抑制性消减杂交技术及其在感染病学中的应用

抑制性消减杂交技术(Suppressive subtractive hybridization, SSH)是近年来兴起的一种检测差异表达基因的方法,广泛用于寻找疾病及肿瘤相关基因、生长和发育相关基因、药物的筛选和靶向治疗及其明确基因的功能等.本文从SSH技术的原理、效率、存在的问题和展望及其在感染病学中的应用等方面进行了综述.

多粘菌素B及其模拟肽体外抗内毒素的实验研究

方法:LPS(或FITC-LPS)100μg/L分别与PMB 100mg/L、peptide 0 100mg/L、peptide1 100mg/L、PBS,37℃孵育30min后(分别加入50mL/L NHS)刺激PBMC,用流式细胞仪检测FITC-LPS与PBMC的结合能力及CD14表达;ELISA法检测培养上清中细胞因子TNFα、IL-6含量。结果:FITC-LPS分别与PMB、peptidel孵育后,细胞膜平均通道荧光显著减少,LPS与PBMC的结合能力显著降低(分别为8.1±1.8 vs 15.8±4.5 P<0.01;8.5±2.0 vs15.8±4.5 P<0.01)。100μg/L LPS刺激PBMC3h后CD14阳性率明显增加;LPS分别与PMB和peptidel预孵育后可显著降低LPS刺激PBMC细胞膜CD14表达(分别为45.5±6.2％vs 68±5.5％ P<0.01;43.2±4.1％ vs 68±5.5％ P<0.01),LPS刺激PBMC分泌TNF-α和IL-6显著增加,LPS分别与PMB和peptidel预孵育后能显著减少细胞因子TNF-α(分别为15.30±1.0 vs 45.9±5.7 P<0.01;18.2土0.9 vs45.9±5.7 P<0.01)和IL-6分泌(分别为50.5±4.2 vs 176.4±12.1 P<0.01;58.1± 4.1 vs 176.4±12.1 P<0.01)。结论:多粘菌素B及其模拟肽(Peptidel)可能通过下调PBMC CD14表达,降低细胞因子水平来减少LPS诱导的炎症反应。

枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊对非酒精性脂肪性肝炎患者血清NO水平的影响

目的探讨枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊对非酒精性脂肪性肝炎患者血清NO的影响。方法选择健康正常成人30例作为正常对照组(A组),非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)共60例,随机分为常规治疗组(B组)和观察组(C组)各30例,B组采用常规保肝治疗,C组常规保肝治疗的同时联用枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊治疗4周,比较各组治疗前后血清内毒素、丙二醛(MDA)、NO和ALT水平的变化。结果与A组比较,治疗前NASH组血清中内毒素、MDA和NO的浓度显著增高([168.37±24.13)EU/L与(110.53±18.33)EU/L,t=11.69,P<0.01;(15.91±5.46)μmol/L与(8.61±2.98)μmol/L,t=6.81,P<0.01;(66.50±12.54)μmol/L与(44.95±11.45)μmol/L,t=7.89,P<0.01];B组和C组治疗前比较血清内毒素、MDA、NO、ALT无显著变化(P>0.05),B组治疗前后比较血清内毒素、NO无显著变化(P>0.05),但MDA及ALT降低(P<0.05或P<0.01),C组治疗后与治疗前比较血清中内毒素、MDA、NO和ALT的浓度显著降低(P<0.01),C组与B组治疗后比较血清中内毒素、MDA、NO和ALT的浓度显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 NASH患者血清中内毒素、MDA和NO水平增高,提示NO可能参与了NASH的发生发展,枯草杆菌肠球菌二联活菌胶囊可降低NASH患者血清中内毒素、MDA和NO水平,改善炎症程度。

乳果糖降低非酒精性脂肪性肝炎患者肠道通透性及血清内毒素水平

目的探讨乳果糖对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)患者肠道通透性的干预作用。方法选择健康正常成人30例作为正常对照组(A组),非酒精性脂肪性肝炎共60例,随机分为NASH对照组(B组)和乳果糖干预组(C组)各30例,其中C组给予乳果糖(10 mL/d)进行干预。检测所有被研究者的血清内毒素、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸及ALT的浓度。干预4周后,再次检测B、C两组的血清内毒素、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸及ALT的浓度。结果与A组比较,治疗前B、C两组内毒素、DAO、D-乳酸水平显著增高(P<0.01),B组干预前后比较,内毒素、DAO、D-乳酸及ALT水平无显著改变(P>0.05),而C组干预前后比较,内毒素、DAO、D-乳酸及ALT水平显著降低(P<0.01)。结论 NASH患者血清内毒素水平及肠道通透性增高,乳果糖可降低NASH患者肠道的通透性及血浆内毒素水平。

非酒精性脂肪性肝炎患者肠道菌群失调与肠道通透性及血清内毒素的相关性研究

目的探讨非酒精性脂肪性肝炎患者肠道菌群失调与肠道通透性及血清内毒素的相关性。方法选择肠道菌群中具有代表性的细菌共8种进行培养。研究对象为健康成人(A组)和非酒精性脂肪性肝炎(B组)各30例,计数两组肠道菌群中8种细菌的数量,检测所有被研究者的血清内毒素、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸及TNF-α的浓度,比较两组细菌数量和血清指标的变化,并进行相关分析。结果与A组比较,B组双歧杆菌、乳杆菌和拟杆菌的菌落数显著减少(P<0.01或P<0.05),而肠球菌、肠杆菌的菌落数则有显著增加(P<0.01或P<0.05);酵母真菌、葡萄球菌、梭菌菌落数没有发生显著改变(P>0.05);血清内毒素、DAO、D-乳酸、TNF-α水平显著增高(P<0.01);相关分析显示肠杆菌与内毒素、DAO、D-乳酸相关(r=0.644,P<0.001;r=0.415,P=0.023;r=0.383,P=0.037);血清内毒素和DAO、D-乳酸、TNF-α显著相关(r=0.485,P=0.007;r=0.477,P=0.008;r=0.490,P=0.006);TNF-α则与DAO、D-乳酸相关(r=0.426,P=0.019;r=0.440,P=0.015)。结论非酒精性脂肪性肝炎患者存在肠道菌群失调、肠道通透性增高及肠源性内毒素血症,肠杆菌的过度生长与肠源性内毒素血症及肠道通透性密切相关。