基于离子交换色谱法检测结核治疗性DNA疫苗纯度的方法建立

目的建立并验证结核治疗性DNA疫苗纯度的高效液相色谱测定方法。方法采用TSK gel DNA-NPR(4.6 mm×75 mm,2.5μm)色谱柱,流动相:以20 mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷(pH=9)为流动相A,以20 mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷-1 mol·L^-1氯化钠(pH=9)为流动相B,梯度洗脱,柱温:25℃;流速:0.5 mL·min^-1;检测波长:260 nm。结果质粒DNA在0.5~2.5μg的范围内与峰面积呈良好线性关系,R^2=0.9998,该法专属性、精密度和耐用性良好,检测限为0.001 mg·mL^-1,供试品在24 h内稳定。结论该方法符合检测结核治疗性DNA疫苗纯度的要求,适用于该产品的质量控制。

结核DNA疫苗中卡那霉素残留的半定量检测法的建立及验证

目的用半定量法检测结核DNA疫苗中卡那霉素残留量。方法优化酶联免疫吸附法,验证该方法的准确度、中间精密度、专属性和耐用性。结果该方法能通过吸光度值的比较,判断供试品的含量,平均加样回收率为117%,准确度符合要求,其中间精密度符合要求。卡那霉素和其他3种相同浓度的抗生素(氨苄西林、庆大霉素、四环素)吸光度值相比,阳性率<1%,无交叉反应。当孵育温度和时间改变时,结果的RSD值均<20%。结论建立的方法有较好的准确性、中间精密度、专属性和耐用性,可用于结核DNA疫苗中卡那霉素残留量的检测。

治疗性结核DNA疫苗SDS含量检测

目的应用吖啶橙法来检测治疗性结核DNA疫苗中的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)的残留量。方法将SDS标准液与吖啶橙混合后,经甲苯萃取处理后在波长499 nm测定吸光度值,根据标准曲线计算供试品中SDS的含量。结果SDS浓度在0.005~0.32 mg·m L^(-1)的范围内,相关系数r>0.99,线性关系良好。该法受高温、辅料和核酸的影响较小。3批制剂的SDS残留量均小于0.02 mg·m L^(-1)。结论建立的方法操作简便、专属性、准确度和重现性较好,可用于结核DNA疫苗制剂中SDS残留量的检测。