低浓度雷公藤内酯联合伊达比星在急性髓系白血病干细胞凋亡中的作用

目的研究IC_(20)浓度(5 nmol/L)的雷公藤内酯(TPL)联合IC_(50)浓度(27 nmol/L)的伊达比星(IDA)能否通过下调MDR1基因表达水平诱导急性髓系白血病(AML)干细胞凋亡。方法从KG1a细胞株中分选CD34^+CD38^-亚群,将其作为AML干细胞模型;分成空白对照组、TPL组、IDA组、联合组。空白对照组:培养液中不含TPL及IDA;TPL组:培养液中含IC_(20)浓度(5 nmol/L)的TPL;IDA组:培养液中含IC_(50)浓度(27 nmol/L)的IDA;联合组:培养液中含IC_(20)浓度(5 nmol/L)的TPL及IC_(50)浓度(27 nmol/L)的IDA。Annexin V-FITC/PI双标法流式细胞术检测处理后AML干细胞的凋亡情况;RT-PCR法检测上述4组中AML干细胞MDR1 mRNA表达水平的变化;Western blot检测上述4组AML干细胞给药后MDR1蛋白表达水平的变化。结果空白对照组、TPL组、IDA组及联合组中AML干细胞在处理24 h后凋亡率分别为(0.37±0.29)%、(18.07±0.32)%、(20.13±0.06)%和(60.17±1.45)%,联合组中AML干细胞凋亡比例显著高于TPL组及IDA组,差异有统计学意义(P<0.001)。RT-PCR结果显示TPL组、IDA组及联合组中AML干细胞内MDR1 mRNA表达水平均有不同程度下调,空白对照组、TPL组、IDA组及联合组中MDR1 mRNA表达水平分别为0.927±0.084、0.462±0.048、0.396±0.019和0.231±0.023,联合组MDR1 mRNA表达水平均显著低于TPL组及IDA组,差异有统计学意义(P<0.001)。Western blot结果显示TPL组、IDA组及联合组AML干细胞内MDR1蛋白表达水平均不同程度下调,其中联合组更加明显。结论 IC_(20)浓度的TPL可显著提高IC_(50)浓度的IDA对AML干细胞的凋亡诱导作用,其机制可能与抑制MDR1基因及蛋白的表达有关。