脱细胞软骨基质对巨噬细胞极化的调控

背景:细胞外基质来源的生物材料在组织工程再生领域应用广泛,近年来生物材料对巨噬细胞表型极化作用受到极大关注。目的:探究脱细胞软骨基质(decellularized cartilage extracellular matrix,DCM)及胃蛋白酶处理脱细胞软骨基质(pepsin treated decellularized cartilage extracellular matrix,PDCM)对巨噬细胞表型极化的调控作用。方法:采用物理粉碎、反复冻融及差速离心方法制备猪关节软骨脱细胞软骨基质(DCM),溶解于胃蛋白酶溶液内得到其生物降解产物(PDCM)。将小鼠巨噬细胞系RAW264.7分5组培养:对照组加入巨噬细胞完全培养基,M1型阳性对照组加入含脂多糖+干扰素γ的完全培养基,M2型阳性对照组加入含白细胞介素4的完全培养基,PDCM组加入含PDCM的完全培养基,胃蛋白酶组加入含胃蛋白酶的完全培养基,培养18 h后进行CD86(M1型巨噬细胞)、CD206(M2型巨噬细胞)免疫荧光染色鉴定。另外将小鼠巨噬细胞系RAW264.7分6组培养:对照组、M1型阳性对照组、M2型阳性对照组、胃蛋白酶组、DCM涂布组与PDCM涂布组,培养24 h后进行CD86、CD206流式细胞术检测。结果与结论:①免疫荧光结果显示,PDCM组诱导巨噬细胞CD86表达阳性比约为0.13,诱导巨噬细胞CD206表达阳性比约为0.5;②流式细胞术检测结果显示,DCM诱导巨噬细胞表达CD86(20.1%)及CD206(28.8%),PDCM只诱导巨噬细胞表达CD206(23.2%);③结果表明,DCM及其生物降解产物PDCM具有促进巨噬细胞M2型极化的作用。