肿瘤坏死因子α(TNF-α)体外抑制人少突胶质细胞前体细胞的迁移

目的探究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对移植的人成体神经干细胞(NSC)来源少突胶质细胞前体细胞(OPC)迁移能力的影响。方法流式细胞术检测人OPC血小板来源生长因子受体α(PDGFRα)、 ST8α-N-乙酰神经酰胺α2,8-唾液酸转移酶1(ST8SIA1/A2B5)的表达。培养OPC并采用(0、 10、 100、 200)ng/mL TNF-α处理18 h并设置空白对照组,采用CCK-8法检测OPC活性,采用TranswellTM迁移实验检测OPC的迁移能力。结果人成体NSC来源OPC特异性表达PDGFRα(87.9%)和A2B5(40.0%)。10 ng/mL TNF-α处理不影响OPC存活率,(100、 200)ng/mL TNF-α处理明显降低OPC存活率。与对照组相比,10 ng/mL TNF-α明显减少OPC的迁移。结论 TNF-α抑制培养的OPC迁移。

人胎脑神经干细胞来源少突胶质前体细胞冻存方法的优化

目的通过改变不同因素条件优化人胎脑神经干细胞来源的少突胶质前体细胞(OPC)冻存方法,进一步提高复苏活率。方法比较使用消化和机械吹打两种方法收集人OPC,采用人多能干细胞(hPSC)无血清冻存液、含930 mL/L胎牛血清(FBS)和70 mL/L二甲基亚砜(DMSO)的冻存液分别冻存细胞,比较两组冻存前后活率。择优后比较4种不同冻存液(含70 mL/L DMSO和930 mL/L FBS的冻存液,含70 mL/L DMSO、300 mL/L FBS的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、300 mL/L FBS、0.2 mol/mL海藻糖的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、100 mL/L FBS、300 mL/L羟乙基淀粉溶液的OPC完全培养基)、冻存速率(冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温)及冷冻保存时间3个因素对复苏活率的影响。在优选后的冻存方案基础上,复苏后7 d,使用免疫荧光细胞化学染色法比较OPC特异性标志物血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)、ST8α-N-乙酰神经酰胺α2,8-唾液酸转移酶1(ST8SIA1/A2B5)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4/NG2)、增殖相关KI-67抗原(ki67)表达。结果消化组收集细胞,冻存前后活率明显高于机械组;快速降温4组复苏活率均低于30%且无法继续培养,慢速降温4组复苏活率均较高。使用消化法收集细胞,冻存细胞数为2×10^6/mL;使用含海藻糖的冻存液,慢速降温冻存,复苏活率最高;可达(75.73±6.66)%。与对照组相比,复苏后培养组增殖倍数、ki67表达无明显差异,两组均表达PDGFRα、A2B5、NG2。短期和长期储存组复苏活率无明显差别。结论消化液收集OPC,使用含海藻糖的冻存液慢冻快融的方法,适用于人胎脑神经干细胞诱导OPC冷冻保存,复苏后不影响细胞增殖和标志物表达,储存时间对复苏活率无影响。

体外标记CFSE对BV-2细胞活率的影响

探究荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)在不同使用浓度和孵育时间下对BV-2细胞系的影响。方法:采用0、1、2、5、10μmol/L的CFSE标记BV-2细胞系,染料孵育时间分别为10、20、30min,采用流式细胞术检测细胞的阳性率和荧光强度,采用CCK-8法检测在孵育时间为10min的条件下不同浓度CFSE对于24h后细胞活率的影响;选出合适的浓度后CCK-8法检测该条件下的最佳孵育时间,结果:随着CFSE标记浓度提高,细胞标记率也随之提高,而CFSE孵育时间的延长对细胞标记率无明显改变且使细胞活率下降,孵育20和30min对细胞活率有影响(P<0.05),在细胞标记率接近100%后,提高CFSE的浓度,对细胞的活率也有影响,10μmol/L浓度的CFSE孵育10min就降低了细胞的活率。因此,在本研究实验条件下,体外标记浓度5μmol/L并孵育10min可能是CFSE染料标记BV-2细胞的最适条件。