骨钙素RIA试剂盒研制及其临床应用

应用自行研制组装的血清骨钙素（ＢＧＰ）ＲＩＡ试剂盒，对１４４例正常人和１７６例不同骨病患者的血清ＢＧＰ含量进行了测定．结果显示，血中ＢＧＰ含量的升降，反映了不同骨病时成骨细胞的功能状态，表明ＢＧＰ与骨疾病的发生有密切关系．这对研究骨病的发病机理、诊断和疗效分析，提供了一项有意义的指标．

缺氧预处理诱导心肌细胞蛋白质组变化的初步研究

缺氧预处理(hypoxiapreconditioning,HPC)可模拟缺血预处理(ischemicpreconditioning,IPC)对缺血/再灌注心肌的保护作用,涉及细胞内众多分子事件.本工作旨在采用双向电泳和质谱分析等蛋白质组分析技术,发现缺氧预处理后心肌细胞蛋白质整体表达上的变化,初步分析其与缺氧预处理心肌保护作用的关系.将原代培养的SD乳鼠心肌细胞分为2组(n=6):(1)缺氧预处理组(HPC):将细胞置缺氧仓内短暂缺氧20min进行缺氧预处理(HPC),制备心肌细胞蛋白提取物;(2)对照组(control):细胞置于培养箱内持续常氧孵育至实验结束,提取蛋白.采用双向凝胶电泳和图像扫描,经蛋白样本分离和考马斯亮蓝染色后比较分析,选取3个差异表达蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和数据库检索.双向电泳可分离约529±45个蛋白质,点匹配率约为78%±7.5%.18种蛋白质在HPC后发生明显表达差异,其中12种蛋白质表达降低,6种表达增高.经质谱分析鉴定出的3种蛋白质分别为myosinlightpolypeptide3,nucleosidediphosphatekinase(NDPK)和calreticulin(CRT).缺氧预处理引起心肌细胞蛋白质组变化,初步发现其中myosinlightpolypeptide3表达下调、nucleosidediphosphatekinase和calreticulin表达增加,可能通过调节心肌细胞的收缩性、激活G蛋白、调节细胞内Ca2+浓度而保护心肌.本工作通过研究缺氧预处理延迟保护过程中心肌内源性蛋白表达水平的变化,有助于从细胞水平探讨预处理延迟保护机制.

自体CIK细胞联合IL-2治疗老年人B细胞性恶性淋巴瘤的临床研究

本研究评价自体CIK细胞联合IL-2治疗老年人B细胞性恶性淋巴瘤的有效性和安全性。采集9例老年B细胞性恶性淋巴瘤患者外周血单个核细胞,在体外经干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、抗CD3单克隆抗体诱导成CIK细胞,回输细胞数为(2-3)×109个,回输后应用IL-2 100万U/day,皮下注射,第1-10天。28天为1个疗程,共完成了64个周期的自体CIK细胞输注。观察治疗前后细胞免疫功能、肿瘤相关生物学指标、影像学特征、疾病缓解情况、生活质量及生存期的变化。结果表明,7例接受8个周期的CIK细胞输注的患者和2例接受4个周期的输注的患者均未出现不良反应。CIK细胞治疗后CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例明显升高(p<0.05),β2微球蛋白、LDH水平显著下降(p<0.05)。所有患者症状改善、生活质量显著提高(p<0.01)。8例达完全缓解,1例完成8周期的CIK细胞输注后曾一度达良好的部分缓解,但因上呼吸道感染并发急性大面积心肌梗死和淋巴瘤持续进展而死亡。结论:自体CIK细胞联合IL-2治疗老年人B细胞性恶性淋巴瘤安全有效。

缺氧诱导因子-1α在缺氧预处理预防心肌细胞损伤中的作用

本工作旨在研究缺氧预处理(hypoxic preconditioning, HPC)对于心肌细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulatedprotein kinases, ERK)活性、缺氧诱导因子 -1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)表达的影响,及其在缺氧复氧诱导心肌细胞损伤中的作用。通过在培养的SD 乳鼠心肌细胞缺氧/ 复氧(H/R)模型上, 观察HPC 对于24 h 后H/R 诱导心肌细胞损伤的影响, 以台盼蓝排斥实验检测心肌细胞存活率、以 TUNEL 法检测细胞凋亡、并用荧光素染料 Hoechst33258 测定心肌细胞凋亡率; 制备心肌细胞蛋白提取物,以磷酸化的 ERK1/2 抗体测定 ERK1/2 活性, 以抗HIF-1α 抗体检测 HIF-1α 的表达,并观察ERKs 的上游激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059 对于HPC 诱导的ERKs 磷酸化、HIF-1α 表达以及心肌细胞保护作用的影响,并分析细胞损伤与 ERK1/2 活性、HIF-1α 表达量之间的相互关系。结果显示缺氧复氧造成心肌细胞损伤, HPC 可以增加心肌细胞 H/R 后存活率,降低凋亡率,并激活 ERK1/2,诱导 HIF-1α 表达;细胞凋亡与 ERKs 活性、HIF-1α 表达量之间存在负相关,即 ERKs 活化、HIF-1α 表达与预防细胞损伤有关;而 ERKs 活性与 HIF-1α 表达量之间存在正相关,ERKs 的上游激酶MEK抑制剂PD98059 可以消除HPC

地西他滨联合自体CIK细胞治疗2例高龄急性髓系白血病的疗效观察

本研究旨在观察低甲基化药物地西他滨联合自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗老年急性髓系白血病(AML)的安全性及有效性。本科于2006-2012年收治2例80岁以上老年AML患者(M4型和M6型),均继发于骨髓增生异常综合征。对这2例患者先后采取单用自体CIK细胞输注、地西他滨或(和)自体CIK细胞方案治疗,系统观察了2例CIK治疗前后淋巴细胞亚群、临床相关指标(血液学反应、输血频率、白血病相关基因表达、缓解情况、生活质量)及生存期的变化。结果表明,与单用自体CIK细胞输注和单用地西他滨治疗相比,地西他滨联合自体CIK细胞治疗方案可减轻骨髓抑制程度,降低输血频率及输血量,延长部分缓解持续时间,同时表达的白血病相关基因减少,生存期显著延长,患者生活质量得到明显改善。结论:地西他滨联合自体CIK细胞治疗老年AML患者安全有效。

LRP16基因在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的:探讨LRP16在子宫内膜样腺癌(EEC)中的表达及与临床病理的相关性。方法:用免疫组化法检测76例EEC患者癌组织标本中LRP16和雌激素受体α(ERα)的表达水平。结果:LRP16核阳性率为67.11%(51/76),LRP16浆阳性率为96.05%(73/76),浆核均阳性占64.47%(49/76);ERα阳性占51.32%(39/76),阴性占48.68(37/76)。ERα阴性患者中LRP16核阳性率(86.49%,32/37)明显高于ERα阳性患者(48.71%,19/39)(P<0.01),且LRP16在胞核中表达与EEC患者的手术病理分期无显著相关性(P>0.05)。在胞浆中分布的LRP16与ERα表达无关(P>0.05),但胞浆中的LRP16与EEC的手术病理分期呈明显的负相关(P<0.01),与组织学分级则无显著相关性(P>0.05)。在LRP16核浆均阳性的病例中,ERα阴性患者(81.08%,30/37)的比例明显高于ERα阳性患者(48.72%,19/39)(P<0.01);且LRP16在核浆中均有表达与EEC患者的手术病理分期及组织学分级无显著相关性(P>0·05)。在EEC肿瘤细胞中核、浆分布的LRP16着色强度呈负相关(P<0.05)。结论:LRP16在EEC细胞中均有表达,但其亚细胞分布与ERα状态密切相关,LRP16在胞浆中的表达可能提示预后良好。

卵巢上皮肿瘤中LRP16蛋白表达的意义及其与ER、PR、E-cadherin的关系

目的:探讨LRP16在上皮性卵巢肿瘤中的定位,分析浆液性卵巢癌中LRP16与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达间的相关性及临床意义。方法:免疫组化染色法检测5例浆液性交界性卵巢癌、6例子宫内膜样腺癌、5例透明细胞癌、46例浆液性卵巢癌中LRP16、ER、PR和E-cadherin的表达。结果:LRP16在癌细胞胞浆和胞核内均有分布,但在浆液性交界性卵巢癌细胞核内的表达(0.0%)明显低于浆液性卵巢癌中(58.7%)(校正χ2=4.103,P=0.04),而浆内表达的差异则无统计学意义(分别为20.0%、52.2%);LRP16在核内的表达强度与浆液性卵巢癌临床分期的高低存在统计学意义的正相关性(r=0.348,P<0.05);子宫内膜样腺癌、透明细胞癌、浆液性卵巢癌三种类型间核内阳性率(分别为66.7%、60.0%、58.7%)和胞浆内阳性率(分别为50.0%、40.0%、52.2%)的差异均无统计学意义(P>0.05);LRP16与ER、PR以及E-cadherin的表达均无明显相关性(P>0.05)。结论:核内LRP16的表达可能与浆液性卵巢癌的病理进程有关,对卵巢癌的临床诊断和病情进展的预测可能具有一定的指导意义。

癌与非癌性胃、结肠、直肠组织中胃动素含量的测定

本文应用RIA法及CEA-EIA法对26例胃、结肠、直肠癌组织与非癌组织胃动素,CEA含量测定。胃、结肠、直肠癌组织胃动素明显高于非癌组织(P<0.001和P<0.01),CEA值,癌组织中CEA明显高于非癌组织(P<0.01)。胃动素作为胃肠道肿瘤的诊断是有价值的。

自体CIK细胞联合化疗治疗老年急性髓细胞白血病的临床研究

本研究旨在评价自体CIK细胞联合化疗治疗老年人急性白血病的有效性和安全性。采集5例老年急性白血病患者外周血单个核细胞,在体外经干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、抗CD3单克隆抗体诱导成CIK细胞,回输至患者体内,28 d为1个疗程。观察治疗前后细胞免疫功能、感染发生、血红蛋白和输血依赖以及对自然病程的影响。结果表明:5例患者共接受46个周期的CIK细胞输注治疗,回输后所有患者均未出现不良反应;CIK细胞治疗后CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例显著增高(P<0.05);CIK细胞治疗可以有效减少AML患者的感染发生(P<0.05),缩短高热持续时间(P<0.05);在疾病稳定期,CIK细胞输注可以减少患者红细胞的输注量(P<0.05),稳定血红蛋白水平;CIK细胞输注虽不能改变病程的转归,但在患者疾病进展期以及终末期,采用化疗联合CIK治疗可使患者病情一度平稳,延长生存时间。结论:自体CIK细胞联合化疗对本组5例老年急性髓系白血病安全有效。

缺氧-再给氧刺激培养的脑微血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1

在缺氧－再给氧条件下，观察了体外分离培养的大鼠脑微血管内皮细胞表面粘附分子ＩＣＡＭ－１的表达及中性粒细胞与内皮细胞粘附作用的改变。结果表明，单纯缺氧１０ｈ不引起内皮细胞ＩＣＡＭ－１的上调，再给氧６ｈＩ－ＣＡＭ－１的表达升高（Ｐ＜０．０１），再给氧１２ｈ表达量增加了１００％（Ｐ＜０．０１），此时中性粒细胞与内皮细胞的粘附作用也明显增强（Ｐ＜０．０１）。缺氧前用盐酸川芎嗪（２ｍｇ／ｍｌ）预处理内皮细胞可阻断ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０１），同时也可降低ＰＭＮ与内皮细胞的粘附（Ｐ＜０．０５）。结果提示，脑微血管内皮细胞在缺氧－再给氧刺激下可自身调节Ｉ－ＣＡＭ－１的表达，为中性粒细胞与内皮细胞的粘附提供特异的结合位点。

多发性硬化相关T细胞免疫机制的研究进展

多发性硬化是中枢神经系统常见的免疫炎症性脱髓鞘疾病,发病机制主要以T细胞介导的细胞免疫为主,特别是髓鞘特异性CD4、CD8 T细胞起着关键作用。随着国内外对免疫性疾病的研究逐渐深入,对T细胞各种亚型,如Th17、Treg、CD8 T细胞,以及它们在中枢神经系统中各自作用的特点有了新的认识。现将它们对中枢神经系统的炎症和损害的分子机制的研究综述如下。

晚期儿童神经母细胞瘤的临床和预后分析

目的探讨晚期儿童神经母细胞瘤的临床特点、治疗策略和预后。方法对63例确诊为III～IV期的神经母细胞瘤患者的临床资料进行回顾性分析,有60例患者接受了手术切除和(或)化疗和(或)局部放疗,其中14例患者还接受了自体外周血造血干细胞移植治疗。结果63例患者中,男女比例为2.7∶1,中位年龄4岁;常见首发症状为发热、腹痛、腹部肿块、腿痛或关节疼痛;常见原发部位为肾上腺(38%)、腹膜后(35%)、后纵隔(17%)、盆腔(6%)和颈部(2%);确诊时常见转移部位为局部(41%)和(或)远处(37%)淋巴结、骨髓(60%)、骨(46%)、肝脏(16%)。中位生存时间32.7个月,2年生存率44.3%。年龄>1岁(P<0.05)、血清神经元特异性烯醇化酶>100mg/L(P<0.05)、血清乳酸脱氢酶>1500U/L(P<0.01)、血清铁蛋白>150mg/L(P<0.05)是预后不良指标。完整切除原发肿瘤可延长患者总体生存时间(P<0.05);强烈化疗联合自体外周血造血干细胞移植的综合治疗可延长患者总体生存时间(P<0.01)。结论晚期儿童神经母细胞瘤临床表现多样,预后差,熟悉其临床和实验室检查特点尽早明确诊断、完整切除原发肿瘤、进行自体外周血造血干细胞移植支持下的强烈化疗的综合治疗有利于改善预后。

不同方法制备脂质体^(125)I-IL-8包封率的比较

本文用四种不同的方法制备脂质体 ,同时包裹12 5I -IL - 8。对不同方法制备的脂质体包裹12 5I -IL - 8的包封率进行对比。结果表明 :机械分散法、钙融合法、反相蒸发法制备的脂质体对12 5I -IL - 8的包封率依次增大。而用反相蒸发法和钙融合法联合制备的脂质体对12 5I -IL -

三氧化二砷诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的线粒体机制

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡效应及其对线粒体膜电位的影响。方法比色法观察As2O3对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响;AnnexinⅤ荧光探针和流式细胞仪检测早期凋亡细胞;罗丹明123(Rhodamine123)荧光探针染色后,荧光显微镜下观察活细胞线粒体改变,并经流式细胞仪分析线粒体膜电位变化。结果As2O3明显抑制SK-N-SH细胞的增殖;As2O3诱导SK-N-SH细胞早期凋亡时线粒体膜电位降低。结论降低线粒体膜电位可能是As2O3诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的机制之一。

改良的心肌微血管内皮细胞分离培养方法

目的:建立一种细胞获得率高并且操作简单的心肌微血管内皮细胞体外培养体系。方法:无菌条件下分离左心室,0.1%胶原酶消化6min后,加0.1%胰蛋白酶继续消化4min,用100μm滤网过滤消化液,离心收集滤液中血管段进行培养。用内皮细胞的重要标记物VIII因子相关抗原鉴定细胞,并通过3H-TdR掺入法观察培养细胞对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的反应性。结果:细胞的获得率为1.2×106细胞/g心肌组织,显微镜观察培养细胞具有内皮细胞生长特性:单层“卵石样”排列特征;VIII因子免疫细胞化学染色呈阳性;证实获得的是内皮细胞。bFGF刺激后3H-TdR掺入率与对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:本研究利用改良的酶消化法,缩短了消化时间,提高了细胞获得率,同时培养的内皮细胞对生长因子具有良好反应性,表明该方法是一种比较理想的体外心肌微血管内皮细胞培养体系。

酸敏脂质体的制备及其生物学活性

目的 对不同方法制备酸敏脂质体进行包封率测定及形态学观察 ,探讨酸敏脂质体包裹反义寡核苷酸的生物学效应。方法 测定四种不同方法制备包裹1 2 5I IL 8脂质体的包封率 ;在超高倍显微分析仪下观察形态结构。用包裹细胞磷脂酶A2 (cPLA2 )反义寡核苷酸的酸敏脂质体转染U937细胞 ,提取细胞RNA ,采用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ;免疫印迹 (Westernblot)法检测cPLA2 蛋白的表达。结果 反相蒸发法与钙融合法联合制备的酸敏脂质体具有良好地包封率和形态结构 ,经酸敏脂质体包裹cPLA2 反义寡脱氧核苷酸可明显抑制cPLA2基因及蛋白的表达。

大鼠窒息心脏骤停期间脑皮质β肾上腺素能受体和血中NO的变化

目的研究心脏停搏期间脑皮质β肾上腺素能受体(β受体)的变化,检测心脏停搏前后血液NO浓度变化,探讨其意义。方法采用放射性配基结合分析方法,检测大鼠在窒息心脏停搏期间脑皮质β受体的变化。采用化学发光法,检测动物心脏停搏前后血中NO浓度的变化。将动物随机分为正常对照(A),手术对照(B),窒息10min(C)、20min(D)和30min(E)5组,每组6只。结果β受体数量D和E组分别与A、B、C组比较,差异极其显著(P<0.01)。各组间受体亲和力无明显变化。C组血中NO浓度与A、B组比较,差异极其显著(P<0.01)。结论在窒息心脏骤停早期,脑皮质β受体数量无明显变化,随着心脏停搏时间延长,其数量明显增加。心脏停搏以后,与心脏停搏前比较,血中NO浓度明显升高。

地尔硫抑制急性心肌缺血—再灌注损伤及对心肌保护作用的实验研究

目的:评价地尔硫(艹卓)的药物后处理,与缺血后处理相比,对于抑制心肌缺血—再灌注损伤及保护心肌组织的作用及相关机制。方法:72只实验大鼠随机分为6组,每组12只,包括假手术组、对照组、缺血后处理组、地尔硫(艹卓)1组(D1组)、地尔硫(艹卓)2组(D2组)、地尔硫(艹卓)3组(D3组)。假手术组:心脏只穿针不结扎;对照组:再灌注前由右颈动脉插管至主动脉窦部,注射0.9%生理盐水0.4 ml,再灌注3 h;缺血后处理组:心肌缺血45 min后给予4轮30 s缺血、30 s再灌注处理;地尔硫(艹卓)1组(D1组):再灌注前30 s注射50%地尔硫(艹卓)注射液700μg/kg,2 min内注射完毕;地尔硫(艹卓)2组(D2组):首次注射同D1组,之后以5μg/(kg·min)的速度维持推注2 h;地尔硫(艹卓)3组(D3组):首次注射后以10μg/(kg·min)的速度维持2 h。结果:与对照组相比,再灌注3 h后地尔硫(艹卓)各组心肌坏死面积显著减少、血清肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)水平较低、组织一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平较低,超氧化物歧化酶(SOD)水平较高,作用强度与缺血后处理组相近,D2组、D3组的左心室内压最大收缩和舒张变化速率(±dp/dt_(max))均有显著提高。结论:在急性心肌缺血充分再灌注前,应用地尔硫(艹卓)行药物后处理,可减少心肌梗死面积、改善心功能、减低心肌组织内自由基水平,作用效果与灌注时限、剂量有一定关系。