补肾益髓法治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿的效果及对抗氧化基因表达的影响

目的探讨补肾益髓法治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-地中海贫血)的疗效及作用机制。方法观察54例β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿补肾益髓法治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、网织红细胞计数(Ret)、胎儿血红蛋白(Hb F)的改变;通过实时定量PCR方法研究患者骨髓有核细胞中珠蛋白编码基因表达量变化以及抗氧化基因的响应情况。结果补肾益髓法治疗后,重型和中间型患者各项血液学参数均有提高,与治疗前比较差异有显著性。重型β-地中海贫血患儿组的Hb、RBC、Ret水平均显著上升(P<0.05),而中间型β-地中海贫血患儿组仅有Hb、RBC水平显著上升(P<0.05)。珠蛋白mRNA变化比值,即γ/(β+γ)mRNA比值在两组患者中均上升,且在重型β-地中海贫血患儿组显著上升(P<0.05)。治疗后发现抗氧化基因的响应,重型β-地中海贫血患儿组骨髓有核细胞超氧化物歧化酶(SOD1),谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC),硫氧还蛋白(TRX)基因表达均显著高于治疗前(P<0.05);中间型β-地中海贫血患儿组骨髓有核细胞GCLC、TRX基因表达也显著高于治疗前(P<0.05)。治疗前后BTB-CNC异体同源体1(BACH-1)基因表达无显著差异。结论补肾益髓法可以改善β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿的临床症状,升高患儿γ珠蛋白基因的表达,有效激活患儿体内抗氧化基因的响应,这可能是补肾益髓法治疗本病的分子机制之一。

脂多糖干预小胶质细胞炎症模型中血小板生成素与白细胞介素-6的表达及其相关性

目的探讨脂多糖(LPS)干预后小胶质细胞内血小板生成素(TPO)与IL-6的表达及其相关性。方法体外培养BV2细胞,以LPS干预小胶质细胞12～24 h,实验分为6组。空白12 h组:BV2细胞正常培养12 h,不添加任何干预因素;LPS 0.5 mg.L-112 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养12 h,并使其终质量浓度为0.5 mg.L-1;LPS 1.0 mg.L-112 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养12 h,并使其终质量浓度为1.0 mg.L-1;空白24 h组:BV2细胞正常培养24 h,不添加任何干预因素;LPS 0.5 mg.L-124 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养24 h,并使其终质量浓度为0.5 mg.L-1;LPS 1.0 mg.L-124 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养24 h,并使其终质量浓度为1.0 mg.L-1。采用ELISA法检测各组细胞内IL-6及TPO水平,免疫印迹法检测细胞内IL-6及TPO蛋白表达水平。结果 LPS处理后明显增加BV2细胞内TPO及IL-6蛋白表达水平,其中0.5 mg.L-1LPS干预细胞12 h时,TPO及IL-6水平处于最高峰;1.0 mg.L-1LPS干预细胞12 h时,TPO及IL-6蛋白水平增加最明显,且二者表达呈显著正相关(r=0.876,P<0.01)。结论 TPO及IL-6参与LPS诱导的BV2细胞炎症损伤的病生理过程,且二者的表达存在明显正相关。

脂多糖干预小胶质细胞后细胞内促血小板生成素与炎症因子的表达

目的探讨脂多糖(LPS)干预小胶质细胞后细胞内促血小板生成素(TPO)及炎症因子的表达。方法将BV2细胞分为6组。1.空白12 h组:BV2细胞正常培养12 h,不添加任何干预因素;2.LPS0.5 mg.L-112 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养12 h,并使其终质量浓度为0.5 mg.L-1;3.LPS1.0 mg.L-112 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养12 h,并使其终质量浓度为1.0 mg.L-1;4.空白24 h组:BV2细胞正常培养24 h,不添加任何干预因素;5.LPS0.5 mg.L-124 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养24 h,并使其终质量浓度为0.5 mg.L-1;6.LPS1.0 mg.L-124 h组:在培养好的BV2细胞内添加预先配好的LPS溶液共同培养24 h,并使其终质量浓度为1.0 mg.L-1。采用ELISA法检测BV2细胞内炎症因子(IL-1、IL-6、NF-κB)和TPO的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞内IL-1 mRNA、IL-6 mRNA、NF-κB mRNA及TPO mRNA表达水平。结果 LPS0.5 mg.L-1和1.0 mg.L-1干预BV2细胞后12 h和24 h,IL-1、IL-6、NF-κB和TPO表达水平及其mRNA水平均较空白组升高,且12 h组高于24 h组,但其差异均无统计学意义(Pa>0.05)。TPO表达水平与IL-1、IL-6、NF-κB及其mRNA水平的表达均呈显著正相关(Pa<0.01)。结论 LPS干预小胶质细胞后IL-1、IL-6、NF-κB和TPO表达升高,参与炎症、凋亡和神经元保护等多种调控机制。

不同浓度hUCMSCs对重度烧伤大鼠急性肺损伤的保护作用初探

目的:通过气管内给药的方法比较不同浓度人脐带间充质干细胞气管内移植对重度烧伤致急性肺损伤大鼠的保护作用。方法:建立50%面积全层烫伤大鼠模型,将75只成熟雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、生理盐水组(B组)、1×10~5HUCMSCs移植组(C)、5×10~5HUCMSCs移植组(D)、1×10~6HUCMSCs移植组(E),每组15只,B组及移植组(C、D、E组)烫伤后立即液体复苏,B组烫伤后气管内滴注0.2 m L生理盐水,移植组气管内滴注不同浓度h UCMSCs,分别在移植后的天第1、3、7天留取大鼠肺组织标本,HE染色观察肺组织病理变化,MPO、CD68免疫组化染色观察肺组织中性粒细胞及肺巨噬细胞阳性表达情况。结果:肺组织病理切片可见:A组各时间点肺泡腔清晰,肺泡结构完整,偶见少量炎性细胞。烫伤后第1天,B组及移植组(C、D、E组)肺泡间隔增厚,大量红细胞漏出及炎性细胞浸润。烫伤后第3天,各组肺泡结构较前清晰,炎性细胞浸润及红细胞漏出较第一天减少,与B组相比移植组肺泡结构清晰,间隔变薄,移植组各组间改变不明显。烫伤后第7天,移植组肺组织损伤较B组明显减轻,E组损伤肺组织恢复最为明显。MPO染色显示:与A组相比,阳性细胞数在烫伤后第1天明显增加(P<0.05),但各组之间无明显差异。在烫伤后第3天,与B组相比,移植组阳性细胞数减少明显(P<0.05),E组阳性细胞减少明显(P<0.05);在烫伤后第7天E组阳性细胞数量较其他组显著减少(P<0.05)。CD68染色显示在烫伤后第1天各组阳性细胞显著增多(P>0.05),在烫伤后第3天移植组阳性细胞数减少(P<0.05),但各移植组间无明显差异,烫伤后第7天移植组阳性细胞数量较B组明显减少(P<0.05),E组较C、D组阳性细胞减少有显著差异(P<0.05)。结论:气管内移植HUCMSCs能修复重度烧伤后损伤的肺组织,减少肺组织中性粒细胞及巨噬细胞的浸润,且1×10~6HUCMSCs移植效果更明显。

儿童囊性纤维化一例并文献复习

目的探讨中国儿童囊性纤维化（cystic fibrosis，CF）的特点，提高儿科医生对儿童CF的认识和诊断意识，减少漏诊和误诊。方法分享1例确诊CF女童的诊治经过，文献复习71例CF患者的临床和基因突变特点。结果6岁女童，因＂反复咳嗽、咯痰、脂肪泻伴多汗6年，加重20 d＂入院，多次痰培养提示绿脓杆菌阳性，两次汗液氯离子浓度阳性，肺CT示双肺支气管扩张合并感染，肝脏CT示弥漫性病变，骨龄相当于3岁半儿童。2个CFTR基因突变（核酸突变263T〉G，exon 3，氨基酸位点：p.L188X，1393；以及exon 4-6杂合性缺失）。予美罗培南抗感染，雾化吸入妥布霉素、乙酰半胱氨酸、布地奈德；高热卡饮食，补充胰酶、脂溶性维生素A和D以及钙剂等治疗18 d，咳嗽咳痰及脂肪泻基本消失，体重增加1 kg。出院后持续雾化吸入妥布霉素、口服胰酶等治疗，随访1年体重增长，未再出现呼吸道感染。近40年文献报道71例华裔CF患者，其中41例为近2年报道；53例为基因诊断，仅有1例是高加索人种最常见的AF508突变；出现频率较高的c.1766＋5G〉T（6例）和2909 G〉A（10例），1989＋5G〉T、304G〉A、263T〉G、C.1657C〉T在高加索人中并非常见突变。结论依据典型临床特点和汗液分析、基因检测结果，诊断CF并不困难；中国人CF的报道例数可能远远低于CF的真实发病率；中国和高加索人基因突变不完全相同。