DDX3X/NF-κB通路介导蛛网膜下腔出血小鼠早期神经元凋亡

目的:研究DDX3X/NF-κB通路在蛛网膜下腔出血(SAH)小鼠早期神经元凋亡过程中的作用。方法:利用颈内动脉穿刺的方法构建SAH小鼠模型,对小鼠进行神经功能评分。使用表达DDX3X靶向shRNA的重组慢病毒(Lv-shDDX3X)预先敲低脑内DDX3X的表达,或者通过NF-κB抑制剂NF-κB-IN-1(简称IN-1)抑制NF-κB信号通路,利用Western Blot检测小鼠皮质DDX3X和NF-κB(p65)的表达,通过TUNEL/NeuN染色检测各组小鼠大脑皮质神经元的凋亡。结果:SAH术后24 d小鼠神经功能显著障碍(P<0.05),皮质中DDX3X表达显著增加而NF-κB(p65)的表达显著降低(P<0.05)。预先敲低DDX3X后,小鼠神经功能显著恢复,NF-κB(p65)蛋白表达显著高于SAH组(P<0.05);当在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则小鼠神经功能恢复不明显。TUNEL/NeuN染色显示敲低DDX3X表达后小鼠脑组织中TUNEL阳性的死亡神经元数量少于SAH组(P<0.05),而如果在敲低DDX3X表达的同时使用IN-1抑制NF-κB活性,则TUNEL阳性的神经元数量减少不明显。结论:DDX3X/NF-κB通路介导了SAH后早期脑损伤小鼠的细胞死亡。

米诺环素对创伤后应激障碍大鼠神经炎症的影响

目的:研究米诺环素对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠神经炎症反应的影响。方法:采用单次延长应激(SPS)方法制备大鼠PTSD模型,通过灌胃方法给予大鼠米诺环素治疗(PTSD+Mino group)或者生理盐水(PTSD group)。通过黑白箱穿梭实验检测大鼠的行为变化,免疫组织化学染色检测海马部位离子钙结合适配分子1(Iba-1)的表达,ELISA检测脑海马IL-1β和TNF-α的含量,实时定量RT-PCR(RT-qPCR)方法检测海马部位IL-1β和TNF-αmRNA的表达水平。结果:SPS刺激后大鼠3 d后,大鼠焦虑样行为明显,海马Iba-1表达增加,海马组织中IL-1β和TNF-α含量增加。而米诺环素治疗明显减少PTSD大鼠焦虑样行为,降低海马中Iba-1的表达,同时米诺环素治疗还可以降低海马IL-1β和TNF-αmRNA和蛋白的水平。结论:米诺环素治疗可以通过抑制小胶质细胞活化改善PTSD大鼠的焦虑样行为。

大鼠神经元通过NLGN3/mTOR/MMP-9通路促进U251细胞迁移

目的:探讨肿瘤微环境中神经元对胶质瘤细胞迁移能力的影响。方法:分离培养胚胎18 d(E18)大鼠神经元,利用表达靶向神经连接蛋白3(NLGN3)分子shRNA的重组慢病毒(Lv-NLGN3-shRNA)感染神经元,real time RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NLGN3的表达,收集神经元培养上清与胶质瘤细胞系U251细胞共培养,Transwell实验检测U251细胞迁移能力,Western Blot方法检测U251细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:Lv-NLGN3-shRNA重组慢病毒感染能够降低大鼠原代神经元中NLGN3 mRNA和蛋白的的表达,神经元培养上清与U251细胞共培养可以增加后者的迁移能力并上调mTOR和MMP-9的表达。然而,NLGN3表达被Lv-NLGN3-shRNA抑制后,培养上清对U251细胞促迁移能力下降,同时mTOR和MMP-9表达降低。结论:大鼠原代神经元可以通过NLGN3/mTOR/MMP-9信号通路增强U251细胞的迁移能力,这一途径可能是胶质瘤细胞转移的机制之一。

去铁胺减少蛛网膜下腔出血大鼠神经细胞凋亡

目的:研究去铁胺(DFX)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠的神经保护作用。方法:利用颈动脉穿刺法建立SAH大鼠模型。神经功能评分评价DFX对SAH大鼠神经功能的影响,利用商品化试剂盒检测脑脊液中游离铁的含量。末端DNA转移酶dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测大鼠皮层细胞凋亡。结果:与SAH组大鼠相比,DFX治疗后可以显著改善大鼠的神经功能,同时降低脑脊液中游离铁的水平,并减少细胞凋亡。结论:DFX能够减少SAH大鼠铁超载导致的细胞凋亡并改善神经功能。

NMDA通过Wnt/β-catenin通路促进大鼠神经元中神经连接蛋白3表达

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对大鼠神经元来源的细胞系H19-7细胞中神经连接蛋白3(NLGN3)表达的影响及分子机制。方法:分别利用NMDA、NMDA受体(NMDAR)特异性拮抗剂D-AP5和β-catenin特异性siRNA处理大鼠海马神经元细胞系H19-7细胞,通过Western Blot和real time RT-PCR检测β-连环蛋白(β-catenin)、NLGN3及c-Myc的表达变化。结果:NMDA刺激后H19-7细胞中β-catenin蛋白上调,与此同时NLGN3和c-Myc表达增加;使用D-AP5阻断NMDAR以及特异性siRNA沉默β-catenin均能抑制NLGN3的表达。结论:NMDA能够通过Wnt/β-catenin通路促进大鼠神经元中NLGN3表达。

经椎体后路健侧颈7神经移位术治疗脑出血后上肢痉挛性瘫痪1例报告及文献复习

目的探讨经后路健侧颈7神经移位术治疗中枢神经系统损伤后上肢痉挛性瘫痪的效果及安全性。方法对南京市第一医院神经外科2019年4月行椎体后路健侧颈7神经移位术治疗的1例脑出血后右侧肢体瘫痪患者的临床资料进行回顾分析。术后观察随访患者2个月。结果术后2个月,患者患侧上肢的肌张力较术前降低,整体平衡功能较术前有改善;健侧上肢无明显功能障碍,无术后并发症。结论经后路健侧颈7神经移位术治疗中枢神经系统损伤后上肢痉挛性瘫痪,有一定的短期效果和安全性;长期效果还需要更多的临床病例观察和长时间随访确定。

小檗碱通过减少蛛网膜下腔出血后氧化应激和神经细胞凋亡减轻早期脑损伤

目的探讨小檗碱对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的作用及可能的作用机制。方法将Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、模型+小檗碱(20 mg·kg^(-1))组、模型+小檗碱(50 mg·kg^(-1))组、模型+小檗碱(100 mg·kg^(-1))组。通过血管内穿孔法建立蛛网膜下腔出血模型,采用subarachnoid hemorrhage(SAH)评分、神经功能评分、脑水肿、伊文思蓝渗出量检测小檗碱对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用。采用ELISA方法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(superoxide dismutase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHDG)的含量。Westernblot检测IL-1β、IL-6、TNF-α以及caspase-3、Bax、Bcl2的表达水平。免疫荧光观察神经元凋亡的变化。结果小檗碱能够改善神经功能、脑水肿和血脑屏障通透性,抑制氧化应激反应和神经元细胞凋亡的发生。结论小檗碱抑制氧化应激和神经凋亡发挥对蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤的保护作用。

铁抑素-1抑制血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡

目的:研究铁抑素-1(Fer-1)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(control)、血红素处理组(hemin)以及血红素和铁抑素-1联合处理组(hemin+Fer1)。利用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,利用活性氧荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中反应性活性氧(ROS)的含量,利用商品化试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)的含量,利用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)变化,利用Western Blot和real time RT-PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。结果:血红素处理可降低HT22细胞活性,诱发氧化应激,破坏线粒体膜电位(MMP),并下调GPX4表达而诱导铁死亡。相反,Fer-1可以使细胞活性恢复,降低氧化应激反应,从而抑制HT22细胞铁死亡。结论:血红素中诱发了HT22细胞内脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;铁死亡抑制剂Fer-1可以阻断血红素这种细胞毒性。

军队医院护士卫勤保障胜任力评价指标体系构建

目的构建军队医院护士卫勤保障胜任力评价指标体系。方法在文献回顾的基础上,运用Delphi专家咨询法对20名护理专家进行两轮函询,拟订军队医院护士卫勤保障胜任力评价指标体系,并统计分析专家函询结果。结果两轮专家咨询问卷的有效回收率分别95.24%、100.00%;专家权威系数分别为0.849,0.911;两轮咨询的专家意见协调系数分别为0.447、0.464(P<0.01),各指标的变异系数均<20%。最终形成军队医院护士卫勤保障胜任力评价指标体系,包括5个一级指标、18个二级指标、50个三级指标。结论胜任力评价指标体系具有科学性和可靠性,可为军队医院管理部门精准培训战备护士队伍、精准评价护士卫勤保障力水平、精准抽组执行重大任务护理人员提供标准和依据。

白藜芦醇对血清剥夺诱导大鼠皮层神经元自噬的影响

目的:研究白藜芦醇(RSV)对血清剥夺诱导大鼠神经元自噬的影响及分子机制。方法:将原代培养的大鼠皮层神经元分为对照组(control)、血清剥夺组(SD)、RSV处理组(RSV)和RSV联合组SIRT1抑制剂EX527处理组(RSV+EX 527),利用乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞活性,免疫荧光染色检测沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达变化、Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达水平变化。结果:与正常对照组相比,血清剥夺引起细胞活性下降、SIRT1表达下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例减少,Beclin1表达降低(P <0. 05);经过RSV处理后,细胞活性增加(P <0. 05),大鼠神经元SIRT1表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例增加,Beclin1表达增加;使用EX 527处理后,RSV的神经保护作用受到抑制。结论:RSV通过激活SIRT1活性促进大鼠皮层神经元自噬。

TLR4-NLRP3介导蛛网膜下腔出血早期大鼠神经细胞焦亡

目的:研究蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期神经细胞焦亡的分子机制。方法:雄性SD大鼠分为假手术组和SAH组。利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,利用Western Blot检测大鼠皮层toll样受体4(TLR4)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)和活化型gasdermin D(GSDMD-p30)的表达,利用商品化试剂盒检测caspase-1的活性,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑脊液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的含量。结果:SAH术后48 h大鼠皮层中TLR4、NLRP3的表达增加明显(P<0.05),caspase-1的活性升高(P<0.05),同时GSDMD0-p30升高,脑脊液中IL-1β和IL-18含量明显增加(P<0.05)。结论:SAH早期大鼠皮层发生了TLR4-NLRP3介导的细胞焦亡。

褪黑素抑制早期蛛网膜下腔出血大鼠皮层神经细胞铁死亡

目的:研究褪黑素(Mel)对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期皮层神经细胞铁死亡的影响及分子机制。方法:利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,通过腹腔注射法给予褪黑素治疗。利用商品化试剂盒检测脑脊液中铁离子含量和脑组中铁含量,利用Western Blot检测大鼠皮层中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达,利用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测大鼠皮层组织中反应性活性氧(ROS)的含量。结果:SAH模型大鼠脑脊液和皮层组织中铁含量增加,GPX4蛋白的表达降低,而ROS含量增加。褪黑素治疗可以促进SAH大鼠皮层中GPX4表达而降低ROS含量。结论:褪黑素可以通过增加GPX4的表达减轻SAH大鼠皮层中氧化应激反应,进而减轻皮层神经细胞铁死亡。

预适应训练通过Nrf2/HO-1通路改善蛛网膜下腔出血大鼠的神经功能

目的:研究预适应训练对蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠神经功能的影响及分子机制。方法:雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、SAH模型组(SAH)和预适应训练组(SAH+ET)。大鼠制备SAH模型前进行3周预适应训练,利用颈内动脉穿刺法制备SAH大鼠模型。利用改良的神经功能评分检测大鼠的神经功能改变,Western Blot检测大鼠皮层Nrf2和HO-1的表达,利用商品化试剂盒检测脑组织中丙二醛(MDA)的含量以及脑脊液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果:和假手术组大鼠相比,SAH术后48 h,预适应训练处理可明显改善SAH大鼠神经功能(P<0.05),增加脑组织中Nrf2和HO-1的表达(P<0.05),同时降低脑组织中MDA含量及脑脊液中LDH的活性。结论:预适应训练可改善大鼠SAH后的神经功能。其作用机制与激活Nrf2/HO-1通路降低细胞损伤有关。

基于颅骨骨窗的国人大脑功能区定位

目的探讨基于颅骨骨窗划分的国人大脑重要功能区定位关系。方法选取13具成人尸头,保留颞上线、鳞状线、矢状缝、冠状缝、人字缝、前囟点、冠状点、鼻根等骨性标志,形成额骨上窗、额骨下窗、顶骨上窗、顶骨下窗、颞骨窗、枕骨窗共六个骨窗,观测中央前回、中央后回、额下回等重要脑功能区以及脑膜中动脉在各骨窗内的定位和分布情况。结果中央前回分布于额骨上窗、顶骨上窗,其中点在中线上位于前囟点后方约4.2 cm[右侧(4.17±0.92)cm,左侧(4.31±1.1)cm],与矢状缝夹角约54°[右侧(53.6±7.47)°,左侧(54.63±3.54)°]。中央后回位于顶骨下窗,其中点在中线上位于前囟点后方约6.2 cm[右侧(64.51±0.87)°,左侧(63.63±1.76)°],与矢状缝夹角约64°[右侧(64.51±0.87)°,左侧(63.63±1.76)°]。额下回位于额骨下窗,而颞上回及颞横回的大部分位于颞骨窗,距状沟则位于枕骨窗;脑膜中动脉仅分布在顶骨上、下窗,其出现率分别为73.12%、67.42%。结论基于颅骨骨窗划分的大脑重要功能区的定位关系对于术前规划及术中定位有一定指导意义。

神经内镜辅助下海绵窦穿刺血管内栓塞治疗海绵窦区硬脑膜动静脉瘘1例报道并文献复习

目的探讨无静脉通路的海绵窦区硬脑膜动静脉瘘的治疗方法及效果。方法回顾性分析神经内镜辅助下海绵窦穿刺血管内栓塞治疗的1例海绵窦区硬脑膜动静脉瘘的临床资料,并结合文献进行分析。结果术后即刻造影显示瘘口栓塞完全,无异常显影。术后2个月门诊随访,双眼球结膜无充血,无突眼症状,视力、视野及眼球运动均正常,无颅内杂音,无头晕头痛等表现。结论神经内镜辅助下经蝶窦穿刺海绵窦是治疗经典入路失败的海绵窦区硬脑膜动静脉瘘的一种可行的选择。

褪黑素协同丙戊酸钠减轻糖氧剥夺诱导的小鼠神经元损伤

目的:研究褪黑素(Mel)和丙戊酸(VPA)处理对糖氧剥夺(OGD)诱导的神经元损伤的保护作用及分子机制。方法:利用小鼠海马神经元来源的细胞系HT22细胞制备OGD细胞模型,分别给予不同浓度的Mel和VPA处理,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒商品化试剂盒检测细胞培养上清中LDH的活性,Western Blot检测各组细胞中NF-κB/RelA(Lys310)乙酰化水平。结果:Mel在10 mmol/L浓度下,与VPA(10 mmol/L)联合使用时,能对神经产生保护作用。Mel和VPA联合处理降低了OGD暴露HT22细胞NF-κB/RelA(Lys310)乙酰化。结论:Mel和VPA通过降低NF-κB/RelA(Lys310)乙酰化发挥神经保护作用。

SDF-1及其受体CXCR4在恶性血液病中的临床应用研究

作为一种特异性的肿瘤标志物,SDF-1和CXCR4在多种恶性血液系统肿瘤中高表达,与急性白血病的分期、黏附、侵袭、转移、复发、浸润有着密切的相关性,与中枢神经系统白血病的发生呈正相关,SDF-1及其受体CXCR4对急性白血病的早期诊断、预防、分期、治疗和预后判定、用药筛选和靶向治疗中,有着重要的价值和深远的意义,值得临床进一步研究、推广应用。

远隔缺血预适应通过激活HIF-1α/VEGF通路保护大鼠缺血性脑卒中

目的:研究远隔缺血预适应(RIPC)对大鼠脑缺血模型的保护作用及分子机制。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(sham)、RIPC组、缺血再灌注组(MCAO/R)组、RIPC+MCAO/R组;术前通过夹闭双侧股动脉给予相应组RIPC处理,利用大脑中动脉栓塞再灌注法(MCAO/R)制备大鼠缺血性脑卒中模型,神经功能评分检测大鼠的神经功能,用2,3,5-三苯四唑氯(TTC)对脑切片进行染色以评估脑梗死的程度。利用real time RT-PCR检测大脑皮质中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达。结果:与MCAO/R组大鼠相比,RIPC处理组大鼠神经功能缺损症状较轻(P<0.05),脑梗死体积缩小(P<0.01),皮质中HIF-1α和VEGF mRNA的表达表达明显升高(P<0.05)。结论:RIPC处理对减轻缺血性脑卒中大鼠具有保护作用,其分子机制可能与激活HIF-1α/VEGF通路有关。

萝卜硫素通过Keap1/Nrf2通路缓解OGD/R诱导的星形胶质细胞氧化应激

目的:研究萝卜硫素(SFA)对糖氧剥夺/再灌注(OGD/R)大鼠星形胶质细胞氧化应激的影响。方法:将新生大鼠脑组织中分离培养的星形胶质细胞分为3组,分别是对照组(control)、OGD/R处理组、OGD/R和SFA联合处理组(OGD/R+SFA),利用低氧培养箱及无糖DMEM培养基制备OGD/R细胞模型,OGD/R+SFA组细胞在制备OGD/R的同时给予终浓度为50μmol/L的SFA处理,用商品化试剂盒分别检测细胞活性和丙二醛(MDA)的含量,利用Western Blot检测大鼠细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)的核转位及血红素加氧酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)的表达。结果:SFA能够显著增加OGD/R诱导的星形胶质细胞活力(P<0.05),减少MDA的含量,同时促进Nrf2转位到细胞核并促进靶分子HO-1和NQO1表达(P<0.05)。结论:SFA通过激活星形胶质细胞中Keap1/Nrf2信号通路减轻OGD/R诱导的细胞损伤。

褪黑素改善蛛网膜下腔出血模型大鼠焦虑和抑郁样行为

目的:研究褪黑素(Mel)治疗对蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠焦虑和抑郁样行为的影响。方法:利用颈内动脉穿刺法制备SAH大鼠模型,检测大鼠颅内压力变化,褪黑素组大鼠每天腹腔注射褪黑素30 mg/kg进行治疗。利用神经功能缺损评分检测大鼠的神经功能变化,在SAH后的4周进行高架十字迷宫实验(EPM)和糖水偏好实验(SPT)别检测SAH大鼠焦虑和抑郁样行为。结果:与假手术组大鼠相比,SAH手术后颅内压迅速升高(P<0.05),24 h神经功能发生明显障碍(P<0.05),SAH后4周,EPM和SPT测试表明大鼠焦虑抑郁样行为增加(P<0.05)。褪黑素治疗组不影响SAH大鼠颅内压和24 h神经功能,但是可以显著改善4周后焦虑抑郁样行为行为(P<0.05)。结论:褪黑素治疗可以显著改善SAH大鼠焦虑和抑郁样行为,对于SAH康复治疗具有重要的临床意义。