MSP-DHPLC技术检测MGMT基因甲基化的应用评价

目的应用变性高效液相色谱(DHPLC)结合甲基化特异性PCR(MSP),建立一种临床可行的MGMT基因启动子甲基化检测方法,并探讨其灵敏度和特异性。方法选取MGMT甲基化标准品、30例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织作为研究对象,分别应用MSP和MSP-DHPLC方法进行MGMT基因启动子区甲基化检测,比较两种方法的检测灵敏度和肿瘤组织甲基化检测率。结果标准品MGMT甲基化检测,MSP-DHPLC检测灵敏度为1%;MSP检测灵敏度为10%。30例胶质瘤组织用常规MSP和MSP-DHPLC检测,发生甲基化的样本例数分别为15(50%)和24(80%),其中9例样本MSP检测为非甲基化,而MSP-DHPLC检测为甲基化。5例正常脑组织采用两种方法检测均为非甲基化。结论 MSP-DHPLC方法检测MGMT基因甲基化灵敏度高于常规MSP。

应用多重PCR-变性高效液相色谱技术检测大片段重复或缺失突变

目的探讨多重PCR-变性高效液相色谱（PCR-denature high performance liquid chromatography，PCR—DHPLC）技术在假肥大型肌营养不良症和脊肌萎缩症外显子拷贝数异常检测中的应用价值。方法应用多重PCR-DHPLC方法筛查35例假肥大型肌营养不良症患者和6例脊肌萎缩症患者。选择阳性对照和阴性对照进行方法学可靠性检验。结果多重PCR-DHPLC可完全检测出全部阳性对照中重复或缺失片段。35例假肥大型肌营养不良症样本中检测出5例大片段重复，20例大片段缺失，突变检出率为71．4％。6例脊肌萎缩症患者均检测到第7外显子缺失。结论多重PCR-DHPLC分析系统可作为有效筛查大片段重复或缺失突变的检测方法。