芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用

目的探讨芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取手术切除的人增生性瘢痕组织以及局部皮瓣转移修复后剩余的正常皮肤,提取成纤维细胞。通过MTT试验检测不同浓度的芒柄花黄素对成纤维细胞增殖的作用,应用流式细胞术对芒柄花黄素处理后的成纤维细胞周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechest 33258染色观察成纤维细胞的凋亡情况。通过Western blot与RT-PCR试验,检测芒柄花黄素对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果与对照组比较,芒柄花黄素对正常皮肤成纤维细胞的增殖影响较小,对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强。成纤维细胞大部分阻滞于G_1期,S期的细胞减少,细胞周期的进程受到阻断。芒柄花黄素能够通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1来影响细胞周期的进程,将细胞周期阻滞于G_1期;通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论芒柄花黄素能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可考虑用于增生性瘢痕的预防与临床治疗。

A型肉毒毒素对人增生性瘢痕成纤维细胞的作用

目的观察A型肉毒毒素(BTXA)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡、迁移以及相关蛋白的影响。方法切取增生性瘢痕组织并分离培养成纤维细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的BTXA对成纤维细胞增殖的影响,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染色法观察BTXA处理后成纤维细胞的凋亡,Transwell观察不同浓度的BTXA对成纤维细胞迁移的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测不同浓度的BTXA对B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)及磷酸化黏着斑激酶(FAKp-Tyr397)的影响。结果不同浓度的BTXA均能抑制成纤维细胞的增殖(24 h时:0.46±0.02比0.59±0.02比0.83±0.01,t=11.230、13.290,P<0.01),凋亡率显著增加[(1.49±0.09)%比(3.62±0.52)%比(6.36±0.49)%,t=6.947、16.810,P<0.01]。Western blot实验表明,bcl-2、CDK4和FAKp-Tyr397蛋白的表达水平显著降低(t=31.750、86.240、50.770,P<0.01)。结论A型肉毒毒素能够抑制成纤维细胞的增殖、迁移和相关蛋白的表达,促进凋亡,有望用于增生性瘢痕的预防和治疗。

青藤碱对人增生性瘢痕成纤维细胞生长和迁移的抑制作用

目的观察青藤碱对人增生性瘢痕成纤维细胞生长和迁移的抑制作用。方法手术切除3例患者[年龄(34.04±6.36)岁,肩背部2例、四肢1例]的增生性瘢痕,提取成纤维细胞进行培养。首先通过噻唑蓝(MTT)实验检测25μmol/L和50μmol/L的青藤碱对成纤维细胞增殖的影响,应用流式细胞术对青藤碱作用后的成纤维细胞的细胞周期进行分析。通过Hochest33258染色法观察经青藤碱处理的成纤维细胞的凋亡情况。利用Transwell实验检测青藤碱对成纤维细胞迁移的作用。通过蛋白质印迹法(Westernblot)验证青藤碱对转化生成因子-β1(TGF-β1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的调节作用。计量资料采用t检验,计数资料比较采用χ^2检验。结果25μmol/L和50μmol/L青藤碱作用于成纤维细胞24h后对细胞增殖的抑制比率分别为(13.14±5.51)%和(43.28±4.98)%,青藤碱对细胞的抑制作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。青藤碱作用后,细胞会出现G1/S期阻滞的现象,凋亡细胞数量有所增加,细胞的迁移数量降低。空白对照、25μmol/L和50μmol/L青藤碱处理成纤维细胞24h后,TGF-β1、CyclinD1、bcl-2和MMP-2蛋白表达灰度值分别为(0.84±0.01比0.16±0.04比0.17±0.03)、(1.06±0.01比0.93±0.04比0.82±0.05)、(0.55±0.03比0.34±0.01比0.28±0.01)和(0.64±0.01比0.28±0.04比0.14±0.02),组间比较差异有统计学意义(t=11.040、25.370;18.880、15.410;15.760、17.440;19.600、7.210,P<0.05)。结论青藤碱能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长和迁移。

富血小板血浆促进骨髓间充质干细胞对大鼠骨缺损的修复作用

目的探讨富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)对大鼠骨缺损的修复作用。方法提取大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs),获得血小板浓度为2×10~5/L、2×10~6/L和2×10~7/L的PRP,分别将不同浓度的PRP与BMSCs共培养,通过MTT实验观察PRP对BMSCs细胞增殖的影响,ELISA实验检测PRP对BMSCs中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的作用。构建大鼠股骨节段缺损模型,分别使用BMSCs和PRP(血小板2×10~5/L)混合物;BMSCs和PRP(血小板2×10~6/L)混合物;BMSCs和PRP(血小板2×10~6/L)来填补模型中的缺陷部位。8周后处死大鼠,评估缺损修复情况。通过Western Blot和Real-Time PCR检测断端骨组织内BMP-2和Collagen I含量,免疫组织化学染色检测组织内BMP-2含量。结果不同浓度的PRP对BMSCs的增殖和ALP的表达情况均有促进作用,且随血小板浓度的增加而加剧。PRP的添加能够促进大鼠骨缺损模型中的骨再生作用,促进BMP-2和Collagen I的表达,其促进作用具有剂量依赖性。BMSCs单独处理组能够在一定程度上促进骨缺损的修复,但作用较慢。PRP单独应用对骨缺损的修复作用较小。结论 PRP具有促进BMSCs对大鼠骨缺损的修复作用。

人参皂苷对成纤维细胞生物学功能的作用

人参主要成分是人参皂苷,人参皂苷Rg3是从人参中分离提纯出来的人参二醇型皂苷单体.本研究旨在观察人参皂苷Rg3对瘢痕疙瘩成纤维细胞的Rg3的作用.一、材料与方法1.材料:人参皂苷Rg3(中国吉林亚泰制药有限公司);噻唑蓝(MTT,美国Sigma公司);杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基(美国HyClone公司);相关抗体:细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和基质金属蛋白酶(MMP)-2(美国Santa Cruze公司).收集北部战区总医院整形外科手术切除的9例瘢痕疙瘩组织进行研究.

干细胞疗法——喜忧参半的前景展望

回顾源于1955年美国医师E.唐纳尔·托马斯(E. Donnall Thomas)细胞疗法的艰辛发展历史。评论了2002年以来干细胞疗法喜忧参半的重要的研究成果,对"干细胞修饰"和"iPSCs"疗法临床实验的效果和后果表示质疑和担忧。述评表达了对自然人体干细胞的敬畏,建议加深对自然未修饰干细胞的研究应用,提倡人性化干细胞疗法流程。