幽门螺杆菌感染与胃癌前病变演化的关系

目的:了解幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)长期感染是否促进胃黏膜肠上皮化生和异型增生的形成与发展,评价5a随访根除Hp感染对胃癌前病变的作用并探讨其机制.方法:采用前瞻性队列研究方法,对首次胃镜检查诊断为慢性胃炎而不伴有肠上皮化生和异型增生的患者作为入选病例,入选时Hp阳性患者80例,Hp阴性者30例.Hp阳性患者根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治疗.全部病例跟踪随访5a.并采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组织化学染色对Hp阳性患者Hp根除前后及Hp阴性者胃黏膜上皮细胞凋亡和增生情况进行原位观察和比较.结果:Hp阳性观察组肠上皮化生的发生率(32.6%)显著高于Hp阴性对照组(12.0%,χ2=4.147,3.893,P<0.05)和Hp根除观察组(12.9%,χ2=3.869,P<0.05).Hp阳性观察组异型增生的发生率(19.6%)显著高于Hp阴性对照组(4.0%,χ2=3.893,P<0.05).Hp根除观察组肠上皮化生和异型增生的发生率与Hp阴性对照组无统计学差异.Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数及PCNA指数(12.7%,14.6%)均显著高于Hp阴性患者(2.9%,8.0%,t=7.241,6.368,P<0.01),Hp根除后胃黏膜上皮细胞PCNA指数和凋亡指数(14.3%,12.9%)均显著下降(9.2%,3.6%,t=5.642,7.410,P<0.01),而Hp未根除者上述指标则无显著性变化.结论:Hp感染可能通过刺激胃黏膜上皮细胞凋亡与增生的调节紊乱,使胃黏膜的不稳定性增加,促进胃黏膜肠上皮化生和异型增生的形成与发展,从而增加患胃癌的危险性.根除Hp感染能明显降低肠上皮化生和异型增生的发生率.

正反义人端粒酶RNA组分(hTR)基因真核表达载体的构建

目的构建正义和反义端粒酶 RNA 组分((human telomeraseRNA components,hTR)基因真核表达载体.方法用 Mlu Ⅰ和 Sal Ⅰ从 pGRN83质粒上切下约579 bp 的hTR cDNA 片段,分别定向连入 pcl-neo 的 Mlu Ⅰ/Sal Ⅰ和Mlu Ⅰ/Xho Ⅰ酶切位点上,即构建成了 hTR 的正反义表达载体,并经酶切鉴定和测序确认.结果经酶切鉴定和测序证明,所构建的正反义 hTR 真核表达载体与设计完全一致.结论成功构建了人端粒酶 RNA 的正反义真核表达载体,为进一步研究正反义 hTR 基因转染对胃癌细胞端粒酶及生物学行为的影响奠定了基础.

根除幽门螺杆菌对胃癌前病变组织中bax蛋白表达的影响

目的:研究Hp感染及根除治疗对胃癌前病变组织中促凋亡基因Bax蛋白表达的影响,探讨Hp的致病机制及其在胃癌发生中的作用.方法:采用快速尿素酶试验、Warthin-starry银染色检测Hp;采用免疫组织化学SP法检测72例胃癌前病变组织中Bax蛋白的表达情况,以及Hp阳性患者Hp根除前后胃癌前病变Bax蛋白表达的变化.结果:Bax蛋白在肠上皮化生及不典型增生组织中均有不同程度的表达,其阳性表达率为63.9%.Hp阳性胃癌前病变组Bax蛋白阳性表达率(72.3%)显著高于Hp阴性胃癌前病变组(48.0%,χ2=4.191,P<0.05),Hp感染与Bax阳性表达及分级呈正相关(r=0.978,P<0.01).经三联治疗根除Hp后,Bax蛋白阳性表达率(70.3%)较治疗前显著降低(43.2%,χ2=5.506,P<0.05),而Hp仍为阳性者Bax蛋白阳性表达率则无变化.结论:Hp感染可以促进促凋亡基因Bax蛋白的表达,这可能是Hp感染诱导胃黏膜上皮细胞凋亡的主要机制之一,从而导致细胞凋亡和增生的调节紊乱,使胃黏膜上皮不稳定性增加,使其具有较高的癌变易感性.根除Hp感染可纠正Bax基因表达的异常,对预防或减缓胃癌的发生可能具有重要意义.目的:研究Hp感染及根除治疗对胃癌前病变组织中促凋亡基因Bax蛋白表达的影响,探讨Hp的致病机制及其在胃癌发生中的作用.方法:采用快速尿素酶试验、Warthin-starry银染色检测Hp;采用免疫组织化学SP法检测72例胃癌前病变组织中Bax蛋白的表达情况,以及Hp阳性患者Hp根除前后胃癌前病变Bax蛋白表达的变化.结果:Bax蛋白在肠上皮化生及不典型增生组织中均有不同程度的表达,其阳性表达率为63.9%.Hp阳性胃癌前病变组Bax蛋白阳性表达率(72.3%)显著高于Hp阴性胃癌前病变组(48.0%,χ2=4.191,P<0.05),Hp感染与Bax阳性表达及分级呈正相关(r=0.978,P<0.01).经三联治疗根除Hp后,Bax蛋白阳性表达率(70.3%)较治疗前显著降低(43.2%,χ2=5.506,P<0.05),而Hp仍为阳性者Bax蛋白阳性表达率则无变化.结论:Hp感染可以促进促凋亡基因Bax蛋白的表达,这可能是Hp感染诱导胃黏膜上皮细胞凋亡的主要机制之一,从而导致细胞凋亡和增生的调节紊乱,使胃黏膜上皮不稳定性增加,使其具有较高的癌变易感性.根除Hp感染可纠正Bax基因表达的异常,对预防或减缓胃癌的发生可能具有重要意义.

KHI1正反义基因对MHCC97-H肝癌细胞KAI1蛋白表达的影响

目的:构建KAI1基因正、反义真核表达质粒,了解其对高转移潜能的MHCC97—H肝癌细胞KAI1蛋白表达的影响.方法:利用亚克隆技术构建KAI1基因正、反义真核表达质粒,并用脂质体法将其分别转入高转移潜能的MHCC97-H肝癌细胞系,通过免疫细胞化学SP法检测KAI1蛋白表达情况。结果:限制性内切酶分析证明两个重组子的结构均与KAI1正、反义基因表达质粒的预期结构一致。免疫细胞化学SP法检测显示,转入正义KAI1基因后的肝癌细胞KAI1蛋白染色加深,(细胞积分光密度 integra oculus dehter,IOD20.127 ± 5.099 vs 12.675±1.921,P<0.01);而转入反义KAI1基因的肝癌细胞则KAI1蛋白染色变浅,(IOD 8.681±2.472 vs 12.675 ± 1.921,P<0.01).结论:成功构建了KAIl基因正、反义真核表达质粒.KAI1正义基因能上调肝癌细胞KAI1蛋白的表达,相反,KAI1反义基因则能下调肝癌细胞KAI1蛋白的表达.

致敏树突细胞及其亚细胞成分对荷胃癌小鼠的免疫治疗作用研究

目的:了解胃癌组织中DC的功能状态,探讨DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes用于防治胃癌的可能性,旨在为胃癌的治疗探索一条新的途径. 方法:利用致敏DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes对荷胃癌小鼠进行治疗,观察其免疫治疗效果. 结果:荷胃癌小鼠经胃癌细胞RNA致敏的DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes治疗后,小鼠腹水产生率、肿瘤转移率、动物的存活率、瘤体平均质量等指标均明显优于对照组(P<0.01),局部组织中IL-12、IFNγ和IL-18的基因表达水平都明显升高(P<0.01),肿瘤局部CD4+、CD8+ 细胞数量增加(P<0.05),TIL细胞毒活性明显增强. 结论:胃癌RNA致敏的DC及其所分泌的亚细胞成分exoso- mes,能促进胃癌抗原的提呈,并启动和增强局部的抗瘤免疫功能,改善临床症状和宿主的生存质量,对荷胃癌小鼠具有一定的免疫治疗效果.

miR-29在胃癌患者血清中的表达及其对预后的影响

目的观察胃癌患者术前、术后血清标本中miR-29的表达情况及其与预后的关系,探讨胃癌患者血清中miR-29的检测在胃癌早期诊断及预后判断中的价值。方法采用实时荧光定量PCR技术检测46例胃癌患者手术前后及30例健康成年人血清中miR-29的表达水平。结果胃癌患者血清中miR-29表达水平显著低于健康成年人;胃癌患者术后血清中miR-29表达水平较术前上调,且上调水平越高预后则越佳。结论 miR-29在血清中的表达水平可作为胃癌早期诊断及预后判断的miRNA指标。

mRNA致敏树突细胞对胃癌的免疫治疗作用研究

目的:了解DC在胃癌胃黏膜中的功能状态,探讨DC用于胃癌等实体瘤防治的可能性,旨在为胃癌的治疗探索一条新的途径. 方法:利用致敏DC治疗胃癌,以观察其对荷胃癌小鼠的免疫治疗效果. 结果:荷胃癌小鼠经胃癌细胞RNA致敏的DC治疗后,小鼠腹水产生率、肿瘤转移率、动物的存活率、平均瘤体质量等指标分别为75%(6/8)、25%(2/8)、75%(6/8)、(2.04±0.33 g),均优于对照组(P<0.01);局部组织中IL-12、IL-18 和IFN γ的基因表达水平都明显升高(P<0.01);肿瘤局部CD4+、CD8+细胞数量分别为0.71±0.25/μm2和0.67±0.22/μm2, P<0.05),TIL细胞毒活性明显增强. 结论:胃癌RNA致敏的DC,能促进胃癌抗原的提呈并启动和增强局部的抗瘤免疫功能,改善临床症状和生存质量, 对荷胃癌小鼠具有一定的免疫治疗效果.

p21基因过表达对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

1材料和方法1.1材料2.1kb 的 P21全长 cDNA 片段由 Wade HarPer 教授惠赠,真核表达载体 PCLneo 和 T_4DNA 连接酶(Promega),Xho Ⅰ、Stu Ⅰ等内切酶(北方同正生物工程公司),DMEM 培养基、阳离子脂质体 DOTAP(Roche),小牛血清(华美公司),P21,P53mAb(中山公司),所用引物均由上海生物工程公司合成,

Hp^+CAG患者胃粘膜上皮胃泌素及其受体基因转录和蛋白的表达

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的研究已不断深入[1-20].我们的实验结果mRNA和蛋白表达减少,而Hp对CCK-B基因的mRNA表达影响不大,那么,根除Hp是否可逆转上述基因的表达?为此,我们通过Hp感染阳性的萎缩性胃炎患者口服丽珠胃三联药物1 wk,采用免疫组化染色及RTPCR等技术研究Hp感染对胃粘膜上皮促胃液素及其受体基因mRNA和蛋白表达的影响。

胃癌组织bcl-2基因表达与细胞凋亡和增生的关系

目的:探讨胃癌细胞bcl-2基因表达水平与肿瘤细胞增生活性及细胞凋亡程度的关系. 方法:胃癌组织53例,用原位杂交及免疫组化染色法分别检测bcl-2 mRNA,bcl-2蛋白和增生细胞核抗原(PCNA) 的表达,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较. 结果:胃癌组织表达bcl-2 mRNA 41例(77.4%),表达Bcl-2 蛋白43例(81.1%),X2检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性.胃癌53例增生期细胞标记物PCNA表达及凋亡细胞的阳性率均为100%,细胞凋亡和细胞增生指数呈显著性负相关(r=-0.993,P<0.01).随胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平升高,PCNA阳性细胞指数相应增加,肿瘤凋亡细胞指数则相应减少,Bcl-2蛋白+++组与++组间(t=2.552, 2.699,P<0.05)及前两组分别与-组和+组间(t=4.487, 3.975,2.807,3.094,4.885,5.816,3.404,3.895, P<0.01)凋亡和增生细胞指数差异均有显著性. 结论:胃癌细胞bcl-2基因高表达可引起细胞凋亡减少与过度增生.

端粒酶逆转录酶肽-核酸病毒样颗粒疫苗的制备及免疫原性鉴定

目的:设计人端粒酶逆转录酶(hTERT)的新型病毒样颗粒疫苗,并鉴定其表达蛋白的免疫原性和疫苗转染效率．方法:合成阳离子抗原肽K18P9,同时将人粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)和hTERT克隆入真核双表达载体pTCAE中,再将多肽和核酸疫苗结合于同一疫苗颗粒,并将其转染入真核细胞内.ELISA法和免疫印迹法检测hGM-CSF和hTERT的免疫原性,同时评价疫苗的转染效率．结果:酶切及测序结果证实已成功构建含hGM-CSF和 hTERT的载体pTGH,电镜等结果证实核酸被包装肽包裹形成病毒样颗粒,ELISA法和免疫印迹法证实疫苗在体外对真核细胞的转染效应以及hGM-CSF和hTERT 的免疫原性,与阳性对照DOTAP组比较,疫苗转染效率约可达78．5％．结论:成功构建了具有免疫原性的hTERT肽-核酸病毒样颗粒疫苗．

转化生长因子βⅡ型受体在胃癌组织中表达的研究

目的:研究转化生长因子β(TGFβ)Ⅱ型受体在胃癌组织中的表达及其意义. 方法:应用免疫组织化学方法,对20例正常胃粘组织及74 例胃癌组织(高中分化腺癌32例,低分化腺癌23例,黏液腺癌14例,印戒细胞癌5例)TGFβⅡ型受体的表达情况进行了研究. 结果:在正常胃黏膜组织,TGFβⅡ型受体主要表达于腺体的体底部;在胃高中分化腺癌组织中,TGFβⅡ型受体表达减少(P<0.05,vs 正常胃黏膜);在低分化腺癌及黏液印戒细胞癌中,其表达明显减少(P均<0.01,vs 正常胃黏膜). 结论:TGFβⅡ型受体表达的减少可能在胃癌的发生发展中起了一定的作用.

肝细胞生成素快速诱导肝再生相关基因mRNA的表达

目的:观察人重组肝细胞生成素(rhHPO)迅速诱导瞬时早期反应基因表达情况.方法:利用PT-PCR方法观察HPO刺激原代培养大鼠肝细胞24h内选择性肝再生相关基因mRNA表达情况.结果:HPO在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅速诱导瞬时早期反应基因c-fos,LRF-1d的表达,对PC3和Tec基因也有诱导表达的作用,高峰出现在刺激后的0.5-2h,表达量增加3-5倍.结论:HPO可迅速诱导瞬时早期反应基因表达,可能是HPO促肝细胞增生的分子作用机制,首次报道PC3和Tec基因是一种与肝再生调控密切相关的早期反应基因.

转化生长因子βⅡ型受体在胃癌中表达的研究

目的:观察转化生长因子(TGFβ)Ⅱ型受体基因Poly(A)_(10)片段在胃癌组织中的突变情况。 方法:利用PCR/SSCP方法,对10例正常胃组织,21例肠化生组织,10例不典型增生,及62例胃癌组织中TGFβⅡ型受体基因Poly(A)_(10)片段的突变情况进行了研究。 结果:在62例胃癌组织中,有4例TGFβⅡ型受体基因Poly(A)_(10)。片段发生了突变,在正常胃黏膜组织、肠化生组织及不典型增生组织中,未见该片段异常。 结论:胃癌组织中TGFβⅡ型受体基因的突变对胃癌发生发展起了重要作用。