人HMGB1 A box和B box cDNA的克隆与表达

目的:克隆人HMGBl中的A box(1-85 aa)和B box(88- 162 aa)的cDNA,构建重组原核表达载体并对其诱导表达,为检测其生物学活性做准备. 方法:提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增出人HMGB1 A box和B box的cDNA序列,并分别克隆至载体pUC19进行序列测定,随后分别构建于高效原核表达载体pQE-80L/DHFR中,经IPTG诱导4 h后,可表达M,约35 000,34 000的融合蛋白.Western Blotting鉴定所表达的目的蛋白. 结果:经RT-PCR扩增得到了255 bp和225 bp的DNA片段,经序列分析与GenBank中报道的已知序列完全一致, 构建了含融合蛋白的重组表达质粒,诱导表达了目的蛋白,经Western Blotting证实,在Mr分别约为35 000和34 000处有两条清楚的蛋白带. 结论:HMGB1 A box和B box cDNA的克隆,原核表达载体的构建及目的蛋白的表达鉴定,为进一步研究HMGB1 A box和B box的生物学功能奠定了基础.