自动微生物诊检仪在细菌鉴定和药敏试验中的评价

Vitek 公司生产的自动微生物诊检仪(AutoMicrobic System 简称AMS),能分别或同时完成临床微生物的诊检、鉴定、计数和药敏等多种试验.我们将临床分离出的菌株用AMS 与常规法做了对照研究,现将有关资料介绍如下.一、仪器特点1.功能多它可以做革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性菌、奈瑟氏菌/嗜血杆菌、厌氧菌、酵母菌、芽孢杆菌的鉴定,尿液中细菌直接鉴定及计数。

临床血液分离大肠埃希菌株耐药性及生物被膜形成分析

目的探讨该院血流感染产超广谱酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(ECO)检出率及其对常用抗菌药物的耐药性及生物被膜形成能力。方法采用法国生物梅里埃公司的Vitek2-Compact全自动微生物分析仪进行鉴定和药物敏感性分析,采用结晶紫半定量方法检测菌株的生物被膜形成能力。结果 92株ECO临床血液分离菌株中,产ESBLs菌株53株(占57.61%),ESBLs阴性菌株39株(占42.39%)。对3类以上抗菌药物耐药ECO 73株(占79.35%),其中,产ESBLs菌株52株,占总菌株数的56.52%,占产ESBLs菌株数的98.11%。耐药率最高的为氨苄西林(94.57%),其次为头孢唑啉(71.74%)和氨苄西林/舒巴坦(67.39%);环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均在60%以上。对于临床常用的氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类的妥布霉素和单酰胺类抗菌药物,与ESBLs阴性菌株相比,产ESBLs菌株的最小抑菌浓度(MIC)值显著升高,耐药率显著升高(P<0.05)。而对头霉素类、呋喃类、氨基糖苷类的庆大霉素和阿米卡星、含酶抑制剂的哌拉西林/他唑巴坦和碳青霉烯类抗菌药物的敏感性ESBLs阳性组与ESBLs阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。96.74%的ECO临床血液分离株具有生物被膜形成能力,生物被膜形成量以中量为主。结论该院ECO血液分离菌株产ESBLs比例高,生物被膜形成能力强,呈现多药耐药的特征。

实验室主任在临床微生物检验中的作用及培训途径探讨

临床微生物学的快速发展,使实验室主任面临机遇和挑战。临床微生物实验室主任的作用是向临床提供技术及医疗咨询服务,参与多层次的教育培训计划,开展临床微生物学相关领域的科学研究,对实验室运作中的人员、设备、试剂耗材、方法、质量、信息、项目、环境、安全、感染控制、公共卫生与反恐等工作进行全方位管理。

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌AmpCβ内酰胺酶的表型检测

目的比较研究临床实验室对AmpCβ内酰胺酶(AmpC酶)的表型检测方法,了解对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产生AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分布情况。方法利用加与不加3-氨基苯酚硼酸(APB)的头孢他啶、头孢噻肟和头孢西丁纸片进行APB纸片增强试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶,并与Tris-EDTA纸片试验检测AmpC酶的结果进行比较。用CLSI纸片确认实验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生的ESBLs。结果APB纸片增强试验与Tris-EDTA纸片法检测结果完全一致。对头孢西丁不敏感的62株肺炎克雷伯菌和74株大肠埃希菌中,分别检测到产AmpC酶41株(66.1%)和33株(45.0%)。AmpC酶和ESBLs同时存在的肺炎克雷伯菌占51.6%,单产AmpC酶和单产ESBLs的肺炎克雷伯菌分别为14.5%和21.0%;而大肠埃希菌则以单产ESBLs为主,占40.5%,单产AmpC酶及同时产生AmpC酶与ESBLs的分别占20.3%和24.3%。结论APB纸片增强试验和Tris-EDTA纸片试验操作简单,应用方便,成本低廉,均可用于临床实验室检测产AmpC酶的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。

铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排表型筛选和外排基因检测

目的研究解放军总医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排系统,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法采用外排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺)与喹诺酮类抗生素,以微量肉汤稀释法测定加与不加外排泵抑制剂时环丙沙星与左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)值,并计算MIC值的变化,根据加与不加外排泵抑制剂MIC值降低3个稀释度及以上筛选主动外排表型阳性菌株;PCR扩增外排表型阳性菌的耐药基因oprM、mexB和mexR,并对3株菌进行mexR基因测序分析;RT-PCR检测oprM基因的mRNA水平,分析耐药基因的表达情况。结果苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺能极大的降低左氧氟沙星和环丙沙星的MIC值,70株多重耐药铜绿假单胞菌中46株表型阳性(65.7%),其中PCR检测oprM、mexB和mexR基因同时阳性菌株42株(91.3%),仅oprM基因阳性2株(4.3%),oprM、mexB和mexR基因均阴性2株(4.3%)。RT-PCR产物测定A值(A260/A280)与PAO1对照阳性菌株13株,以PAO1的oprM/rpoD的A值为对照阳性菌株4株,同时满足A值(A260/A280)和oprM/rpoD比值均高于PAO1的菌株3株。测序结果与GenBank中已知的mexR基因比对,其中2株同源性为100%,1株第434位核苷酸插入2bp(AT)。结论中国人民解放军总医院多重耐药铜绿假单胞菌大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排泵过度表达相关。

成人腺病毒B组55型重症肺炎11例诊治分析

目的分析成人腺病毒B组55型重症肺炎患者的临床诊治资料,总结其临床特征及诊治方法。方法回顾性分析2013年4—5月本科收治的经病原学确诊的,符合美国感染疾病学会/美国胸科协会2007年关于成人社区获得性肺炎(CAP)重症肺炎诊断标准的11例成人腺病毒B组55型重症肺炎患者的临床诊治资料。结果 11例患者均为男性,年龄15～41岁,平均(28.5±5.3)岁。9例来自河北省保定地区,其中4例来自同一个县,呈一定的人群、地域聚集分布。临床症状重,11例均有高热、咳嗽、咳痰、胸闷,4例出现了精神障碍,4例伴腹泻。11例患者C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)、降钙素原(PCT)水平及中性粒细胞分数均升高;10例清蛋白(ALB)降低;10例乳酸脱氢酶(LDH)升高;9例天冬氨酸氨基转移酶(AST)升高;8例丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高;7例肌酸激酶(CK)升高。入院时11例均为Ⅰ型呼吸衰竭,治疗过程中有7例发展为Ⅱ型呼吸衰竭。胸部CT检查示11例均以多肺叶受累的肺实变为主要特征,受累肺叶均多于3叶,其中4例出现空洞,1例出现纵隔气肿、皮下积气。均给予利巴韦林、甲泼尼龙及抗生素等治疗,8例痊愈出院,3例死亡。结论腺病毒B组55型引起的成人重症肺炎临床症状重,除高热、咳嗽等呼吸系统症状外,还伴发腹泻、精神症状等肺外表现。肺部CT以多肺叶受累的肺实变为主要特征,还可出现纵隔、皮下气肿。实验室检查指标中炎性指标升高(CRP、IL-6、PCT及中性粒细胞分数等),ALT、AST、CK、LDH升高,ALB降低。临床工作中发现具有上述特点的患者时需注意进行腺病毒B组55型的相关检查,尽早明确诊断,制定相应的治疗措施,以提高该病的治愈率。

高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选

目的初步筛选高致龋性变异链球菌临床分离株。方法通过检测41株变异链球菌临床分离株的产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力,初步筛选出高致龋性变异链球菌临床分离株。结果不同的变异链球菌临床分离株体外致龋能力不同,其中3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较高,提示可能为高致龋性变异链球菌临床分离株,另外3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较低,提示可能为低致龋性变异链球菌临床分离株。结论通过筛选可能获得了高致龋性变异链球菌临床分离株。

多重PCR方法检测多耐药鲍曼不动杆菌基因型

目的建立一种适于临床微生物实验室快速检测多耐药鲍曼不动杆菌基因的多重PCR方法。方法筛选临床分离鉴定的多耐药鲍曼不动杆菌105株;用热煮沸法提取DNA,采用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增OXA酶基因(blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like)和整合酶基因(intI1,intI2),扩增产物经凝胶成像系统分析。结果105株多耐药鲍曼不动杆菌中,76株是blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+intI1基因型,18株是blaOXA-51-like+intI1基因型,10株是blaOXA-51-like+blaOXA-23-like基因型,1株是blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+blaOXA-58-like基因型。未检测出携带有blaOXA-24-like和intI2基因的菌株。结论多耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及流行趋势与其携带的OXA酶基因和整合酶基因相关。

不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定

目的分离鉴定变异链球菌临床分离株。方法收集高龋患者和无龋健康人口腔中牙菌斑标本进行厌氧培养,通过细菌形态学观察、生物化学鉴定、自动微生物分析系统分析、聚合酶链反应(PCR)扩增变异链球菌基因的特异性片段表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ(spaP)、葡糖基转移酶B(gtfB)和葡聚糖酶(dexA)以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定。结果从32例临床受试者口腔中分离获得46株变异链球菌临床分离株,经生物化学,自动微生物分析系统,变异链球菌的特异性基因spaP、gtfB和dexA的PCR扩增均鉴定为变异链球菌,基因分型发现其中5株临床分离株的基因型与其他菌株相同。结论获得41株不同基因型变异链球菌临床分离株。

定量PCR方法用于恶性血液病患者侵袭性真菌感染的诊断研究

本研究建立恶性血液病合并侵袭性真菌感染患者的外周血真菌定量PCR检测方法并初步评价其诊断价值。选取真菌高度保守的区段序列18Sr DNA-ITS1区设计引物及探针,提取真菌菌株DNA进行定量PCR验证引物及探针的敏感性和特异性,利用pGEM-T质粒制备真菌DNA标准品并对患者血液中真菌DNA进行定量测定。结果表明:12株曲霉菌和14株念珠菌定量PCR结果均为阳性;真菌在血浆、单个核细胞和全血中分布差异无统计学意义(p>0.05)。真菌定量PCR的ROC曲线分析显示,用于临床诊断侵袭性真菌感染的诊断界值为8copies/ml全血,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为0.84,0.9,0.955,0.692,0.679。结论:真菌定量PCR检测可作为恶性血液病患者侵袭性真菌感染的早期诊断手段。

致血流感染的肠球菌耐药现状及分子流行特征的研究

目的了解引起血流感染肠球菌的种类、对高浓度氨基糖苷类的耐药性及耐万古霉素肠球菌的耐药基因和分子流行特征。方法选取2008—2012年发生肠球菌血流感染患者的血培养分离株,进行菌种鉴定和药敏试验。用PCR方法对其中的耐万古霉素肠球菌的耐万古霉素基因进行检测以,脉冲场凝胶电泳对耐万古霉素肠球菌进行分子分型。结果在5年间共分离到肠球菌属细菌211株中,屎肠球菌161株,占76.3%,粪肠球菌50株,占23.7%。经琼脂稀释法筛选出耐高浓度氨基糖苷类肠球菌144株,占71.6%。检测到耐万古霉素的肠球菌9株,均携带有vanA基因,未检测到vanB基因。脉冲场凝胶电泳分型的结果显示,耐万古霉素的肠球菌各菌株具有不同的分子表型。多位点序列分型的结果显示,9株耐万古肠球菌株分别属于ST78(7/9)、ST192(1/9)和ST804(1/9)型。结论肠球菌引起的血流感染以屎肠球菌为主,呈多重耐药性,致血流感染的耐万古霉素肠球菌之间没有相似性,其中的8株耐万古霉素肠球菌的多位点序列分型属于CC17克隆复合体。

幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性研究

目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染蒙古沙鼠模型胃黏膜菌群多样性进行研究,探讨Hp感染与胃内菌群的关系。方法建立Hp感染的蒙古沙鼠模型,空白对照组、阴性对照组、直接感染组和预处理感染组各15例,4周后采集胃黏膜样本,同时检测HP定植率,并提取细菌基因组DNA,采用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE)对黏膜局部菌群进行指纹图谱分析,并对特异性条带进行测序鉴定分析。结果预处理感染组感染率(93.3%)与直接感染组感染率(26.7%)有明显差异(P<0.05);各实验组PCR-DGGE指纹图谱分析显示条带数量,空白对照组(21.6±2.5)、阴性对照组(3.3±1.1)、直接感染组(14.6±2.4)和预处理感染组(7.2±2.2),经统计学分析,各组间均有明显差异(P<0.05),提示蒙古沙鼠各组间菌群多样性存在显著的差异性。结论 Hp感染与胃黏膜菌群结构的变化密切相关。

铜绿假单胞菌mexA基因原核表达载体的构建

目的构建mexA基因的原核载体,为进一步表达MexA蛋白奠定基础。方法从临床分离多重耐药的铜绿假单胞菌抽提DNA,经PCR扩增出mexA1基因与PUC18克隆载体连接,PCR、酶切及测序鉴定,再以PUC/mexA1质粒为模板PCR扩增mexA目的基因,克隆至质粒pQE30中,构建表达质粒pQE30/mexA,构建的表达质粒pQE30/mexA转化大肠杆菌M15,培养后提取纯化重组质粒pQE30/mexA酶切鉴定。结果获得长约1.5 kbPCR mexA1产物,酶切结果显示所构建的重组质粒PUC/mexA1已成功地克隆了mexA1(1.5 kb)基因,序列分析结果与PAO1/mexA1序列相同,构建的表达质粒pQE30/mexA酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因mexA(1.2 kb)片段相符。结论含mexA(1.2 kb)基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达MexA蛋白奠定了基础。

造血干细胞移植后侵袭性真菌感染的诊断和治疗进展

侵袭性真菌感染(invasive fungal infections,IFI)是造血干细胞移植(HSCT)后常见的严重并发症之一,以念珠菌感染和曲霉菌感染最为常见。由于免疫抑制剂的应用、清髓预处理、急性或慢性移植物抗宿主病(GVHD)、广谱抗生素的长期应用、巨细胞病毒(CMV)感染等因素,IFI呈逐渐增多的趋势。侵袭性霉菌感染(invasive mould infection)已成为造血干细胞移植后IFI发病率和死亡率增加的主要原因。IFI早期诊断方法包括临床检查、实验室检测和特征性影像学检查。目前伏立康唑是确诊IFI的一线治疗用药,唑类或两性霉素B联合棘白霉素类抗真菌药也显示出较好治疗效果,有希望成为一项未来的抗真菌治疗策略。本文就造血干细胞移植后IFI的早期临床诊断和治疗问题作一综述。在IFI早期诊断方面讨论了实验室诊断技术,包括GM试验,G试验和PCR技术等;在IFI预防和治疗方面讨论了预防治疗,经验治疗,优先治疗,确诊后治疗,联合治疗和免疫治疗等。

24例真菌菌血症的临床及病原学分析

本文报告由酵母菌引起的真菌血症24例,皆由血培养证实。病原菌不少于10种,70.8％为念珠菌,但白色念球菌仅4株。本组病人的大部分有严重的基础病。24例中10例为血液病,7例是心血管及腹部手术后,1例是先天免疫缺陷症,其他6例。9例死亡(死亡率37.5％)。结果表明,两性霉素B及咪康唑治疗有效。

新发现的获得性金属β-内酰胺酶GIM-1和SIM-1

金属β-内酰胺酶(简称金属酶,MBL),水解底物广泛,但相对其他β-内酰胺酶是研究较少的一类酶。由于碳青霉烯类抗生素的广泛应用,使一些沉默的金属酶被激活,产酶菌株增多,一些新的金属酶基因不断被发现,尤其是由整合子介导的金属酶基因的存在使得临床治疗失败。将从新的金属酶基因的发现与传播、酶动力学参数及分子生物学特点等几方面,对新发现的获得性金属酶GIM-1和SIM-1作一综述。

用Vitek2 AES分析产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷修饰酶

目的分析产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素耐药性及产生的修饰酶种类。方法32株经检测产ESBLs大肠埃希菌用Vitek2系统AST N020药敏试验卡检测,经Vitek2AES(高级专家系统)对庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素结果分析,推测可能存在的氨基糖苷修饰酶。结果产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率为68.75%,妥布霉素为18.75%,但中介为43.75%,对阿米卡星耐药率为6.25%。推测主要氨基糖苷修饰酶为ANT(2″)和AAC(3)Ⅱ,引起庆大霉素和妥布霉素耐药。结论检测氨基糖苷修饰酶可为临床提供更准确的氨基糖苷抗生素治疗信息,以减少此类抗生素耐药性的发生。

铜绿假单胞菌mexA基因的克隆及其序列分析

目的克隆铜绿假单胞菌临床菌株mexA基因并进行序列分析。方法从临床分离多重耐药的铜绿假单胞菌抽提DNA,经PCR扩增出mexA基因与PUC18克隆载体连接,对重组质粒进行测序验证。结果成功地克隆了mexA基因,重组质粒(PUC/mexA)经测序与Genebank检索的mexA基因序列进行对比证实为99.9%同源。结论所构建的铜绿假单胞菌临床菌株mexA基因克隆适于进一步的克隆表达。

斐氏棒状杆菌引起败血症1例

棒状杆菌（Corynebacterium）广泛存在于水、土壤中,是人类口腔、鼻腔、外阴和皮肤的常居菌（resident flora）。从临床送检标本中分离出的棒状杆菌,通常被认为是污染菌。