化学去细胞异体神经修复神经缺损长度的实验研究△

[目的]研究神经长度是否影响化学去细胞神经的质量及化学去细胞异体神经修复犬神经缺损的适当长度范围。[方法]切取犬的坐骨神经全长,截取直径近似段长度12 cm,去除神经外膜的脂肪组织及血管,在5.0%Triton X-100和5.0%脱氧胆酸钠中重复消化得到化学去细胞神经;部分神经用于组织学评价,将12 cm神经按顺序切割为6段,石蜡包埋制备切片,厚度5μm。HE染色和Fastb lue染色,观察去细胞程度、神经细胞外基质结构完整性、髓鞘染色强度,观察每段神经的差异。在体内实验中,用化学去细胞异体神经桥接犬的坐骨神经缺损,缺损长度分别为8、10 cm组,每组各有6条成年犬,随访时间12个月。观察动物肢体功能恢复、肌电图变化及再生神经组织学表现,包括HE染色、S-100免疫组织化学染色、乙酰胆碱酯酶染色。[结果]去细胞神经全长各段在去细胞程度、结构完整性及残余髓鞘染色综合评价中无差异。体内移植实验结果显示8 cm去细胞异体神经移植组的犬在术后12个月踝关节可直立行走,而10 cm去细胞异体神经移植组犬12个月时踝关节不能直立行走。肌电图检查结果显示,两组动物的手术肢体均可记录到诱发的运动和感觉电位。肌电图波幅、时限及运动神经传导速度结果显示,8 cm移植组明显高于10 cm移植组(P<0.05)。组织学检查显示8 cm移植组再生的神经轴突通过移植段神经到达远侧的神经中,并与所支配的肌肉建立新的运动终板联系,坐骨神经支配的小腿三头肌中有大量新生的运动终板形成。在10 cm移植组有部分再生的神经纤维通过移植段神经进入远端的神经,小腿三头肌中新生的运动终板数量和大小明显低于8 cm移植组(P<0.05)。[结论]在化学去细胞神经的制备中,神经的长度对去细胞的质量无影响;化学去细胞异体神经修复神经缺损的长度若不超过8 cm可取得较满意的功能康复结果。

骨坏死实验动物模型研究进展

骨坏死是一种常见病,主要累及股骨头。对骨坏死动物模型的研究有助于认识骨坏死的病理机制,建立切实有效的预防股骨头塌陷的治疗方法。虽然有多种方法可以建立早期股骨头坏死的动物模型,但是很难建立一个从早期的影像和组织学改变到晚期的股骨头塌陷表现都与人类相似的动物模型。本文总结了骨坏死实验动物模型的研究现状,为骨坏死研究的模型选择提供参考,并展望骨坏死实验动物模型的发展方向。

PKH26荧光素标记脂肪间充质干细胞的生物学特性的研究

目的研究PKH26荧光素染料对脂肪间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响。方法分离培养新生SD大鼠的ADSCs,通过流式细胞仪、成脂、成骨、成软骨诱导鉴定ADSCs的免疫表型和多向分化的能力。用细胞膜荧光素染料PKH26对第二代脂肪干细胞进行标记,通过倒置相差显微镜、荧光显微镜以及CCK-8法评估标记后细胞的形态、荧光强度以及增殖活性的变化。结果成功分离和培养ADSCs,其纯度达95%以上,并成功将ADSCs诱导成脂肪、骨、软骨;PKH26标记24 h后,在荧光显微镜下可见细胞膜上均匀分布的强红色荧光,细胞的形态以及增殖活性与未标记的细胞无明显差异。结论 PKH26荧光素染料标记后对ADSCs的形态及增殖活性无明显影响,是一种理想的细胞标志物,能够很好的应用于示踪间充质干细胞的迁移转归及干细胞标记等方面的研究。

血管基质混合物复合软骨细胞外基质源性微载体修复大鼠膝关节软骨缺损的实验研究

背景:关节软骨的修复和再生能力很弱,利用软骨组织工程能更好地实现关节软骨的修复和再生。种子细胞、细胞载体作为组织工程的重要组成部分正在进行新的探索。目的:探讨自体脂肪组织来源的血管基质混合物(ASVF)复合软骨细胞外基质源性微载体(CEDPs)修复SD大鼠关节软骨缺损的可行性。方法:从大鼠腹股沟脂肪垫中分离获取ASVF,以湿法粉碎和脱细胞处理得到猪来源CEDPs,将两者混合,修复大鼠膝关节滑车直径2 mm全层软骨缺损。实验按移植物的不同分为空白组、CEDPs组、CEDPs+ASVF组。术后6周、12周取材,对标本进行Micro-CT分析,评估缺损去软骨下骨的重塑情况;标本切片后进行HE染色、甲苯胺蓝染色,以Wakitani评分进行组织学评估。结果:Micro-CT结果显示各组均有软骨下骨重塑,CEDPs+ASVF组的骨体积分数、骨小梁厚度均高于其他两组(P <0.05)。组织学分析显示CEDPs+ASVF组新生组织结构主要为透明软骨,其余两组为纤维组织与透明软骨混合分布,且CEDPs+ASVF组组织学评分高于其他两组。结论:自体ASVF复合CEDPs可用于修复SD大鼠膝关节全层软骨缺损,为修复关节软骨缺损提供了新的思路。

经皮自体骨髓移植治疗骨不连的手术及护理

目的 通过治疗骨不连的新方法 ,复习及提高相关护理知识。方法 针对经皮自体骨髓移植微创手术治疗的 84例骨不连患者采取一定的护理措施 ,使医患有共同的心理及护理准备。结果 愈合率为87% ,愈合时间 3～ 13个月 ,平均 6 .5个月。术后观察 ,及时选择固定方式 ,并将病历随访资料收集完整。结论 专业化的迅猛发展 ,能使每

脂肪间充质干细胞复合多孔壳聚糖微球修复大鼠肝损伤

背景:随着干细胞治疗及组织工程的发展,利用生物相容性好的生物高分子材料结合脂肪间充质干细胞构建肝脏组织工程微单元成为治疗肝脏疾病的新策略。目的:探讨脂肪间充质干细胞复合多孔壳聚糖微球对急性肝损伤的修复能力。方法:将SD乳鼠脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球在体外复合培养,分别在培养第1,3,5天观察细胞在微球上增殖情况。取36只SD大鼠(北京市维通利华实验技术有限公司提供),随机分为3组(n=12):空白对照组,腹腔注射生理盐水;急性肝损伤组,腹腔注射10%四氯化碳-橄榄油;脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组,腹腔注射10%四氯化碳-橄榄油,于注射后第1天通过手术将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球平铺于肝脏表面。分别于注射后第1,2,3,7天进行大体、血清学及组织学评价。结果与结论:(1)脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球复合后第1,3,5天,经过活/死染色观察到细胞可在微球上正常生长(死细胞数量远远少于活细胞数量),且细胞在不断增殖;(2)注射后第1,2,3,7天,脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组的大体形态、肝功能及组织学评价均优于急性肝损伤组,从第3天开始脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组与空白对照组已无明显差异;(3)结果表明,将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球移植入肝脏表面可加速肝损伤的修复。

软骨脱细胞基质多孔支架与骨髓基质干细胞体外构建组织工程软骨的研究

目的探讨关节软骨脱细胞基质多孔支架（CEDPS）与骨髓基质干细胞（BMSCs）体外培养组织工程软骨的可行性。方法粉碎人关节软骨，脱细胞处理后差速离心法收集细胞外基质悬液，采用冷冻干燥技术制备三维多孔支架。扫描电镜观察其微观结构，并进行组织学观察，生化成分定量检测其胶原、氨基葡聚糖（GAG）、DNA含量，生物力学方法测量其干性及覆水状态下压缩弹性模量；分离培养犬骨髓基质干细胞，TGF－β1成软骨诱导，PKH26标记，接种到支架卜体外继续诱导培养，荧光显微镜及扫描电镜观察培养3d后细胞在支架内的黏附、分布情况。结果制备的CEDPS支架无细胞碎片残留，软骨细胞外基质特异性染色阳性，具有相互贯通的三维孔隙结构；支架生化成分定量检测：总胶原含量为（708．2±44．7）μ/mg，GAG含量为（254．7±25．9）μ/mg，DNA含量为（0．021±0．007）μ/mg；支架纵向压缩弹性模量E=（1．226±0．288）MPa，覆水后压缩弹性模量E＝（0．052±0．007）MPa。荧光显微镜、电镜检查结果表明细胞广泛均匀的分布在支架内部，呈圆形或椭圆形，在支架上增殖显著，细胞基质分泌明显。结论CEDPS支架在生化组成和结构上与软骨细胞外基质成分类似，去细胞彻底，具有良好生物力学特性，是一种较为理想的软骨组织工程支架载体；成软骨诱导的BMSCs与CEDPS支架在体外可初步构建类软骨样组织。

化学去细胞同种异体神经移植的实验研究

目的探讨化学去细胞同种异体神经的免疫学特性及其修复灵长类动物神经缺损的能力。方法(1)分别获取SD大鼠的坐骨神经和猕猴的正中神经,经4.0%TritonX-100和72mM脱氧胆酸钠溶液重复消化处理,制备SD大鼠和猕猴的化学去细胞神经。在Wistar近交系大鼠的皮下植入化学去细胞同种异体神经和新鲜SD近交系大鼠的神经,检测植入部位组织内T淋巴细胞及其亚群的浸润程度。(2)用化学去细胞同种异体神经移植修复猕猴5cm长的正中神经缺损,通过功能观察、神经电生理检测、神经再生组织学、S-100免疫组织化学染色和运动终板染色观察神经移植后的效果。结果化学去细胞异体神经植入体内后,移植神经周围组织浸润的CD3+、CD4+和CD8+细胞数量明显少于新鲜同种异体神经移植的对照组。去细胞同种异体神经可以修复猕猴5cm长的周围神经缺损,在移植术后5个月患肢功能均有不同程度的改善。移植术后6个月神经电生理检测显示,刺激可以通过移植段神经到达远端的效应器,在神经支配区肌肉可以记录到运动诱发电位,跨过移植神经段的传导速度已达(40.5±6.8)m/s。神经再生组织学检查显示有再生的神经纤维通过移植段神经,在去细胞异体神经移植段内分布纵行排列的雪旺细胞,在支配区肌肉可以检测到重建的运动终板。结论化学去细胞同种异体神经的抗原性明显降低,可修复高等哺乳类动物的周围神经损伤。

组织工程骨软骨复合体修复犬膝关节负重区骨软骨缺损的实验研究

目的观察以骨软骨支架复合骨髓基质干细胞（bone-marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）修复犬膝关节负重区骨软骨缺损的疗效。方法利用软骨细胞外基质作为软骨支架部分，以脱细胞骨作为骨支架部分，采用相分离技术制备骨软骨双相支架，将成软骨诱导的BMSCs种植到双相支架上构建组织工程骨软骨复合体，并以此复合体修复犬膝关节股骨髁负重区骨软骨缺损，分为细胞一双相支架组（实验组）和单纯支架组（对照组），分别在术后3和6个月时取材，根据大体、组织学、Micro—CT等检测结果进行半定量或定量评估。结果大体及组织学评价表明：同一时间点实验组的修复效果优于对照组，且实验组在术后6个月时的修复效果优于其术后3个月时，两项差异均有统计学意义；而对照组不同时间点修复效果的差异无统计学意义。Micro-CT检测结果表明实验组与对照组软骨下骨均得到重建，两者的差异无统计学意义。结论骨软骨双相支架复合成软骨诱导的BMSCs能成功修复犬膝关节负重区的骨软骨缺损，其修复效果明显优于单纯支架植入组。

组织工程骨-软骨复合体修复犬股骨头负重区大面积骨软骨缺损的实验研究

目的 探讨采用犬股骨头负重区骨和天然软骨制备的骨-软骨双层支架复合成软骨诱导的骨髓间质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）修复犬股骨头负重区大面积骨软骨缺损的疗效.方法 利用软骨细胞外基质作为软骨支架部分,犬股骨头负重区骨柱经脱细胞处理后作为骨支架部分,采用相分离技术制备骨-软骨双层支架.将成软骨诱导的BMSCs种植到双层支架上体外构建组织工程骨-软骨复合体,并以此修复犬股骨头负重区大面积骨软骨缺损（直径11 mm,高10 mm）,第3、6个月时分别取材,行大体、X线片、组织学、Micro-CT和生物力学等检测.结果 X线片及大体观察：3个月时可见股骨头负重区出现轻度塌陷;6个月时出现严重塌陷,呈重度骨关节炎改变.组织学观察：第3、6个月时软骨缺损部分均以纤维组织或纤维软骨充填,周围软骨退变,骨缺损部分不同程度塌陷,与宿主骨质结合紧密.第3、6个月时骨软骨缺损的骨体积分数均低于正常股骨头,差异有统计学意义.6个月时重建软骨下骨的刚度明显低于正常股骨头,差异有统计学意义.结论 结构性骨-软骨双层支架复合成软骨诱导的BMSCs修复犬股骨头负重区骨软骨缺损效果不佳,易导致股骨头塌陷.

双相磷酸钙组织工程骨块重建股骨头内骨缺损的实验研究

目的观察在体外构建的具有仿生结构的双相磷酸钙(biphasiccalciumphosphate,BCP)组织工程骨块植入犬股骨头缺损内的骨再生情况及预防股骨头塌陷的效果。方法以犬股骨头的松质骨样本Micro-CT(micro-computedtomography)图像为基础,提取其中的图像信息,利用三维凝胶叠层成形法制备出具有仿骨小梁结构的陶瓷支架。在体外利用诱导分化的自体骨髓间充质细胞与仿生BCP支架复合,构建组织工程骨块,将其植入10只犬的股骨头负重区骨缺损内;另取10只犬作为对照组,在股骨头骨缺损区内打压植入自体松质骨粒,对比观察仿生BCP骨块的植入效果。结果制备出的股骨头仿生BCP支架具有良好的三维空间结构,支架小梁具有一定的方向性,呈板状模型;细胞在支架表面大量生长。植入动物体内30周后,实验组犬股骨头外形基本完整,新生骨质包绕支架小梁并沿支架表面生长,而对照组犬股骨头均出现不同程度的塌陷。结论仿生BCP组织工程骨块具有良好的生物相容性,植入犬股骨头负重区骨缺损后,能在一定程度上防止股骨头塌陷。

化学去细胞异体神经复合肝细胞生长因子修复周围神经缺损的研究

目的 研究化学去细胞异体神经复合人肝细胞生长因子（HGF）修复周围神经缺损的作用。方法 体外试验检测携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad-HGF）对小鼠骨骼肌细胞的转染效率以及转染细胞对目的蛋白的表达。化学去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经10mm缺损后，近、远端吻合口附近肌肉分别注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子（Ad—HGF），与自体神经移植组对照，通过步态分析、肌肉湿重测定、轴突生长速率测定、神经电生理、计算机图像分析等指标评价神经移植后再生效果。结果 流式细胞仪结果表明，随着病毒滴度的增加，Ad—HGF对骨骼肌细胞的转染不断增加。骨骼肌细胞对目的蛋白（HGF）的表达可以持续两周。大鼠动物实验术后16周，去细胞异体神经可以修复周围神经缺损，同自体神经移植对比，肝细胞生长因子明显增强了去细胞异体神经的神经再生能力。结论 复合肝细胞生长因子的化学去细胞异体神经能促进神经轴突生长速度，显著增加移植物内新生血管，满意修复一定长度周围神经缺损，可以成为一种有效的周围神经组织工程修复材料。

基于CT三维重建的激素性股骨头坏死患者股骨头坏死组织分布研究

目的利用CT三维重建观察激素性股骨头坏死患者股骨头坏死组织体积及分布情况。方法以2016年9月-2018年12月收治并符合选择标准的25例激素性股骨头坏死患者为研究对象。男22例,女3例;年龄20~63岁,平均38.8岁。股骨头坏死均为国际骨循环研究会(ARCO)Ⅱ期;病程3~18个月,平均9.2个月。首先行髋关节CT扫描,采用Mimics Research 21.0软件三维重建股骨头并识别坏死组织;然后利用3-matic Research 13.0软件将重建的股骨头分割为8个区域,测算股骨头、坏死组织体积,坏死组织体积比,以及不同区域坏死组织分布情况。结果股骨头三维数字模型显示坏死组织主要位于股骨头前上方,坏死组织区域主要呈穹窿状。股骨头分区显示坏死组织主要集中于前上内区、前上外区与后上内区。25例患者股骨头体积为(48399.52±9408.90)mm^3,坏死组织体积为(20917.08±6566.94)mm^3,坏死组织体积比为44.75%±15.72%。不同区域坏死组织体积及体积比不一致,其中前上内区、前上外区和后上内区较大。结论基于CT三维重建能快速直观地评估股骨头坏死组织体积及分布情况。

沉痛悼念骨科泰斗卢世璧院士

中国共产党的优秀党员,我国骨科泰斗,中国工程院院士,全军骨科研究所所长,中国人民解放军总医院主任医师、教授、博士生导师卢世璧同志,因病医治无效,于2020年3月28日11时30分在北京逝世,享年90岁。卢世璧同志1956年毕业于北京协和医学院并留院工作,1958年调人中国人民解放军总医院。先后担任中国人民解放军总医院骨科主任医师、教授,中国人民解放军总医院专家组成员、全军骨科研究所所长。

应用于现代战创伤的急救止血剂

据统计，战伤死亡的人群中约有50％是死于不可控制的出血；在和平时期，出血也是创伤致死的第二大原因。即便最终控制了出血，如果不够及时，也会导致出现低体温、凝血功能障碍、感染、酸中毒以及多器官功能衰竭等多种严重并发症而危及伤者生命。因此，及时有效地控制出血，不论对于平时还是战时都意义重大。

机械分离法制备脂肪来源血管基质混合物修复大鼠膝关节软骨缺损

[目的]探究采用机械分离法制备自体脂肪组织来源的血管基质混合物(stromal vascular fraction,SVF)修复SD大鼠膝关节软骨缺损的可行性。[方法]从2周龄大鼠腹股沟部获取脂肪组织,采用机械分离法制备SVF。在36只8周龄大鼠右侧膝关节股骨滑车中央处建立直径2 mm全层软骨缺损模型,将其随机分为3组,每组12只大鼠。按照软骨缺损的处理,分为空白对照组(BC):缺损处旷置;纤维蛋白胶组(FG):缺损处植入纤维蛋白胶;SVF+纤维蛋白胶组(SVFF):缺损处植入SVF+纤维蛋白胶。术后6、12周取材,参考国际软骨修复协会软骨修复大体评分标准评价标本修复情况;标本切片后进行HE染色、天狼猩红染色,参考Wakitani评分系统评价标本修复情况。[结果]标本大体观察显示,SVFF组软骨修复效果明显优于其他两组,大体评分高于其他两组,且差异有统计学意义(P<0.05)。组织学分析显示,SVFF组缺损区修复组织以透明软骨为主,而BC和FG组缺损区修复组织以纤维组织为主,SVFF组组织学评分高于其他两组且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]采用机械分离法制备的脂肪来源血管基质混合物可用于修复大鼠膝关节软骨缺损,是一种较有应用前景的修复关节软骨缺损的方法。

微载体/水凝胶复合支架修复大鼠膝关节骨软骨缺损

[目的]探索以负载软骨细胞的Cytodex-3微载体和藻酸钠水凝胶为材料,制备微载体/水凝胶复合支架,并观察以此修复大鼠膝关节骨软骨缺损的效果。[方法]将大鼠软骨细胞与Cytodex-3微载体置于旋转式三维生物反应器(rotary cell culture systems,RCCS)中,软骨细胞在微载体表面快速大量扩增后,将负载有软骨细胞的微载体均匀的与藻酸钠水凝胶混合,制备微载体/水凝胶复合支架,并以此修复大鼠股骨滑车骨软骨缺损。实验分3组,A组:负载有软骨细胞的Cytodex-3微载体/藻酸钠水凝胶复合支架修复组;B组:单纯Cytodex-3微载体/藻酸钠水凝胶复合支架修复组;C组:空白对照组。术后6、12周取材,据大体、组织学、Micro-CT等检测结果对骨软骨修复效果进行评估。[结果]大体观显示A组的软骨修复效果明显优于B组和C组。组织学分析示A组的修复组织主要以透明软骨为主,而B组和C组主要以纤维组织为主。Micro-CT扫描结果表明各种软骨下骨均得到不同程度的重建,A组效果优于其他两组,比较差异有统计学意义。[结论]负载软骨细胞的微载体/藻酸钠水凝胶复合支架能够高效的修复大鼠股骨滑车骨软骨缺损,这种将微载体与水凝胶结合构建复合支架的方法,为组织工程软骨的制备提供了新的途径。