早产儿并发呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distresssyndrome,NRDS)的代谢产物,探讨代谢组学在早产儿疾病中的应用及寻找早产儿NRDS的早期生物标志物(群)。【方法】分为早产儿NRDS组和早产儿肺炎组,每组各20例;2组在入院年龄、胎龄、出生体重等方面具有可比性。所有病例于入院半小时内抽血、收集血浆,用1H-NMR方法检测血浆中的小分子物质和脂类代谢物。【结果】1)小分子物质分析:NRDS组与肺炎组相比,血浆中乳酸、某种脂质及乙醇增加,而葡萄糖、肌酸、谷氨酰胺、O-乙酰基(OAc)、N-乙酰基(NAc)、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸降低;2)脂质分析:NRDS组与肺炎组相比,血浆中带HC=CH基团脂质、NAc、磷脂酰胆碱(PtdCho)、低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)降低。【结论】1)NRDS早产儿存在乳酸的堆积、主要供能物质葡萄糖及重要氨基酸等的减少;2)NRDS早产儿存在脂质代谢紊乱;3)代谢组学方法在早产儿疾病中有较大的应用前景。