模拟失重大鼠肝组织中NF-κB的表达及意义

目的:研究模拟失重环境下大鼠肝脏组织中NF-κB的表达及意义.方法:成年♂Wistar大鼠84只,随机分为模拟失重组和对照组,每组又分别设1、2、3、4、5、6和7d共7个时相点,每时相点模拟失重和同步对照各6只大鼠.采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.各组大鼠肝组织中NF-κB表达分别应用Western blot和免疫组化PV-6001法进行检测.结果:在尾悬吊1-2d期间,大鼠焦躁不安,饮食量减少,精神较差,活动减弱,2-3d后有所适应,逐渐恢复稳定状态.模拟失重环境下大鼠肝脏NF-κB表达水平明显升高,1、2d悬尾组大鼠肝组织中NF-κB表达率明显高于对照组(F=271.36,P<0.01),其后,NF-κB表达水平呈明显下降趋势(F=60.68,P<0.05),5-7d悬尾组NF-κB表达水平接近对照组,差异无统计学意义.NF-κB阳性产物主要见于实验大鼠肝细胞内,亦见于炎细胞及Kupffer细胞内,可分为胞质型、核型、核浆型等三个类型,单独或混合存在.结论:模模拟失重使大鼠肝脏组织中NF-κB表达发生明显变化,提示在失重环境中肝脏NF-κB的早期高表达和逐渐恢复过程与失重应激反应及失重耐受有密切关系.

肝硬变大鼠肝部分切除术后残肝TGF-α、HGF、PCNA和IGFBP-1s mRNA的变化

目的:探讨肝硬变状态下肝部分切除术后肝细胞和KCTGF-α、HGF、PCNA和IGFBP-1s的mRNA表达,进一步阐明KC在肝细胞再生中的作用。方法:复制我们建立的大鼠肝硬变肝切除模型,分离肝细胞和KC,提取RNA,采用Northern杂交。结果:KC其HGF mRNA表达较肝细胞为早,在术后6h点达到高峰,但肝细胞TGF-α mRNA表达含量明显高于KC的表达。肝细胞IGFBP-1s mRNA的表达含量低,术后6h点相对较高,KC IGFBP-1s mRNA未见表达。肝细胞PCNA mRNA的表达在术后6h其含量达到最低点,明显受抑制。结论:HGF和TGF-α mRNA表达与肝硬变大鼠的肝细胞再生密切相关,而TGF-α是肝细胞再生中最重要的物质。IGFBP-1s mRNA表达降低反应了肝硬变大鼠术后肝细胞代谢明显受损,而PCNA mRNA表达可提示肝细胞增生能力。

大鼠肝部分切除术后肝窦内皮细胞对肝细胞增生的影响

目的:探讨大鼠肝部分切除术后肝窦血管内皮细胞(LSEC) 对再生肝细胞增生的影响. 方法:建立Wistar大鼠70%的肝切除模型和肝窦血管内皮细胞、肝细胞分离与培养方法,在术后不同的时相点分离残肝的肝细胞和肝窦血管内皮细胞,进行培养.实验分组: 肝部分切除组(PO)和假手术组(SO);肝细胞培养分两组:A组(肝细胞)、B组(肝细胞+LSEC上清液),利用放射免疫法测定肝细胞DNA合成率、免疫组化方法测定肝细胞PCNA表达指数的变化. 结果:在术后的6、24 h,B组的肝细胞的PCNA表达指数较A组显著升高(5.9±0.1 vs 8.9±0.1 P<0.05;38.6±2.6 vs 58.0±3.9 P<0.01).而且B组肝细胞的DNA合成量较A组显著升高(226±18 vs 8.9±0.1 P<0.05;38.6±2.6 vs 58.0±3.9 P<0.011. 结论:体外实验证实肝部分切除术后肝窦内皮细胞上清可以促进肝细胞的增生,促进肝细胞的DNA合成,增强再生肝细胞增生活性.

mtTFA、NRF-1对冷保存-再灌注肝移植大鼠线粒体DNA ATPase6基因表达的调节

目的:研究线粒体DNA上游调节基因mtTFA和NRF-1对冷保存肝移植大鼠肝细胞线粒体DNA ATPase6基因表达的影响,探讨mtTFA和NRF-1对冷保存肝移植大鼠肝细胞线粒体DNA调节作用及其机制.方法:Wistar大鼠186只,采用改良"二袖套法"制作大鼠肝移植模型,动物随机分为A组:冷保存30min;B组:冷保存6h;C组:冷保存12h;和D组(假手术对照组),分别于制模后于12h、24h、3d、5d、7d采集标本,保证每时相点存活大鼠6只.观察各组大鼠肝脏ATP含量.采用RT-PCR方法检测mtDNA ATPase6 mRNA、mtTFA和NRF-1 mRNA的表达变化.结果:冷保存再灌注后早期(12h),A、B、C三组mtTFA mRNA表达降低,与A、B组相比,C组最为显著(0.57±0.05vs0.87±0.11,0.69±0.10,P<0.05),NRF-1 mRNA表达变化与mtTFA mRNA相一致.24h后各组mtTFA及NRF-1 mRNA表达开始升高,ATPase6表达和肝组织ATP含量也升高,并且升高趋势与mtTFA及NRF-1 mRNA表达增高基本一致.结论:mtTFA和NRF-1可能通过基因转录调节ATPase6基因表达,改变线粒体呼吸链转运电子、合成ATP的能力.

细胞因子与肝再生

肝脏实质细胞与非实质细胞的相互作用是肝脏对外界刺激的最基本的生理和病理应答,非实质细胞在肝部分切除术后肝再生的应答过程中起着重要的调节作用,调节着肝细胞的代谢和生长,而细胞与细胞之间相互作用的桥梁主要来自于细胞因子,细胞因子在肝再生过程中又起着非常重要的作用.目前研究较多的细胞因子主要有肝细胞生长因子(HGF)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、转化生长因子α(TGF-a)、转化生长因子β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)、白介素(IL-1,IL-6)等.现将有关研究进展综述如下.

脾静脉结扎诱导继发性脾功能亢进犬动物模型的评价

目的:介绍并评价脾静脉结扎诱导的继发性脾功能亢进犬动物模型。方法:18只健康成年杂种狗随机分为Ⅰ组(对照组n=4)、Ⅱ组(脾静脉结扎n=10)和Ⅲ组(脾静脉结扎+脾切除,n=4),通过结扎狗的脾静脉主干和脾静脉属支引起淤血性脾肿大;脾静脉结扎后第3周第Ⅲ组行脾切除术。定期观察动物外周血细胞变化以及影像学、组织病理学改变。结果:脾静脉结扎后1wk内外周血红细胞、血小板开始下降,第3周末二者下降明显(Ⅰ组红细胞和血小板计数分别为(6.8+1.2)×10^(12)/L、(398±58)×10~9/L,Ⅱ组为(5.1±0.7)×10^(12)/L、(230±86)×10~9/L,分别P<0.01和P<0.05);红细胞和血小板减少、脾脏肿大可持续9wk以上;但脾静脉结扎后白细胞水平无显著改变,脾切除术后2wk红细胞和血小板逐渐恢复正常。脾静脉结扎3wk后脾脏组织病理学改变逐渐符合慢性脾脏淤血改变。结论:脾静脉结扎方法简单,可以建立确切的继发性脾功能亢进,可以作为脾功能亢进外科或介入治疗的较理想模型。

选择性门静脉栓塞后肝癌二期切除

目的探讨 B 超引导下经皮经肝细针穿刺术前选择性门静脉栓塞(POSPVE)后不能手术切除的原发性肝癌(HCC)二期切除的可能性.方法 26例不能手术切除的 HCC 患者行 POSPVE,观察手术成功率及术后不良反应、肝功能改变、各肝叶体积及肝切除率的动态变化、二期手术切除率等指标.结果 POSPVE 成功24例(92.3%),右侧门静脉支栓塞的21例栓塞后1wk、2wk、3wk,右肝体积逐步减少,左肝体积逐步增大,肝切除体积分数由术前的66%减至术后1w 时的65%、2w时的63%、3w 时的61%.POSPVE 后出现不同程度的肝区隐痛、恶心呕吐、低热和以肝酶、胆红素升高为主的肝功能减退.POSPVE 后2wk-3wk,12例(46.2%)完成了肝切除术.结论 POSPVE 扩大肝癌肝切除手术的适应症,提高手术的安全性,具有临床实用价值.