抗生素诱导SPF级BALB/c小鼠胃肠道白念珠菌定植模型

目的:建立抗生素诱导SPF级BALB/c小鼠胃肠道白念珠菌定植模型.方法:SPF级♀Balb/c小鼠随机饮用抗生素头孢曲松水溶液5d(120h)后,单次口服灌胃107CFU(50μL)白念珠菌以诱导其定植.并运用平板计数和基于细菌16SrDNA的PCR-DGGE技术分析小鼠胃肠道的白色念珠菌定植与微生物区系变化.结果:抗生素处理5d后,减少了胃肠道99.99%以上的可培养厌氧菌和肠杆菌,与处理前相比,有极显著差异(厌氧菌:8.53±0.31Log10CFU/gvs4.18±0.90Log10CFU/g,P<0.01;肠杆菌:3.67±0.14Log10CFU/gvs0,P<0.01),而且DGGE图谱分析显示,抗生素处理后小鼠细菌微生物区系的多样性明显减少(条带数由27-32条减少到2-7条).对抗生素处理小鼠单次口服灌胃107CFU白念珠菌2d后,在小鼠胃、小肠、盲肠和大肠检测到大量的C.albicans,数量分别为4.44±0.02Log10CFU/tissue,5.05±0.19Log10CFU/tissue,5.62±0.06Log10CFU/tissue,4.95±0.14Log10CFU/tissue,并且单次口服灌胃白念珠菌1wk后,小鼠胃肠道内仍维持有4.01±0.06Log10CFU/g的白念珠菌定植.与正常Control组和Antibioticonly组相比,Antibiotic+Candida模型组小鼠肠杆菌增殖了10到100倍(3.65±0.16Log10CFU/g,3.21±0.18Log10CFU/gvs5.42±0.33Log10CFU/g,P<0.05);同时DGGE图谱分析显示,Antibiotic+Candida模型组小鼠细菌微生物区系多样性较低(条带数Antibiotic+Candida/22-24条,Control/28-34条和Antibioticonly/27-34条),各小鼠细菌微生物区系之间的相似性为63.8%-67.0%.结论:抗生素处理诱导了胃肠道微生物区系紊乱,导致了白念珠菌在SPF级Balb/c小鼠胃肠道定植成模.

巴马香猪类固醇激素急性调节蛋白(StAR)基因真核表达载体的构建及鉴定

本试验通过RT-PCR扩增巴马香猪StAR基因,分析其序列的结构特点并构建真核表达载体,为StAR基因在猪睾丸间质细胞中的超量表达研究奠定基础。根据NCBI中猪StAR基因序列设计并合成引物,以巴马香猪睾丸组织总RNA为模板进行RT-PCR,将所得目的基因与pEGFP-C1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-C1-StAR。结果显示,连接到pSURE-T克隆载体上的目的片段测序结果为858碱基组成,编码含有285个氨基酸残基的蛋白质,与NCBI报道的StAR基因比对,核酸同源性在99.3%以上,并成功构建了重组载体pEGFP-C1-StAR。